ГОСТ Р 51435-99 Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 51435-99

(ИСО 8128-1-93)

Группа Н59

 НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

 Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

 Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing apple juice. Method for determination of patulin content using high performance liquid chromatography

ОКС 67.160.20

ОКСТУ 9109

Дата введения 2001-01-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 590-ст

4 Настоящий стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1-93* "Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии", кроме приложения "Библиография"

_______________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.     

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август, 2018 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм

при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см

.

      2 Сущность метода

Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.

      3 Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации "для ВЭЖХ".

3.1 Растворитель: этилацетат.

3.2 Подвижная фаза - раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10%.

3.3 Экстрагирующий раствор - водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм

.

3.4 Ацетатный буфер, рН 4.

Смешивают 16,4 см

уксусной кислоты [

(

)=0,2 моль/дм

] с 3,6 см

раствора ацетата натрия [

(

)=0,2 моль/дм

].

3.5 Уксусная кислота, ледяная.

3.6 Стандартный раствор патулина (

).

3.6.1 Приготовление стандартного раствора

Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см

в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.

Пипеткой переносят 10,0 см

приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см

, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см

.

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 мм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1)

, мкг/см

, вычисляют по формуле

,                                                                  (1)

где

- оптическая плотность стандартного раствора патулина;

- молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм

·моль

·см

(

=14600);

- молярная масса патулина, г/моль;

- постоянная прибора (обычно

=1).

      4 Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм

.

Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:

4.1 Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.

4.2 Обращенно-фазовая колонка ODS

или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:

_______________

ODS - октадецилсилан.

- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;

- длина 250 мм;

- внутренний диаметр 4,6 мм;

- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.

      5 Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

      6 Проведение испытаний

6.1 Приготовление испытуемого раствора

При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

6.1.1 Пробу объемом 5,0 см

экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см

(3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5,0 см

. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2,0 см

.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например в течение 1-2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.

6.1.2 Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см

, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1-2 см

.

6.1.3 Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см

с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см

каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0,5 см

подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).

6.2 Построение градуировочного графика

Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 7,5 см

переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см

, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.

Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см

/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0,01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.

В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см

каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.

6.3 Проведение определения

В хроматограф вводят от 0,010 см

до 0,030 см

испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).

      7 Обработка результатов

Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте

, мкг/дм

, вычисляют по формуле

,                                                                      (2)

где

- концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см

;

- объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см

;

- объем пробы продукта, взятый для экстракции, см

.

      8 Точность метода

8.1 Сходимость результатов

=41,9 мкг/дм

;

=14,9 мкг/дм

,

где

- предел сходимости;

- среднеквадратическое отклонение сходимости.

8.2 Воспроизводимость результатов

=47,5 мкг/дм

;

=22,6 мкг/дм

,

где

- предел воспроизводимости;

- среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.

      9 Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

- метод испытаний;

- результат испытаний;

- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.

Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.