ГОСТ Р 51471-99 Жир молочный. Метод обнаружения растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов.
ГОСТ Р 51471-99
Группа Н19
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ЖИР МОЛОЧНЫЙ
Метод обнаружения растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов
Milk fat. Detection method of vegetable fat by gas-liquid chromatography of sterols
ОКС 67.100.01
ОКСТУ 9209
Дата введения 2001-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 года N 626-ст
3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 3594-76* "Молочный жир. Обнаружение растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов (арбитражный метод)"
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молочный жир, выделенный из молока и молочных продуктов, и устанавливает метод обнаружения растительных жиров и масел методом газожидкостной хроматографии стеринов.
Метод основан на процедуре осаждения стеринов в виде дигитонидов, растворения их в смеси формамида с диметилформамидом с последующей экстракцией стеринов пентаном. Окончательное разделение стеринов производят методом газожидкостной хроматографии.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4165-78 Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 5583-78 (ИСО 2046-73) Кислород газообразный технический и медицинский. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14022-88 Водород фтористый безводный. Технические условия
ГОСТ 20289-74 Диметилформамид. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
__________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ИСО 707-97* Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб
_______________
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО. С 11 августа 2008 г. действует ИСО 707:2008.
3 Аппаратура, материалы и реактивы
3.1 Колонка газохроматографическая стеклянная U-образная или спиральная длиной от 100 до 200 см, внутренним диаметром (3±1) мм. Твердый носитель: кальцинированный диатомитовый, очищенный кислотой и покрытый кремневодородом. Жидкая фаза: смола каучуковая метилсиликоновая, стабильная при температуре от 300 °С. Ячейки размером 80/100 меш (175-150 мкм) или 100/120 меш (150-125 мкм). Массовая доля метилсиликоновой каучуковой смолы на носителе от 2 до 4%.
3.2 Хроматограф газовый, оснащенный пламенно-ионизационным детектором и записывающим устройством.
3.4 Воронка фильтрующая ВФ по ГОСТ 25336 диаметром фильтра 90 мм.
3.5 Азот газообразный по ГОСТ 9293, особой чистоты.
3.6 Водород по ГОСТ 14022.
3.7 Кислород газообразный технический по ГОСТ 5583, первый сорт.
3.8 Формамид по нормативной документации.
3.9 Диметилформамид по ГОСТ 20289.
3.10 н-Пентан ч.д.а. (для хроматографии).
3.11 Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, х.ч.
3.12 Калия гидроокись по ГОСТ 24363, х.ч.
3.13 Масло рапсовое по ГОСТ 8988-77*.
3.14 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, высшей очистки.
3.15 Эфир диэтиловый по [1].
3.17 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.18 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
4 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.
5 Подготовка к анализу
5.1 Подготовка пробы
Для обнаружения растительных жиров и масел в молочном жире, выделенном из молока, сливок, сыра, концентрированного молока, сгущенного молока, мороженого, сухого молока, отбирают пробу, которая должна обеспечить выделение из нее не менее 30 г молочного жира.
5.1.1 Масло сливочное
Пробу продукта массой 50 г расплавляют при температуре не более 50 °С до расслоения на жир и воду. При температуре не более 40 °С пробу фильтруют через сухую фильтровальную бумагу (3.18) так, чтобы вода не попадала на фильтр.
5.1.2 Молоко и сливки
Пробу продукта помещают в центрифугу для получения сливок массовой долей жира 40%. Сливки взбивают до получения масла. Отбирают пробу масла и продолжают подготовку по 5.1.1.
5.1.3 Сметана
Пробу продукта взбивают до получения масла и продолжают подготовку по 5.1.1.
5.1.4 Сыр
Пробу продукта измельчают в растворе с безводным сульфатом натрия до получения зернистой массы.
5.1.5 Концентрированное молоко, сгущенное молоко и мороженое
5.1.6 Сухое молоко
Пробу восстанавливают в дистиллированной воде до получения густой массы и оставляют на 15 мин до набухания белков. Добавляют безводный сульфат натрия. Размельчают с помощью миксера до тех пор, пока не образуется зернистая масса.
5.1.7 Из пробы продукта, подготовленной по 5.1.1-5.1.6, пентаном экстрагируют молочный жир. Пентан удаляют выпариванием на водяной бане до получения прозрачного молочного жира.
5.1.8 Приготовление стеринов
Присоединяют к колбе воздушный конденсатор. Нагревают смесь на водяной бане в течение 30 мин при непрерывном вращении колбы до получения прозрачного раствора.
Дигитонин стерина выделяют из полученного раствора, пропуская его через фильтрующее устройство: фильтровальную бумагу и фильтрующую воронку диаметром фильтра 90 мм.
Фильтровальную бумагу и полученный осадок высушивают при температуре (102±2) °С в течение 10-15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина.
Дигитонин стерина отделяют от фильтра и переносят его в стеклянную бюксу.
5.1.9 Установка чувствительности хроматографа
Рисунок 1 - Газожидкостная хроматограмма стерина молочного жира
5.1.10 Определение эффективности разделения стеринов
Рисунок 2 - Газожидкостная хроматограмма стеринов молочного жира и рапсового масла
Определяют коэффициент разделения по формуле
Коэффициент разделения должен быть не менее 1,0. При коэффициенте разделения 1,5 достигается почти полное разделение. Полное разделение имеет место при коэффициенте более 1,5.
Для измерения ширины основания пика проводят прямые, касательные к точкам перегиба хроматограммы с каждой стороны пика, до пересечения их с основной линией. Ширина основания равняется отрезку на основной линии, концами которого являются точки пересечения касательных с основной линией.
5.1.11 Проведение повседневного контроля
Рисунок 3 - Газожидкостная хроматограмма стеринов соевого масла
Значение относительного времени удержания должно соответствовать:
Холестерин
| 1,00 (около 15 мин) |
Брассикастерин
| 1,13-1,15 |
Кампестерин
| 1,32-1,34 |
Стигмастерин
| 1,44-1,46 |
-ситостерин | 1,66-1,68 |
Измерения по 5.1.10 и 5.1.11 повторяют дважды.
6 Проведение анализа
6.2 Температуру колонки устанавливают от 220 до 250 °С, а систему дозирования дополнительно нагревают на (30±10) °С выше температуры колонки.
6.4 Новые колонки для стабилизации выдерживают при условиях 6.2-6.3 и при отключенном детекторе в течение 16-24 ч.
6.5 Подключают детектор, зажигают пламя и регулируют скорость подачи водорода и кислорода (или воздуха) так, чтобы высота пика хроматограммы холестерина была не менее 50% верхнего предела регистрации записывающего устройства.
6.6 Включают записывающее устройство, подбирают скорость записи и устанавливают перо самописца на нулевую отметку. Подачу водорода, кислорода и включение записывающего устройства производят в соответствии с инструкцией к прибору.
7 Обработка результатов
8 Метрологические характеристики
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)
Библиография
[1] ГФ Х Эфир диэтиловый для наркоза