ГОСТ 22636-77 Спермосан-3. Технические условия (с Изменениями N 1, 2 ред. от 28.06.1991).

ГОСТ 22636-77

Группа Р31

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

 СПЕРМОСАН-3

 Технические условия

 Spermosan-3. Specification

Срок действия с 01.01.1978 г.

до 01.01.1983 г.*

РАЗРАБОТАН Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов

Директор Д.Ф.Осидзе

Руководитель темы Н.Г.Балашов

Исполнители: Н.Г.Балашов, В.Т.Смирнов, В.Н.Родина, М.Е.Евсюков, А.М.Силаев, Г.А.Голикова, А.Ф.Зайцев

Красноярским заводом медицинских препаратов

Директор Л.Н.Позмогов

Исполнитель Л.В.Пикулева

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член коллегии А.Д.Третьяков

ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)

Директор А.В.Гличев

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июля 1977 г. N 1844

ВНЕСЕНЫ: Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.01.90 Постановлением Госстандарта СССР от 20.10.89 N 3133, Изменение N 2, утвержденное и введенное в действие с 01.12.91 Постановлением Госстандарта СССР от 28.06.91 N 1185

Настоящий стандарт распространяется на препарат спермосан-3, представляющий собой нетоксичную для спермиев животных смесь бензилпенициллина (калиевая или натриевая соль), стрептомицина сульфата и растворимого стрептоцида, предназначенную для санации спермы производителей сельскохозяйственных животных.

Требования настоящего стандарта являются обязательными.

(Измененная редакция, Изм. N 2).

 1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Спермосан-3 должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по рецептурам, утвержденным в установленном порядке.

1.2. Спермосан-3 изготовляют смешиванием исходных компонентов препарата в соотношениях, указанных в табл.1.

Таблица 1

Примечания:

1. Массу бензилпенициллина (калиевая или натриевая соль) (

) в граммах вычисляют по формуле

,

где    

- активность бензилпенициллина, ЕД;

1670000 - теоретически рассчитанная активность бензилпенициллина, ЕД/г.

2. Массу стрептомицина сульфата (

) в граммах вычисляют по формуле

,

где  

- активность стрептомицина сульфата, ЕД;

800000 - теоретически рассчитанная активность сульфата стрептомицина, ЕД/г.

1.3. Бензилпенициллин (калиевая или натриевая соль), стрептомицин сульфат и растворимый стрептоцид должны соответствовать требованиям Государственной Фармакопеи СССР и быть безвредными для спермиев сельскохозяйственных животных.

1.4. Допустимое отклонение компонентов по активности (бензилпенициллина и стрептомицина сульфата) и массы стрептоцида растворимого не должно превышать ±10%.

1.5. Допустимые расхождения массы препарата в единице фасовки не должны превышать ±10% от массы препарата, установленной соответствующей рецептурой.

1.6. Препарат по органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.2.

Таблица 2

Наименование показателя	Характеристика и норма
Внешний вид и цвет	Сыпучий, однородный порошок белого цвета со слабым желтым или серым оттенком. Допускается в одном флаконе препарата наличие не более трех черных точек
Запах	Специфический (присущий для антибиотиков)
Растворимость препарата и прозрачность раствора	1000000 ЕД препарата легко растворяется в 100 см дистиллированной воды при температуре 40-50 ° С в течение 5 мин. Раствор прозрачный или слегка опалесцирующий, без осадка
Влажность, %, не более	3,5
Реакция подлинности на бензилпенициллин, стрептомицина сульфат и растворимый стрептоцид	Положительная
Активность бензилпенициллина (суммы пенициллинов) и активность стрептомицина сульфата (в пересчете на стрептомицин-основание) в единице фасовки, ЕД	Соответственно номерам рецептур
Масса растворимого стрептоцида в единице фасовки, г	Соответственно номерам рецептур
Отсутствие микрофлоры	При посеве на питательные среды спермосан-3 не должен давать роста микробов в течение 8 сут
Безвредность:
выживаемость спермиев при добавлении к сперме быка 3%-ного раствора цитрата натрия с концентрацией спермосана-3 1000 ЕД/см , ч, не менее	180
абсолютная выживаемость спермиев, не менее	700
выживаемость спермиев в часах и абсолютная выживаемость спермиев по сравнению с контролем, %, не менее	90

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Спермосан-3 принимают сериями. Серией считают любое количество препарата, изготовленного за один технологический цикл, обозначенного одним номером, выпущенного одной датой и оформленного одним документом о качестве. В документе о качестве должны быть указаны:

наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;

наименование препарата;

номер серии;

дата изготовления препарата;

номер документа о качестве;

дата выдачи документа о качестве;

количество флаконов в серии;

результаты анализа препарата;

штамп ОТК или подпись контролера предприятия-изготовителя;

обозначение настоящего стандарта.

2.2. Каждая серия препарата (за исключением показателя "Безвредность") должна быть проверена отделом технического контроля (ОТК) предприятия-изготовителя.

По показателю "Безвредность" каждая серия препарата должна быть проверена Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветпрепаратов на предприятии-изготовителе.

2.1, 2.2. (Измененная редакция, Изм. N 2).

2.3. Для контроля качества препарата от каждой серии отбирают выборочно по 30 флаконов.

2.4. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному показателю по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве флаконов, отобранных от той же серии препарата. Результаты повторного испытания распространяются на всю серию.

2.5. Контроль препарата по требованию потребителя проводит на предприятии-изготовителе Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов.

(Измененная редакция, Изм. N 2).

 3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Отбор проб

3.1.1. Флаконы с препаратом отбирают из разных мест упаковки. Половину флаконов используют для анализа, а половину оставляют в архиве предприятия-изготовителя.

(Измененная редакция, Изм. N 2).

3.2. Внешний вид и цвет спермосана-3 определяют, осматривая вначале препарат во флаконах. При этом флаконы периодически встряхивают. Для определения внешнего вида и цвета препарата его рассыпают тонким слоем на белый, затем на черный листы бумаги и осматривают при дневном свете или искусственном освещении.

3.3. Запах определяют органолептически.

3.4. Растворимость препарата устанавливают, растворяя в течение 5 мин 1000000 ЕД препарата в 100 см

дистиллированной воды, подогретой до 40-50

°

С.

Прозрачность раствора определяют визуально в проходящем свете при периодическом встряхивании.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5. Определение влажности

3.5.1. Оборудование и реактивы

Шкаф сушильный лабораторный.

Весы аналитические.

Эксикатор по ГОСТ 25336-82.

Стаканчики стеклянные (бюксы) по ГОСТ 25336-82.

Кальций хлористый.

(Измененная редакция, Изм. N 1).        

3.5.2. Проведение испытания

Навеску спермосана-3 массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, помещают в бюксу, предварительно высушенную до постоянной массы. Бюксу с навеской помещают в сушильный шкаф и сушат в течение 3-4 ч при температуре 105°С до постоянной массы. Затем бюксу плотно закрывают, охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе с хлористым кальцием и взвешивают.

3.5.3. Обработка результатов

Влажность (

) в процентах вычисляют по формуле

,

где

- масса навески спермосана-3 до высушивания, г;

- масса навески спермосана-3 после высушивания, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.

3.6. Определение подлинности спермосана-3

3.6.1. Оборудование, материалы, реактивы и растворы

Баня водяная.

Цилиндры мерные вместимостью 10, 50 и 100 см

по ГОСТ 1770-74.

Пипетки стеклянные по ГОСТ 20292-74.

Колбы стеклянные по ГОСТ 1770-74.

Фильтры бумажные.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, раствор концентрации

(

H

SO

)=5 моль/дм

(5 н.).

Кислота соляная, по ГОСТ 3118-77 разведенная дистиллированной водой 1:2.

Натрий азотнокислый по ГОСТ 4168-79, раствор концентрации

(NaNO

)= 0,1 моль/дм

(0,1 н.).

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, раствор концентрации

(NaOH)=5 моль/дм

(5 н.).

Квасцы железоаммонийные по ТУ 6-09-5359-87, раствор с массовой долей 1%.

-нафтол по ТУ 6-09-5418-88, щелочной раствор с массовой долей 10%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2. Проведение испытания

3.6.2.1. Определение подлинности бензилпенициллина (калиевая или натриевая соль).

Один флакон спермосана-3 с активностью препарата 1000000, 500000, 250000, 100000 или 50000 ЕД растворяют соответственно в 100,0; 50,0; 25,0; 10,0 или 5,0 см

дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр и к 2 см

фильтрата, добавляют две капли разведенной соляной кислоты. При наличии бензилпенициллина выпадает белый или слегка желтоватый осадок.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2.2. Определение подлинности стрептомицина сульфата.

К 1 см

фильтрата, приготовленного по п.3.6.2.1, прибавляют 1 см

натрия гидроокиси, раствор концентрации

(NaOH)=5 моль/дм

(5 н.) и нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин. К охлажденной жидкости прибавляют 1 см

раствора серной кислоты концентрации

(H

SO

)=5 моль/дм

(5 н.) и 1 см

водного раствора железоаммонийных квасцов с массовой долей 1%. При наличии стрептомицина сульфата появляется розово-фиолетовое окрашивание.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.6.2.3. Определение подлинности растворимого стрептоцида.

К 1 см

фильтрата, приготовленного по п.3.6.2.1, прибавляют 3 см

разведенного раствора соляной кислоты и кипятят в течение 5 мин. Охлаждают и приливают 5 см

0,1 М раствора азотнокислого натрия. 1 см

полученного раствора приливают к 5 см

10%-ного щелочного раствора

-нафтола. При наличии стрептоцида появляется вишнево-красное окрашивание.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7. Определение активности бензилпенициллина калиевая или натриевая соль (суммы пенициллинов) в спермосане-3. (иодометрический метод)

Метод основан на различном отношении пенициллинов и пенициллиновых кислот к йоду. С йодом взаимодействуют только пенициллиновые кислоты. По разности между количеством йода, затраченным до и после инактивации пенициллинов щелочью, судят об активности антибиотика, содержащегося в спермосане-3.

3.7.1. Оборудование, реактивы и растворы

Весы аналитические.

Потенциометр марки рН-340 или прибор такого же класса точности.

Колбы стеклянные мерные вместимостью 250 и 1000 см

.

Пипетки стеклянные измерительные по ГОСТ 20292-74.

Цилиндры мерные по ГОСТ 1770-74.

Пипетки Мора.

Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199-78.

Калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75.

Калий йодистый по ГОСТ 4232-74.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, раствор концентрации

(NaOH) =1 моль/дм

(1 н.).

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, раствор концентрации

(

H

SO

)*=1 моль/дм

(1 н.).

Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия), раствор концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.).

Кислота ледяная уксусная по ГОСТ 61-75.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, раствор концентрации

(

H

SO

)=6 моль/дм

(6 н.) и

(

H

SO

)=2 моль/дм

(2 н.).

Йод по ГОСТ 4159-79, раствор концентрации 0,01 моль/дм

(0,01 н.).

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76, раствор с массовой долей 1%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Ацетатный буфер с рН 4,5±0,05; готовят по п.3.7.2.1.

(Измененная редакция, N 1, 2).

3.7.2. Подготовка к испытанию

3.7.2.1. Приготовление раствора ацетатного буфера.

17,5 г уксуснокислого натрия и 10,3 г ледяной уксусной кислоты, взвешенные с погрешностью не более 0,05 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см

, доводят объем водой до метки и перемешивают. Определяют рН раствора потенциометрически одновременно со стандартным буфером с рН 4,0-5,0. рН раствора ацетатного буфера должен составлять 4,5

±0,05.

3.7.2.2. Приготовление раствора йода концентрации

(

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.) с массовой долей йодистого калия 10%.

К 100 см

раствора йода концентрации

(

)=0,1 моль/дм

(0,1 н.), помещенного в мерную колбу вместимостью 1000 см

, добавляют 100 г йодистого калия и доводят объем раствора дистиллированной водой до метки. Предварительно проверяют йодистый калий на отсутствие йодата. Для этого 1 г йодистого калия растворяют в 25 см

воды. К раствору добавляют стеклянной пипеткой 2 см

раствора крахмала и 1 см

6 н раствора серной кислоты. При отсутствии йодата сразу же должно появиться синее окрашивание.

0,01 н. раствор йода готовят непосредственно перед применением.

3.7.2.3. Установление титра растворимости тиосульфата натрия концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.).

Точно 0,4904 г перекристаллизованного и высушенного до постоянной массы при 130-150

°

С мелкорастертого бихромата калия растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 см

и доводят объем раствора водой до метки. Калибровочной пипеткой Мора точно отбирают 20 см

полученного раствора в колбу вместимостью 250 см

, прибавляют стеклянной измерительной пипеткой или цилиндром 20 см

свежеприготовленного раствора йода калия с массовой долей 20% и 20 см

раствора серной кислоты концентрации

(

H

SO

)=2 моль/дм

(2 н.). Колбу закрывают пробкой, смоченной раствором йодида калия, и оставляют на 10 мин в темном месте. Прибавляют 50 см

воды, обмывают пробку водой, раствор титруют приготовленным раствором тиосульфата натрия концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.) до зеленовато-желтого окрашивания.

Затем прибавляют 2-3 см

раствора крахмала с массовой долей 1% и продолжают титровать до перехода синей окраски в

 светло-зеленую.

3.7.2.1-3.7.2.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.3. Проведение испытания

В зависимости от активности бензилпенициллина в единице фасовки спермосан-3 растворяют в следующих количествах: при активности пенициллина 1000000 ЕД содержимое одного флакона препарата растворяют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см

; при активности 500000 ЕД содержимое двух флаконов с препаратом растворяют в мерной колбе той же вместимости; при активности пенициллина 250000 ЕД содержимое двух флаконов с препаратом растворяют в мерной колбе вместимостью 500 см

и при активности пенициллина 100000 и 50000 ЕД содержимое двух и четырех флаконов соответственно растворяют в мерной колбе вместимостью 250 см

. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.3.1. Основное титрование. В две колбы с притертой пробкой вместимостью 250 см

вносят стеклянной измерительной пипеткой по 5 см

раствора препарата, прибавляют 2 см

раствора гидроокиси натрия концентрации

(NaOH)=1 моль/дм

(1 н.) и оставляют на 20 мин. Затем к смеси прибавляют 2 см

раствора соляной кислоты концентрации

(HCI)=1 моль/дм

(1 н.), 5 см

0,3 М раствора ацетатного буфера, 20 см

раствора йода концентрации

(

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.) и оставляют на 20 мин в темном месте. Избыток йода оттитровывают. Одновременно проводят контрольное титрование. Для этого в две колбы с притертой пробкой вместимостью по 250 см

каждая вносят по 5 см

раствора препарата, прибавляют по 5 см

0,3 М раствора ацетатного буфера, 20 см

раствора йода концентрации

(

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.), оставляют на 20 мин в темном месте и затем избыток йода оттитровывают раствором тиосульфата натрия концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.).

Примечание. Раствор соляной кислоты концентрации

(НCl)=1 моль/дм

(1 н.) должен быть оттитрован раствором едкого натра концентрации

(NaOH)=1 моль/дм

(1 н.).

Поправочный коэффициент

(для расчета по п.3.7.4 настоящего стандарта) к раствору тиосульфата натрия концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.) вычисляют по формуле

.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.7.4. Обработка результатов

Активность суммы пенициллинов (

) в единицах активности на флакон вычисляют по формуле

,

где

- разность в объеме раствора йода концентрации

(

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.) между контрольным и основным титрованием, см

;

- поправочный коэффициент к раствору тиосульфата натрия концентрации

(Na

S

O

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.). Поправочный коэффициент рассчитывают по п.3.7.3.1 настоящего стандарта;

- величина эквивалента 1 см

раствора йода концентрации

(

)=0,01 моль/дм

(0,01 н.), г стандартного образца бензилпенициллина (с пересчетом на химически чистое вещество). Величину эквивалента определяют по табл.3. Она изменяется в зависимости от температуры, при которой проводят исследование;

1000 - коэффициент пересчета из граммов в миллиграммы;

1670 - теоретическая активность 1 мг бензилпенициллина, ЕД;

- объем разведения (1000, 500, 250 соответственно), см

;

- коэффициент пересчета стандартного образца бензилпенициллина: для калиевой соли

=1,045, для натриевой соли

=1,00;

- объем раствора, взятого для титрования, см

;

- количество флаконов, используемых в опыте, шт.

Таблица 3

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.8. Определение активности стрептомицина сульфата

3.8.1. Оборудование, материалы, реактивы и растворы

Колбы вместимостью 50 см

по ГОСТ 1770-74.

Фотоэлектроколориметр ФЭК-56М или других аналогичных марок.

Баня водяная.

Фильтры бумажные.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, раствор концентрации

(НCl)=5,2 моль/дм

(5,2 н.).

Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) по ГОСТ 244-76.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76.

Йод по ГОСТ 4159-79.

Кальций хлористый.

Железо хлорное по ГОСТ 4147-74, раствор с массовой долей 0,25%.

Квасцы железоаммонийные по ТУ 6-09-5359-77, раствор с массовой долей 0,25%.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).

3.8.2. Подготовка к испытанию

3.8.2.1. Построение градуировочного графика.

Готовят стандартный раствор, содержащий в 1 см

1000 ЕД стрептомицина. При активности стандартного препарата стрептомицина, равной 740 ЕД/мг, берут навеску 27 мг и растворяют в 20 см

дистиллированной воды.

Для построения градуировочного графика в колбочки вносят стандартный раствор и дистиллированную воду, в количествах, указанных в табл.4.

Таблица 4

Номер колбочки	Стандартный раствор, см	Дистиллированная вода, см	Активность стрептомицина, ЕД
1	1	4	1000
2	2	3	2000
3	3	2	3000
4	4	1	4000
5	5	0	5000

Затем из каждой колбочки берут в пробирку или небольшую колбу по 2,5 см

раствора, добавляют 2,5 см

дистиллированной воды, 1 см

раствора натрия гидроокиси концентрации

(NaOH)=5 моль/дм

(5 н.) и нагревают в кипящей водяной бане в течение 3 мин. После охлаждения добавляют 1 см

раствора соляной кислоты концентрации

(НCl)=5,2 моль/дм (5,2 н.) и 5 см

титрованного раствора хлорного железа с массовой долей 0,25%. При этом растворы в колбочках окрашиваются в фиолетово-сиреневый цвет. Растворы колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре против дистиллированной воды в кюветах с толщиной слоя раствора 1 см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.8.3. Проведение испытания

Спермосан-3 растворяют как указано в п.3.7.3.

Раствор спермосана-3 фильтруют. Испытание проводят как указано в п.3.8.2.1.

3.8.4. Обработка результатов

Активность стрептомицина сульфата (

) в единицах активности на флакон вычисляют по формуле

,

где

- активность стрептомицина сульфата, рассчитанная по градуировочному графику, ЕД;

- объем разведения, см

;

- количество флаконов, используемых в опыте, шт.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов трех параллельных определений. Допустимые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 10%.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9. Определение массы растворимого стрептоцида

3.9.1. Оборудование, реактивы и растворы

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 200 см

по ГОСТ 1770-74.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, концентрированная.

Метиловый оранжевый.

Калий бромистый по ГОСТ 4160-74, раствор с массовой долей 10%.

Калий бромноватокислый по ГОСТ 4457-74, раствор концентрации

(KBrО

)=0,1 моль/дм

(0,1 н.).

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.9.2. Проведение испытания

Спермосан-3 растворяют в мерной колбе из расчета содержания в 100 см

дистиллированной воды 1 г стрептоцида. Для этого при активности препарата 1000000 ЕД содержимое одного флакона растворяют в 200 см

; 500000 ЕД - в 100 см

; 250000 ЕД - в 50 см

; 100000 ЕД - в 25 см

и при фасовке по 50000 ЕД - содержимое двух флаконов растворяют в 25 см

дистиллированной воды.

10 см

полученного раствора переносят в коническую колбу и прибавляют 5 см

10%-ного раствора бромистого калия, 5 см

концентрированной серной кислоты, пять капель раствора метилового оранжевого и медленно, при сильном взбалтывании титруют 0,1 н. раствором бромноватокислого калия до исчезновения окраски.

(Измененная редакция, Изм. N  

1).

3.9.3. Обработка результатов

Массу растворимого стрептоцида (

) в граммах во флаконе вычисляют по формуле

,

где 0,004305 - масса стрептоцида, эквивалентная 1 см

раствора бромноватокислого калия концентрации

(KBrО

)=0,1 моль/дм

(0,1 н.), г;

- количество бромноватокислого калия, израсходованное на титрование, см

;

- объем разведения, см

;

- объем раствора, взятого для титрования, см

;

- количество флаконов, используемых в опыте, шт.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов трех параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 10%.

(Измененная редакция, Изм.N 1).

3.10. Испытание на отсутствие микрофлоры

3.10.1. Оборудование, материалы и реактивы

Термостат с температурой нагрева 37-38°С.

Автоклав.

Флаконы вместимостью 200 см

.

Пипетки вместимостью 2 и 10 см

по ГОСТ 20292-74.

Чашки с крышками стеклянные лабораторные.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Пробки ватномарлевые.

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206-84*.

Бульон мясопептонный по ГОСТ 20730-75.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10.2. Подготовка к испытанию

Готовят в соответствии с действующей рецептурой мясопептонный агар (МПА), мясопептонный бульон (МПБ) и мясопептонный печеночный бульон под вазелиновым маслом (МППБ). Среды разливают по 8-10 см

в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве 30 мин при температуре 120

°

С.

Из каждой серии на стерильность исследуют не менее трех флаконов препарата. Спермосан-3 растворяют из расчета 1 г в 9 см

стерильного раствора хлористого натрия с массовой долей 0,9%.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.10.3. Проведение испытания

Взятую стерильно пробу раствора спермосана-3 высевают на три пробирки с МПА, МПБ и МППБ под вазелиновым маслом по 0,5 см

. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37

°

С в течение 8 сут.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11. Определение безвредности стрептомицина сульфата, бензилпенициллина (калиевая или натриевая соль), растворимого стрептоцида и спермосана-3 для спермиев сельскохозяйственных животных

3.11.1. Оборудование, материалы, реактивы и растворы

Микроскоп биологический марки МБИ или МБР по технической документации с термостатом ТМ-1 для микроскопа.

Посуда лабораторная по ГОСТ 1770-74.

Пипетки для отбора и взвешивания жидкостей по ГОСТ 20292-74.

Флаконы для медпрепаратов.

Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный по ГОСТ 22280-76, 3%-ный раствор.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Желток куриных яиц со сроком хранения не более 30 дней при температуре 2-5°С.

Сперма быков неразбавленная с подвижностью не ниже 7,5 баллов и концентрацией спермиев не менее 0,8 млрд/см

.

(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).

3.11.2. Подготовка к испытанию

Готовят на прокипяченной дистиллированной воде раствор лимоннокислого натрия с массовой долей 3% и добавляют к нему желтки свежих куриных яиц в количестве 10%. Исследуемые антибиотики и спермосан-3 растворяют теплой (40-43

°

С) прокипяченной дистиллированной водой с таким расчетом, чтобы в 1 см

раствора содержалось 100000 ЕД. Для этого при фасовке спермосана-3 по 1000000, 500000, 250000, 100000 ЕД во флаконы с препаратом добавляют соответственно по 10, 5, 2,5 и 1 см

дистиллированной воды.

(Измененная редакция, Изм. N 1).     

3.11.3. Проведение испытания

3.11.3.1. Определение безвредности стрептомицина сульфата.

В пять пробирок или флаконов из-под антибиотиков вносят раствор лимоннокислого натрия с желтком в следующих количествах: в пробирку N 1 - 4,5 см

; в пробирки N 2, 4 и 5 - по 2,5 см

и в пробирку N 3 - 4 см

.

0,5 см

растворенного антибиотика (см. п.3.11.2) переносят мерной стеклянной стерильной пипеткой в пробирку N 1, тщательно перемешивают, встряхивая пробирку, и делают последовательные разведения: из пробирки N 1 переносят 2,5 см

в пробирку N 2, тщательно перемешивают и переносят 1 см

в пробирку N 3, а 1,5 см

выливают. Из пробирки N 3 переносят 2,5 см

в пробирку N 4. Из пробирки N 4 выливают 2,5 см

. В пробирку N 5, являющуюся контрольной, стрептомицина сульфат не вносят. В результате последовательных разведений в опытных четырех пробирках концентрация стрептомицина сульфата будет составлять соответственно 10, 5, 1 и 0,5 тыс. ЕД/см

.

В каждую опытную и контрольную пробирки стерильной теплой пипеткой вносят 0,1-0,2 см

свежеполученной спермы. Легким вращательным движением перемешивают содержимое пробирок и оставляют при комнатной температуре на 3 ч. Затем оценивают пробы разбавленной спермы по подвижности спермиев под микроскопом при температуре 40-42

°

С.

Подвижность спермиев, абсолютную выживаемость и выживаемость спермиев в часах устанавливают по ГОСТ 20909.4-75.

Препарат считают безвредным, если через 3 ч после разбавления спермы в пробирке N 1 подвижность спермиев будет не ниже 4,0, а через 24 ч хранения при 2-5°С не ниже 2,0 баллов. При этом показатель абсолютной выживаемости спермиев во флаконе N 3 не должен быть ниже 10% по сравнению с контрольным.

3.11.3.2. Определение безвредности бензилпенициллина (калиевая или натриевая соль).

В семь пробирок или флаконов для медпрепаратов вносят раствор лимоннокислого натрия с желтком из расчета в пробирку N 1 - 4 см

, в остальные - по 2,5 см

.

1 см

растворенного антибиотика (см. п.3.11.2) переносят мерной стеклянной пипеткой в пробирку N 1, тщательно перемешивают и переносят 2,5 см

в пробирку N 2, также перемешивают и переносят 2,5 см

в пробирку N 3 и т.д. Из шестой пробирки 2,5 см

раствора выливают. В пробирку N 7, являющуюся контрольной, бензилпенициллин не добавляют. В результате последовательных разведений в опытных шести пробирках концентрация бензилпенициллина будет составлять соответственно: 20; 10; 5; 2,5; 1,25; 0,625 тыс. ЕД/см

.

Абсолютную выживаемость и выживаемость спермиев в часах устанавливают по ГОСТ 20909.4-75.

Препарат считают безвредным, если через 3 ч после разбавления спермы в растворе с концентрацией бензилпенициллина 2 тыс. ЕД/см

раствора (пробирка N 1) подвижность спермиев не ниже 6,0, а в пробирке N 2 не ниже 7,0 баллов. Подвижность спермиев в пробирке N 2 через 24 ч хранения при температуре 2-5

°

С должна быть не ниже 5,0 баллов. Показатели абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах в пробирке N 5 должны быть больше или равны показателям абсолютной выживаемости и выжимаемости спермиев в часах в растворе контрольной пробирки.

Бензилпенициллин считается также безвредным для спермы, если через 3 ч после разбавления спермы в пробирке N 1 (концентрация 2 млн. ЕД на 100 см

) подвижность ее будет не ниже 3,0, а в пробирке N 2 (1 млн. ЕД/100 см

) не ниже 5,0 баллов; через 24 ч в пробирке N 1 не ниже 0,5, а в пробирке N 2 не ниже 5,0 баллов. При этом показатели абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах в растворе пробирки N 5 (125 тыс. ЕД/100 см

) должны быть больше или равны показателям абсолютной выживаемости и выживаемости спермиев в часах в растворе контрольной проб

ирки.

3.11.3.1, 3.11.3.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.3.3. Определение безвредности растворимого стрептоцида.

Навески растворимого стрептоцида массой 0,2, 0,4 и 0,6 г, взвешенные с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в трех колбах, содержащих по 100 см

горячего раствора лимоннокислого натрия с массовой долей 3%. Раствор охлаждают до температуры 35-40

°

С и добавляют 10% желтка свежих куриных яиц. Контрольным является раствор лимоннокислого натрия c массовой долей 3% с желтком, приготовленный без стрептоцида.

Подвижность спермиев, абсолютную выживаемость и выживаемость спермиев в часах устанавливают по ГОСТ 20909.4-75.

Препарат считают безвредным, если при добавлении его в количестве 0,2 г и 0,4 г на 100 см

раствора лимоннокислого натрия с массовой долей 3% с желтком выживаемость спермиев не ниже, чем в контрольном опыте, а при добавлении 0,6 г - ниже по сравнению с контрольным опытом не более чем на 15%.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11.3.4. Определение безвредности спермосана-3.

Подготовку к испытанию и проведение испытания проводят по пп.3.11.2 и 3.11.3.1.

Испытания по определению безвредности стрептомицина сульфата, бензилпенициллина, растворимого стрептоцида и спермосана-3 проводят, используя три флакона с препаратом. Препарат из каждого флакона анализируют в трех повторностях.

 4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Спермосан-3 фасуют во флаконы для медпрепаратов вместимостью 10-15 см

.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2. Флаконы герметично укупоривают резиновыми пробками и алюминиевыми крышками под закатку.

4.3. На каждый флакон несмываемой краской по стеклу наносят следующие обозначения:

наименование предприятия-изготовителя;

наименование препарата;

активность препарата, ЕД;

номер серии;

срок годности;

обозначение настоящего стандарта.

4.4. Флаконы по 50 шт. упаковывают в коробки из коробочного картона по ГОСТ 7933-75 с разделительными перегородками. В каждую коробку вкладывают наставление по применению спермосана-3.

На коробку наклеивают этикетку с обозначениями, указанными в пункте 4.3. Дополнительно указывают количество флаконов в коробке и условия хранения.

Допускается упаковывать флаконы в картонные коробки с гнездами по 20 шт. 10 двадцатиместных коробок с препаратом, оклеенных бандеролью, упаковывают в стопы оберточной бумагой по ГОСТ 8273-75. В стопу вкладывают 4 экземпляра наставления по применению спермосана-3. На стопу наклеивают этикетку с теми же обозначениями, что и на бандероли, и указывают количество флаконов в одной стопе.

4.5. Коробки с флаконами упаковывают по ГОСТ 17768-80* в фанерные ящики по ГОСТ 5959-80, или в ящики дощатые по ГОСТ 2991-85, или в ящики из гофрированного картона по ОСТ 64-064-88 массой брутто по 10-12 кг. Каждый ящик маркируют по ГОСТ 14192-77 с указанием дополнительных данных:

наименования предприятия-изготовителя;

наименования препарата;

активности препарата, ЕД;

номера серии;

количества коробок в ящике;

условий хранения;

срока годности;

обозначения настоящего стандарта.

На каждый ящик наносится предупредительный знак: "Осторожно, стекло!".

4.6. Спермосан-3 транспортируют в соответствии с требованиями ГОСТ 17768-80.

4.4-4.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).

4.7. Спермосан-3 хранят в сухом помещении при температуре не выше 20°С.

4.8. Срок годности спермосана-3 - 3 года со дня изготовления. По истечении указанного срока спермосан-3 подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности спермосана-3 может быть продлен еще на 1 год.