ГОСТ 14746-69 Среда глюкозо-цитратно-желточная для хранения спермы быков при температуре 2-5 °С.
ГОСТ 14746-69
Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
СРЕДА ГЛЮКОЗО-ЦИТРАТНО-ЖЕЛТОЧНАЯ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ
СПЕРМЫ БЫКОВ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 2-5 °С
Medium, glucose-citrate-yolk, for keeping
of bull sperm at temperature 2-5 °C
Дата введения 1970-01-01
Постановлением Комитета стандартов, мер и измерительных приборов при Совете Министров СССР от 17/VI 1969 г. N 692 срок введения установлен с 1/I 1970 г.
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 1973 г.
Настоящий стандарт распространяется на синтетическую глюкозо-цитратно-желточную (ГЦЖ) среду, .предназначенную для хранения спермы быков-производителей при температуре 2-5 °С, применяемой на станциях и пунктах искусственного осеменения.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Глюкозо-цитратно-желточную среду готовят непосредственно перед ее применением на станциях искусственного осеменения в соответствии с Инструкцией по искусственному осеменению крупного рогатого скота, утвержденной Министерством сельского хозяйства СССР, и Ветеринарно-санитарными правилами работы станций с пунктов искусственного осеменения, утвержденными Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР.
1.2. В состав ГЦЖ среды входят компоненты, указанные в табл.1.
Таблица 1
|
|
Наименования компонентов | Нормы |
1. Глюкоза по ГОСТ 6038-51 или медицинская в г | 3,0 |
2. Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный по ГОСТ 5.1314-72 в г | 1,4 |
3. Желток куриного яйца в мл | 10±2 |
4. Стрептомицин сернокислый или солянокислый для внутримышечных инъекций в тыс. единиц | 75-100 |
5. Пенициллин кристаллический (калиевая или натриевая соль) для внутримышечных инъекций в тыс. единиц | 75-100 |
6. Стрептоцид белый растворимый в г | 0,12±0,02 |
7. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 в мл | 100 |
1.3. Глюкоза медицинская ч.д.а. или х.ч., антибиотики и белый растворимый стрептоцид должны отвечать требованиям Государственной фармакопеи. Все препараты перед применением проверяют на безвредность для спермиев животных. Безвредность антибиотиков определяют по ВТУ 117-67, утвержденным Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР, а глюкозы и цитрата - по эталонам этих препаратов, установленных Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов.
1.4. Содержание влаги в глюкозе допускается не более 10%.
При приготовлении среды препарат берут в большем количестве, чем указано в рецепте, с учетом содержания кристаллизационной воды.
1.5. Желток куриных яиц берут от проверенных здоровых кур, из яиц со сроком хранения при температуре 2-5 °С не более 7 суток. Желательно брать желтки, окрашенные в ярко-оранжевый цвет.
1.6. Среду готовят в день разбавления спермы. Компоненты, входящие в состав среды, отвешивают на аналитических весах.
Перед отвешиванием реактивов проверяют точность весов и используют для навески часовое стекло, обработанное тампоном, смоченным 96%-ным этиловым спиртом по ГОСТ 5962-67*.
1.7. Для приготовления среды используют стерильные колбы и мерные цилиндры по ГОСТ 1770-64*.
Дистиллированную воду кипятят 15-20 мин и берут ее в необходимом объеме.
Глюкозу и цитрат стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере (УНБК-1) в течение 15-20 мин или в растворе текучим паром при 100 °С в течение 30 мин.
После охлаждения раствора до 80-90 °С в стерильных условиях добавляют в него стрептоцид. Затем при температуре 58-60 °С в раствор добавляют желток куриных яиц. Для этого скорлупу яиц обеззараживают тампоном, смоченным 70%-ным раствором этилового спирта, или ультрафиолетовыми лучами в настольной бактерицидной камере в течение 10-15 мин.
Яйцо раскалывают стерильным скальпелем, белок сливают в чашку, а желток осторожно перекладывают на стерильный лист фильтровальной бумаги, чтобы удалить остатки белка и оболочку желтка. Желтки перекатывают к краю фильтровальной бумаги, прокалывают оболочку и сливают их в стерильный цилиндр или мензурку.
Измеренное количество желтка вносят в колбу с раствором и тщательно встряхивают до получения однородного цвета.
Затем при температуре не выше 45 °С вносят антибиотики в сухом виде или предварительно растворенными в 1-2 мл дистиллированной воды.
1.8. Приготовленная ГЦЖ среда по физико-химическим и биологическим свойствам должна отвечать требованиям и нормам, указанным в табл.2.
Таблица 2
|
|
Наименования показателей | Нормы |
1. Внешний вид | Однородная жидкость без комков, осадка и механических примесей |
2. Цвет | От светло-желтого до темно-желтого |
3. Запах | Специфический |
4. Стерильность | При посеве на питательные среды не должно быть роста микробных тел в течение 10 суток |
5. Безвредность | Среда не должна вызывать понижение активности, выживаемости и оплодотворяемости спермиев. Выживаемость и оплодотворяемость спермиев должна выдерживать испытание по пп.10-12 настоящей таблицы |
6. Концентрация водородных ионов (рН) | 6,9±0,2 |
7. Осмотическое давление при температуре 0 °С в атм | 7,4±0,2 |
8. Температура среды перед разбавлением спермы в °С | 28-30 |
9. Оптимальная степень разбавления спермы | От 4 до 32 раз |
10. Активность спермиев через 3 суток хранения разбавленной спермы при температуре 2-5 °С в баллах | не ниже 7,0 |
11. Выживаемость спермиев до 1,0 балла включительно в ч: |
|
а) при температуре 2-5 °С | 252 |
б) при температуре 38±0,5 °С | 11 |
12. Показатель абсолютной выживаемости спермиев (  ) при температуре 2-5 °С | 1400 |
13. Оплодотворяемость здоровых коров в одну охоту при осеменении их разбавленной спермой со сроком хранения не более 3 суток в %, не менее | 60 |
2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
2.1. Для контрольной проверки качества ГЦЖ среды, а также соответствия ее требованиям настоящего стандарта должны применяться правила отбора проб и методы испытаний, указанные ниже.
2.2. Контрольная проверка ГЦЖ среды производится государственным контролером на предприятии-изготовителе (станция искусственного осеменения) или Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Для контрольной проверки отбирают готовую среду (100 мл) или препараты тех партий (серий), из которых приготовлена среда (глюкоза - 100 г; натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 100 г; яйца куриные - 5 шт.; антибиотики - по 5 флаконов).
2.4. Внешний вид, цвет и отсутствие механических примесей устанавливают путем осмотра колбы со средой в проходящем свете при периодическом встряхивании.
2.5. Стерильность проверяют путем высева среды по 1 мл на мясопептонный бульон (МПБ), 2%-ный мясопептонный агар МПА с 1% глюкозы и на мясопептонный печеночный бульон под вазелиновым маслом (среда Китт-Тароцци).
Наблюдают за посевами в течение 10 суток в соответствии с методикой ветеринарно-санитарной оценки спермы и сред, утвержденной Главным управлением ветеринарии МСХ CCСP.
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.