ГОСТ Р ИСО 20743-2012 Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой.
ГОСТ Р ИСО 20743-2012
Группа М09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МАТЕРИАЛЫ ТЕКСТИЛЬНЫЕ
Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой
Textiles. Determination of antibacterial activity of antibacterial finished products
ОКС 59.080.01
07.100.99
Дата введения 2014-01-01
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 442 "Хлопок", Открытым акционерным обществом "Центральный Научно-исследовательский текстильный институт" (ОАО "ЦНИТИ") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Управлением технического регулирования и стандартизации Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ
4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 20743:2007* "Материалы текстильные. Определение антибактериальной активности изделий с антибактериальной обработкой" (ISO 20743:2007 "Textiles - Determination of antibacterial activity of antibacterial finished products").
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Правила применения настоящего стандарта установлены в (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает количественные методы испытаний по определению антибактериальной активности текстильных изделий, в том числе нетканых полотен, прошедших антибактериальную обработку.
Настоящий стандарт применим ко всей текстильной продукции, включая одежду, материалы для набивки, нити и материалы для одежды, товары для дома и другие товары с любым используемым антибактериальным агентом (органическим, неорганическим, натуральным или искусственным), нанесенным любым методом (либо присутствующим по своей природе, либо после окончательной обработки, либо заражением).
С учетом назначения применения, а также окружающей среды, в которой будет использоваться текстильное изделие, исследователь выбирает оптимальный метод испытаний из следующих трех методов определения антибактериальной активности:
a) метод абсорбции (поглощения) (оценочный метод, в котором бактериальную суспензию для испытаний вносят непосредственно на образцы);
b) метод переноса (оценочный метод, в котором используемые бактерии вносят в чашку Петри с агаровой средой, а затем переносят на образцы);
c) метод отпечатков [оценочный метод, в котором бактерии, используемые в испытании, помещают на фильтре и затем переносят (отпечатывают) на образцы].
Чашечный метод подсчета числа колоний и определения интенсивности АТФ (аденозин трифосфат) люминесценции бактерий также являются специфичными для подсчета численности бактерий.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий международный стандарт*:
ИСО 6330 Материалы текстильные. Режимы домашней стирки и сушки для текстильных испытаний (ISO 6330, Textiles - Domestic washing and drying procedures for textile testing)
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 полотно текстильное (textile fabric): Общий термин для обозначения текстильных поверхностей, нетканых полотен, трикотажных полотен и т.д., образуемых посредством переплетений текстильных волокон и нитей, имеющих определенное сцепление (когезию), в основном используемых для одежды или мебельного применения.
Примечание - Часто включает определенные виды нетканых полотен.
3.2 контрольное полотно (control fabric): Полотно, используемое для подтверждения условий роста эталонных бактерий при испытаниях.
Примечание - Испытывают тот же самый образец полотна, что и для испытаний, только без антибактериальной обработки. Если это невозможно, то берется 100% хлопковое полотно без флюоресцирующей отделки (без оптического отбеливателя) и другой обработки.
3.3 антибактериальный агент (antibacterial agent): Продукт, предназначенный для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
3.4 антибактериальная отделка (antibacterial finish): Обработка, специально разработанная для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
3.5 антибактериальная активность (antibacterial activity): Активность антибактериальной отделки, служащая для предотвращения или замедления роста бактерий, для уменьшения числа бактерий или уничтожения бактерий.
3.6 чашечный метод подсчета числа колоний (plate count method): Метод, в котором число бактерий после инкубации вычисляют подсчетом числа колоний в соответствии с методом десятикратных разведений.
Примечание - Результаты выражаются в "КОЕ (колониеобразующая единица)".
3.7 метод люминесценции (luminescence method): Метод, при котором измеряется количество АТФ, содержащееся в бактериальных клетках.
3.8 нейтрализатор (neutralizer): Химические агенты, используемые для дезактивации, нейтрализации или подавления антибактериальных свойств антибактериальных агентов.
4 Меры предосторожности
Данные методы испытаний проводятся с использованием бактерий.
Поэтому испытания должны осуществляться обученным и подготовленным персоналом, владеющим микробиологическими методами.
Приведенные меры предосторожности должны быть согласованы в соответствии с особенностями законодательства той страны, в которой проводятся испытания.
5 Оборудование
Используют следующее стандартное лабораторное оборудование.
5.1 Спектрофотометр с измерением длины волны в пределах 620-660 нм или нефелометр McFarland.
5.2 Термостат, предназначенный для поддержания постоянной температуры (37±2) °С.
5.3 Водяные бани, одна - для поддержания постоянной температуры (46±2) °С, другая - для поддержания температуры в диапазоне от 70 °С до 90 °С.
5.4 Миксер, осуществляющий вихревое перемешивание.
5.5 Гомогенизатор, функционирующий со скоростью 6-8 циклов/с, с соответствующими сменными контейнерами.
5.6 Чистый стол для микробиологических испытаний.
5.7 Стиральная машина, отвечающая требованиям ИСО 6330.
5.8 Камера влажности: тропическая камера или другое устройство, способное поддерживать атмосферные условия с высокой влажностью.
5.10 Аппарат для получения отпечатков, способный оказывать давление 4 Н на испытуемый кусок образца с возможностью вращения образца на 180° в одном направлении в течение 3 с.
5.11 Холодильник, обеспечивающий поддержание температуры в диапазоне от 2 °С до 8 °С.
5.12 Морозильные камеры, одна - для температуры ниже минус 70 °С, другая - для температуры ниже минус 20 °С.
5.13 Весы точностью измерения до 0,01 г.
5.14 Фильтровальный аппарат, состоящий из верхнего контейнера, снабженного мембранным фильтром, и нижнего контейнера с отверстием для откачивания.
5.15 Пипетки соответствующих объемов для каждого испытания, с наконечниками из стекла или пластика и погрешностью от 0,5% и менее.
5.16 Флаконы: 30-миллитровые стеклянные колбы с откручивающейся крышкой из полипропилена, поликарбоната либо другого подобного материала, снабженные прокладкой из силикона или тефлона.
5.17 Чашки Петри, стерилизованные, из стекла или пластика, диаметром 90-100 мм и 55-60 мм.
5.18 Стеклянная палочка диаметром приблизительно 18 мм.
5.19 Антиударные зерна (стеклянные бусы) диаметром приблизительно 3-4 мм.
5.20 Колба Эрленмейера объемом 100 мл.
5.21 Обрезное лекало, изготовленное из стерилизующегося материала (нержавеющая сталь или стекло) диаметром (3,8±0,1) см.
5.22 Одноразовые пакеты из пластика, предназначенные для хранения пищевых продуктов, которые могут быть использованы для хранения образцов.
5.23 Пинцеты, изготовленные из материала, который может быть подвергнут стерилизации.
5.24 Цилиндр из нержавеющей стали, массой (200±10) г и диаметром (3,5±0,1) см.
5.25 Металлическая сетчатая корзина для автоклавирования.
5.26 Алюминиевая фольга.
6 Реагенты и питательные среды
Реагенты, используемые для испытаний, должны быть аналитической чистоты (ч.а.) и/или пригодными для микробиологических целей.
Для приготовления питательных сред рекомендуется использовать сухие питательные среды, присутствующие на коммерческом рынке. При приготовлении этих сред необходимо строго следовать инструкциям изготовителя.
6.1 Вода
Вода, используемая для испытаний, должна быть аналитически чистой для микробиологических целей, свежей дистилляции и/или ионообменной, и/или ультрафильтрованной, и/или фильтрованной с помощью обратного осмоса. Вода не должна содержать токсических и каких-либо других веществ, задерживающих рост бактерий.
6.2 Триптон-соевый бульон (TSB)
Этот бульон должен быть использован для оживления лиофилизированных штаммов бактерий.
|
|
Триптон, панкреатический гидролизат казеина
| 15 г |
Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои
| 5 г |
Хлористый натрий  | 5 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 7,2±0,2 |
6.3 Триптон-соевый агар (TSA)
|
|
Триптон, панкреатический гидролизат казеина
| 15 г |
Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои
| 5 г |
Хлористый натрий | 5 г |
Агар
| 15 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 7,2±0,2 |
6.4 Агар для переноса
|
|
Триптон, панкреатический гидролизат казеина
| 0,75 г |
Соевый пептон, папаиновый гидролизат сои
| 0,25 г |
Хлористый натрий | 5 г |
Агар
| 15 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 7,2±0,2 |
6.5 Питательный бульон (NB broth)
|
|
Мясной экстракт
| 3 г |
Пептон
| 5 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 6,9±0,2 |
6.6 Пептонно-солевой раствор
|
|
Триптон, панкреатический гидролизат казеина
| 1 г |
Натрий хлор | 8,5 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 6,9±0,2 |
6.7 Физиологический раствор
|
|
Натрий хлор | 8,5 г |
Вода | 1000 мл (до полного объема) |
6.8 Среда SCDLP
|
|
Пептон, гидролизат казеина
| 17 г |
Пептон, гидролизат соевых бобов
| 3 г |
Хлористый натрий | 5 г |
Калия дигидрофосфат
| 2,5 г |
Глюкоза
| 2,5 г |
Лецитин
| 1 г |
Твин 80 (Полисорбат 80)
| 7 г |
Вода
| 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 7,2±0,2 |
Если уровень нейтрализации недостаточен, содержание полисорбата 80 или лецитина может быть изменено или использован другой нейтрализирующий агент. Однако использование другого нейтрализатора должно быть отражено в протоколе испытаний вместе с данными о его концентрации.
6.9 Буферный раствор для отмывания бактериальной взвеси
Данный буферный раствор состоит из 0,005 моль/л дигидрофосфата натрия, содержащего 0,037% сахарозы.
|
|
рН | 7,2±0,2 |
6.10 Нейтрализующий раствор
Состав стандартного нейтрализующего раствора должен быть следующим:
|
|
Твин 80 (Полисорбат 80)
| 30 г |
Лецитин яичного желтка
| 3 г |
Гистидин гидрохлорид
| 1 г |
Мясной или казеиновый пептон
| 1 г |
Хлористый натрий | 4,3 г |
Калия монофосфат
| 3,6 г |
Двунатриевый фосфат дигидрат
| 7,2 г |
Вода | 1000 мл (до полного объема) |
Если эффективная нейтрализующая сила не может быть достигнута, содержание полисорбата 80 или лецитина может быть изменено или использован другой нейтрализирующий агент. Использование другого нейтрализатора должно быть отражено в протоколе испытаний с указанием его концентрации.
6.11 Агар для подсчета колоний (ЕА)
|
|
Сухой экстракт дрожжей
| 2,5 г |
Казеиновый триптон
| 5,0 г |
Глюкоза
| 1 г |
Агар | От 12 г до 18 г (в зависимости от крепости гелеобразного продукта) |
Вода | 1000 мл (до полного объема) |
рН после стерилизации | 7,2±0,2 |
6.12 Агар для получения отпечатков
|
|
Агар
| 20 г |
Вода | 1000 мл (до полного объема) |
6.13 Раствор, защищающий бактерии определенных видов от низких температур
Для замораживания бактерий используется раствор, защищающий от низких температур. Раствор содержит 150 г/л глицерина или 100 г/л диметилсульфооксида.
Для растворов, содержащих глицерин, готовят питательный раствор, а затем добавляют 150 г глицерина на 1 л и затем раствор стерилизуют.
Для растворов, содержащих диметилсульфооксид, стерилизацию диметилсульфооксида осуществляют пропусканием последнего через мембранный фильтр размерами пор 0,22 мкм. Затем готовят питательный раствор, стерилизуют его и добавляют пропущенный через мембранный фильтр диметилсульфооксид, добавляя 100 г препарата на 1 л питательного раствора.
Примечание - Пригоден любой другой коммерчески разработанный способ, позволяющий сохранять штаммы, аналогично описанному выше методу, как с использованием раствора, защищающего от низких температур, так и предохраняющей системы, содержащей глицерин или диметилсульфооксид.
Реагенты, используемые в данных испытаниях, должны быть аналитического качества и/или быть пригодными для микробиологических целей.
6.14 Основной раствор стандартного реагента АТФ
|
|
5’трифосфат аденозин-двунатрия тригидрат
| 59,7 мг |
Вода | 1000 мл (до полного объема) |
После приготовления раствор должен быть помещен в плотно закрытый контейнер и храниться в криогенных условиях при температуре минус 20 °С и ниже. Раствор может быть использован не позднее чем через 6 мес после его приготовления.
6.15 Буферный раствор для люминесцирующего реагента АТФ
|
|
Трис(гидроксиметил)аминометан
| 760 мг |
Дигидрат тетраацетата двунатрия этилендиамина
| 370 мг |
Тетрагидрат ацетата магния
| 800 мг |
DL-дитиотреитол
| 8 мг |
Вода
| 250 мл (до полного объема) |
рН | 7,5±0,2 |
Этот реагент должен быть использован не позднее чем через 8 ч после приготовления.
6.16 Люминесцирующий реагент АТФ
|
|
Люцифераза (ЕС: 1.13.12.7) | 10 мг |
D-люциферин | 15 мг |
Альбумин бычьей сыворотки | 60 мг |
Буферный раствор по 6.15 | 30 мл (до полного объема) |
После растворения реагент должен храниться при комнатной температуре не менее 15 мин перед применением, а затем быть использован в течение 3 ч.
6.17 АТФ реагент для экстракции
|
|
10%-ный водный раствор бензалкония хлорида
| 1 мл |
Вода | 9 мл |
Использование любого другого неспецифичного реагента для экстракции должно быть отражено в протоколе испытаний.
6.18 АТФ элиминирующий агент
|
|
Апираза (ЕС: 3.6.1.5)
| 5 международных единиц |
Аденозиндезаминаза (фермент) (ЕС: 3.5.1.4)
| 5 международных единиц |
Буферный раствор 0,005 моль/л натрия фосфорнокислого 2-водного с содержанием сахарозы | 10 мл (до полного объема) |
рН | 7,2±0,2 |
Использование любого другого неспецифичного нейтрализующего реагента должно быть отражено в протоколе испытаний.
6.19 SCDLP или другая среда для приготовления эталонного раствора АТФ
|
|
SCDLP по п.6.8 или другая среда
| 10 мл |
Элиминирующий агент АТФ по 6.18 | 1 мл |
После перемешивания помещают в термостат на 1 ч при температуре от 30 °С до 37 °С для предотвращения микробиологической контаминации.
Затем переносят на 1 ч в горячую водяную баню при температуре от 70 °С до 90 °С и затем охлаждают до комнатной температуры.
Хранят раствор в холодильнике и используют в течение 24 ч после приготовления.
7 Эталонные штаммы
7.1 Штаммы
Следующие штаммы должны использоваться во всех испытаниях антибактериальной активности:
- Staphylococcus aureus ATCC 6538, CIP 4.83, DSM 799, NBRC 13276 или NCIMB 9518;
- Klebsiella pneumoniae ATCC 4352, CIP 104216, DSM 789, NBRC 13277 или NCIMB 10341.
Примечание - ATCC - обозначение Американской коллекции типовых культур (American Type Culture Collection) (США); CIP - обозначение коллекции культур Института Пастера (Франция); DSM - обозначение культур Германской коллекции микроорганизмов и клеточных культур (German Collection of Microorganism and Cell Cultures) (Германия); NBRC - обозначение культур Центра Nite Биологических ресурсов (Biological Resource Center) (Япония); NCIMB - обозначение культур Национальной коллекции промышленных бактерий (National Collection of Industrial Bacteria) (Великобритания).
По согласованию всех заинтересованных сторон допускается использование эквивалентных штаммов бактерий вместо вышеприведенных штаммов, которые могут быть получены из Всемирной Федерации Коллекции Культур [World Federation of Culture Collection (WFCC)]. Штаммы, используемые в испытаниях, должны фигурировать в документах с обозначением как наименований используемых штаммов, так и источников их происхождения.
7.2 Хранение штаммов
7.2.1 Общие положения
Штаммы необходимо хранить в соответствии с рекомендациями изготовителей или требованиями ЕН 12353.
В документах должны быть приведены данные об идентификации и происхождении коллекции культур штаммов, а также о способе их хранения в лаборатории.
7.2.2 Метод с использованием керамических гранул (бус)
Получают образец с лиофилизированными бактериями определенного штамма, следуя инструкциям, прилагаемым к данному штамму. Ресуспензируют образец в 5 мл буферного раствора TSB (см. 6.2). Получают образец суспензии и вносят его в чашку Петри (см. 5.17), содержащую TSA (см. 6.3). Инкубируют культуры в течение 18-24 ч при температуре (37±2) °С.
После инкубации используют культуру, изолированную с чашки Петри, для проверки ее чистоты.
После проверки готовят основную культуру.
Берут 0,7 мл образца бульонной культуры и распределяют его по поверхности чашки Петри, содержащей TSA. Выращивают культуру на чашке Петри с TSA в течение 18-24 ч при определенных для данного штамма условиях.
Добавляют 10 мл раствора, защищающего от низких температур (см. 6.13), на поверхность чашки Петри с TSA культурой и ресуспендируют клетки в растворе, используя стерильный стеклянный шпатель. Образец ресуспендированных клеток с поверхности агара разводят в 100 мл раствора, защищающего от низких температур, и инкубируют в течение 30 мин при температуре 20 °С.
Используя пипетку (см. 5.15), 1 мл суспензии переносят в криогенную колбу (см. 5.16), содержащую бусы (см. 5.19). Колбу встряхивают таким образом, чтобы распределить клеточную бактериальную взвесь по бусам.
- Если раствор, защищающий от низких температур, содержит диметилсульфооксид, не следует оставлять его более чем на 1 мин при комнатной температуре.
- Раствор, защищающий от низких температур, содержащий глицерин, оставляют на 30 мин при температуре 20 °С.
- Стерильной пипеткой удаляют излишки раствора, защищающего от низких температур. Помещают колбы в морозильную камеру (см. 5.12) температурой минус 70 °С или ниже.
Хранят криогенную колбу в морозильной камере при температуре ниже минус 70 °С.
7.2.3 Метод суспензии с глицерином
Инокулируют свежевыращенную изолированную колонию в пробирку объемом 15 мл, содержащую 5 мл соответствующей среды. Проводят инкубацию в термостате при температуре 37 °С до наступления поздней логарифмической или стационарной фазы (обычно от 5 ч инкубации и до инкубации в течение ночи).
Для каждого из штаммов, который хранится при температуре ниже минус 70 °С, готовят стерильную, снабженную ярлыком пробирку для низких температур.
В пробирку наливают 225 мкл стерильного 80%-ного глицерина. Затем в нее вносят 1,0 мл бактериальной культуры (замороженный образец должен содержать 15% глицерина). Тщательно перемешивают, используя миксер (см. 5.4). Культуру хранят в пробирке при температуре минус 70 °С и ниже.
Для хранения любого из штаммов при температуре ниже минус 20 °С используют жидкий глицерин. В маркированную полипропиленовую пробирку для низких температур вносят равные объемы 80%-ного глицерина и бактериальной культуры. Для предотвращения образования ледяных кристаллов, уменьшающих жизнеспособность клеток бактерий, взвесь в пробирке тщательно перемешивают. Помещают пробирку в морозильную камеру при температуре минус 20 °С. Через 1 неделю, по возможности, проверяют жизнеспособность клеток бактерий.
Для оживления штамма после хранения в глицерине при температуре минус 70 °С используют стерильную зубочистку, чтобы отделить частичку твердого вещества. Затем штрихом высевают клетки в соответствующую среду. Не следует замораживать данный образец вновь, так как каждый цикл замораживания/размораживания приводит к 50% потере жизнеспособности клеток (бактерий).
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.