ГОСТ Р 53162-2008 Продукты пищевые. Определение афлатоксина B(1) и общего содержания афлатоксинов B(1), B(2), G(1) и G(2) в зерновых культурах, орехах и продуктах их переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.

ГОСТ Р 53162-2008

(ИСО 16050:2003)

Группа Н00

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

 Определение афлатоксина В

и общего содержания афлатоксинов B

, B

, G

и G

в зерновых культурах, орехах и продуктах их перерабтки

 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

 Foodstuffs. Determination of aflatoxin B

and the total content of aflatoxin B

, B

, G

and G

in cereals, nuts and derived products. High-performance liquid chromatographic method

ОКС 67.060

         67.080.10

Дата введения 2010-01-01

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе русской версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. N 600-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 16050:2003 "Продукты пищевые. Определение афлатоксина В

и общего содержания афлатоксинов В

, В

, G

и G

в зерновых культурах, орехах и продуктах переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии" (ISO 16050:2003 "Foodstuffs - Determination of aflatoxin B

and the total content of aflatoxin B

, B

, G

and G

in cereals, nuts and derived products - High-performance liquid chromatographic method"). При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст национального стандарта, приведены для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации и выделены курсивом.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении В

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой, с очисткой на иммуноаффинной колонке и послеколоночной дериватизацией, для определения афлатоксинов в зерновых культурах, орехах и продуктах переработки.

Предел количественного определения афлатоксина В

и суммы афлатоксинов В

, В

, G

и G

- 8 мкг/кг.

Данный метод применим в отношении кукурузы с содержанием 24,5 мкг/кг, арахисового масла с содержанием 8,4 мкг/кг и сырых арахисовых орехов с содержанием 16 мкг/кг общей суммы афлатоксинов. Метод допускается использовать для масличных культур, сушеных фруктов и продуктов их переработки.

Настоящий стандарт допустимо использовать только после уточнения условий измерений в конкретной лаборатории, валидации полученной процедуры измерений применительно к решению поставленной аналитической задачи (к конкретным объектам, конкретным диапазонам измерений и т.п.), разработки документа на методику и ее аттестации в соответствии с ГОСТ Р 8.563.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 8.563-96 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696-1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Сущность метода*

Анализируемый образец экстрагируют смесью метанола и воды. Экстракт образца фильтруют, разбавляют водой и вводят в колонку для аффинной хроматографии, содержащую антитела, специфичные для афлатоксинов В

, В

, G

и G

. Афлатоксины выделяют, очищают и концентрируют на колонке, после чего отделяют от антител при помощи метанола. Афлатоксины определяют количественно при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой с определением флуоресценции и послеколоночной дериватизацией.

      4 Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок квалификации х.ч. или ч.д.а.

4.1 Вода, соответствующая не ниже 1-й степени по ГОСТ Р 52501.

Вода не должна содержать органические примеси.

4.2 Хлорид натрия по ГОСТ 4233.

4.3 Йод кристаллический по ГОСТ 4159.

4.4 Афлатоксин, кристаллический или в виде пленочной ампулы.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Афлатоксины канцерогенны для человека. Следует принимать во внимание заявление, сделанное Международным агентством по исследованиям в области рака (ВОЗ) (см. [1], [2]).

Необходимо надлежащим образом предохранять лабораторию, в которой проводятся анализы, от дневного света. Для этого закрывают окна фольгой, поглощающей ультрафиолетовое излучение. Допускается использовать в комбинации с затемненным освещением (когда отсутствует прямое солнечное освещение) занавески или шторы в комбинации с искусственным освещением.

4.5 Ацетонитрил, степень чистоты для ВЭЖХ.

4.6 Метанол, ГОСТ 6995, степень чистоты ВЭЖХ.

4.7 Толуол ГОСТ 5789.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Толуол огнеопасен и токсичен. Приготовление стандартов с использованием данного растворителя следует проводить в вытяжном шкафу. Операции за пределами вытяжного шкафа, такие как измерение эталонов методом УФ спектрометрии, следует проводить с использованием эталонов в закрытых контейнерах.

4.8 Смесь толуол/ацетонитрил

Смешивают 98 объемных частей толуола (4.7) с двумя объемными частями ацетонитрила (4.5) (см. предупреждение в 4.7).

4.9 Растворитель для экстракции

Смешивают семь объемных частей метанола (4.6) с тремя объемными частями воды (4.1).

Другие смеси - растворители для экстракции, которые совместимы с подвижной фазой, могут также использоваться, если покажут себя более эффективными или будут рекомендованы производителем иммуноаффинной колонки.

4.10 Подвижная фаза

Смешивают три объемные части воды (4.1) с одной объемной частью ацетонитрила (4.5) и одной объемной частью метанола (4.6). Перед использованием проводят дегазацию раствора.

4.11 Реагент для послеколоночной дериватизации

Растворяют 100 мг йода (4.3) в 2

см

метанола (4.6). Добавляют 200

см

воды (4.1), перемешивают в течение 1 ч, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.8). Раствор готовят на неделю использования и хранят в темноте или в склянке из коричневого стекла. Перед использованием раствор встряхивают в течение 10 мин.

4.12 Основные стандартные растворы афлатоксинов В

, В

, G

и G

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Предохраняйте растворы, содержащие афлатоксины, от действия света (храните в темноте, используйте алюминиевую фольгу или затемненную стеклянную посуду).

Афлатоксины В

, В

, G

и G

растворяют по отдельности в смеси толуол/ацетонитрил (4.8), для получения индивидуальных растворов с массовой концентрацией вещества 10 мкг/

см

.

Для определения точной концентрации афлатоксина в каждом исходном растворе регистрируют спектр поглощения при длинах волн от 330 до 370 нм в кварцевых кюветах толщиной 1 см (5.7), используя спектрометр (5.6). Рассчитывают концентрацию каждого афлатоксина

, мкг/

см

, используя уравнение (1):

,                                                        (1)

где

- оптическая плотность, определяемая в максимуме спектра поглощения;

       

     - молекулярная масса каждого афлатоксина, г/моль;

- коэффициент молярного поглощения каждого афлатоксина в смеси толуол/ацетонитрил.

Примечание - Это значение определено для раствора, который содержит

1 моль/дм

афлатоксина и находится в кюветах с длиной оптического пути

1 см. Коэффициент молярного поглощения (

) применяют без единиц измерения, допускается применять уравнение

, ему соответствует единица измерений: дм

·

моль

·см

;

- длина оптического пути кюветы, см.

и

приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Молекулярные массы и коэффициенты молярного поглощения афлатоксинов В

, В

, G

и G

Афлатоксин	, г/моль
B	312	19300
B	314	20400
G	328	16600
G	330	17900
Примечание - В качестве растворителя используется смесь толуола и ацетонитрила (4.8).

4.13 Основной стандартный раствор смеси афлатоксинов

Готовят исходный раствор, содержащий 500 нг/

см

афлатоксина В

, 125 нг/

см

афлатоксина В

, 250 нг/

см

афлатоксина G

и 125 нг/

см

афлатоксина G

в смеси толуол/ацетонитрил (4.8). При необходимости хранения раствора взвешивают колбу. Колбу плотно оборачивают алюминиевой фольгой и хранят при температуре около 4

°

С. Непосредственно перед использованием колбу взвешивают снова и отмечают любые изменения в массе после хранения.

Примечание - Обычное воздействие УФ-излучения во время измерения оптической плотности не приводит к заметной конверсии с образованием продуктов фотолиза.

4.14 Градуировочный раствор смеси афлатоксинов

Каждую порцию основного стандартного раствора смеси афлатоксинов (4.13), как это указано в таблице 2, переносят в четыре мерные колбы вместимостью 2

см

(5.5). Растворы выпаривают до сухого остатка в токе азота при комнатной температуре. В каждую колбу добавляют 1

см

метанола (4.6). Растворяют в нем сухой остаток, разбавляют раствор до метки водой (4.1) и перемешивают. Растворы готовят непосредственно в день использования.

Таблица 2 - Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор	Объем, отобранный из исходного раствора, мкл	Концентрация афлатоксина, нг/ см
		B	B	G	G
1	60	15,0	3,75	7,50	3,75
2	40	10,0	2,50	5,00	2,50
3	20	5,00	1,25	2,50	1,25
4	10	2,50	0,625	1,25	0,625
Примечание - Указанные значения приведены в качестве ориентиров. Точные значения массовой концентрации растворов вычисляют исходя из значений, рассчитанных по формуле (1) - см. 4.12.

4.15 Серная кислота по ГОСТ 4204, раствор

(H

SO

)=2 моль/

дм

.

      5 Оборудование

Лабораторную стеклянную посуду, которая контактирует с водными растворами афлатоксинов в серной кислоте (4.15), погружают в воду на несколько часов, затем тщательно промывают (например три раза) водой, чтобы удалить все следы кислоты. Отсутствие кислоты проверяют с помощью индикаторной бумаги.

Примечание - Данная обработка является необходимой, так как использование стеклянной посуды, промытой не кислотой, может привести к потере афлатоксинов. На практике данная обработка необходима для круглодонных колб, мерных колб, мерных цилиндров, склянок или пробирок, используемых для градуировочных растворов и конечных экстрактов (особенно автоматических пипеток), а также пастеровских пипеток, если они используются для переноса градуировочных растворов или экстрактов.

Обычное лабораторное оборудование и, в частности, то, которое приводится ниже.

5.1 Иммуноаффинная (IA) колонка

IA колонка содержит антитела, предназначенные для афлатоксинов В

, В

, G

и G

. Колонка должна иметь минимальную емкость не менее 100 нг афлатоксина В

и должна давать выход не менее 80% для афлатоксинов В

, В

и G

и не менее 60% для афлатоксина G

при внесении в колонку 15

см

градуировочного раствора, содержащего 5 нг каждого афлатоксина в смеси метанол/вода [одна часть метанола (4.6) и три-четыре части воды (4.1) по объему]. Колонка должна быть оборудована подходящей емкостью для растворителя (например шприцем с переходной насадкой).

5.2 Блендер, с баком смесителя на 500 мл и крышкой.

Рекомендуется использование высокоскоростного блендера.

5.3 Рифленая фильтровальная бумага, например, диаметром 24 см.

5.4 Фильтровальная бумага из стеклянного микроволокна, например, диаметром 11 см.

5.5 Мерные колбы

по

ГОСТ 1770, вместимостью 2

см

или пикнометры по

ГОСТ 22524

.

Примечание - При использовании пикнометров рекомендуется измерять фактическое значение вместимости и использовать его при обработке результатов измерений в качестве величины

[см. формулу (3)].

5.6 Спектрофотометр, предназначенный для измерения оптической плотности в диапазоне длин волн от 200 до 400 нм.

5.7 Кюветы из кварцевого стекла толщиной 1 см, не имеющие существенного поглощения в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм.

5.8 Мембранный фильтр для водных растворов, изготовленный из политетрафторэтилена, диаметром 4 мм и размером пор 0,45 мкм.

5.9 Оборудование для ВЭЖХ

5.9.1 Насос ВЭЖХ, способный производить скорость потока 1

см

/мин.

5.9.2 Система ввода (инжектор), со шприцевой загрузкой и петлей 50 мкл или эквивалентным.

5.9.3 Аналитическая разделяющая колонка с обращенной фазой, например С

, которая обеспечивает разрешение пиков афлатоксинов В

, В

, G

, и G

до базовой линии от всех остальных пиков и которая имеет следующие характеристики:

- длина: 250 мм;

- внутренний диаметр: 4,6 мм;

- размер сферических частиц: 5 мкм.

Допускается использование колонки меньшей длины.

5.9.4 Система послеколоночной дериватизации, состоящая из безпульсационного насоса и тройника, имеющего очень малый мертвый объем, системы труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали длиной от 3000 до 5000 мм и внутренним диаметром 0,5 мм, а также водяной бани или послеколоночного реактора для реакции с участием йода.

5.10 Флуоресцентный детектор, пригодный для работы при длине волны возбуждения 365 нм и излучении при длине волны эмиссии 435 нм (для фильтровых приборов длина волны регистрации излучения >400 нм),

с пределом детектирования не более

0,05 нг афлатоксина В

в объеме ввода (в данном случае он равен 50 мкл).

      6 Методика испытания*

6.1 Общие замечания

Растворы проб и стандартные растворы для определения с помощью ВЭЖХ должны содержать одинаковый растворитель или смесь растворителей.

6.2 Экстракция

Взвешивают 25 г гомогенизированной пробы, с точностью 0,1 г в сосуде блендера (см. 5.2). Добавляют 5 г хлорида натрия (см. 4.2) и 125

см

растворителя для экстракции (см. 4.10) и гомогенизируют с помощью перемешивающего устройства в течение 2 мин при высокой скорости. Контролируют, чтобы время и скорость перемешивания не оказывали негативного влияния на эффективность экстракции. Смесь фильтруют через рифленую фильтровальную бумагу (см. 5.3) (

).

Отбирают пипеткой 15

см

(

) фильтрата в коническую колбу подходящего размера со стеклянной пробкой. Добавляют 30

см

воды, закрывают колбу пробкой и перемешивают. Перед проведением аффинной колоночной хроматографии разбавленный экстракт фильтруют через фильтровальную бумагу из стеклянного микроволокна (5.4). Фильтрат (

) должен быть прозрачным. Если это не так, проводят повторную фильтрацию. Незамедлительно следуют процедурам в соответствии с 6.3.

Для получения прозрачного раствора можно также использовать центрифугу.

6.3 Очистка

Готовят IA колонку (см. 5.1) и осуществляют процедуру очистки в соответствии с инструкциями производителя. Отбирают пипеткой 15

см

 (

) второго фильтрата (

) в емкость для растворителя IA колонки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в инструкциях производителя, и удаляют элюаты. Начинают проводить элюирование афлатоксинов. Собирают этанольный или ацетонитрильный элюат (в зависимости от продукта или инструкций производителя) в мерной колбе вместимостью 2

см

(см. 5.5) (или другого объема, установленного производителем). Разбавляют до метки водой (

). Перемешивают и действуют в соответствии с 6.4.

Методы ввода в IA колонки, промывания и элюирования немного отличаются, в зависимости от производителя колонки, и необходимо четко следовать конкретным инструкциям, прилагаемым к колонкам.

Примечание - В целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтрацию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).

Допускается использовать традиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной экстракции. В этих случаях также необходимо четко следовать инструкциям производителя. Если растворитель, применяемый для элюирования афлатоксинов, не совместим с подвижной фазой, то элюат необходимо выпарить до сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40

°

С. Остаток необходимо растворить в подвижной фазе и разбавить до 2

см

или до того объема, который установлен производителем.

Необходимо предусмотреть, чтобы максимальная емкость колонки не была превышена.

6.4 Условия работы при выполнении ВЭЖХ

Выход разделительной колонки подсоединяют к одному ответвлению тройника системы послеколоночной дериватизации (5.9.4) с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диаметром, например, 0,25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который поставляет реагент для послеколоночной дериватизации. Один конец витка труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали (см. 5.9.4) присоединяют к третьему ответвлению тройника и другой конец присоединяют к детектору (см. 5.10). Используя термостат или водяную баню, поддерживают температуру реакционного змеевика на уровне 70 °С.

В случае использования колонки, указанной в 5.9.3, подходящими являются следующие параметры:

- скорость потока подвижной фазы (колонка): 1,0

см

/мин;

- скорость потока послеколоночного реагента: 0,3

см

/мин;

- впрыскиваемый объем: 50 мкл.

Дают всей системе функционировать 10-20 мин для ее стабилизации. Если используется интегратор, настраивают регулировку чувствительности флуоресцентного детектора или интегратора, чтобы получить соответствующий сигнал: шум 5:1 для 0,125 нг афлатоксина G

в 50 мкл. Если используется регистрирующий прибор с ленточной диаграммой, настраивают регулировку флуоресцентного детектора таким образом, чтобы получить для 0,125 нг афлатоксина G

в 50 мкл от 30% до 40% шкалы

регистрирующего прибора

.

6.5 Идентификация

Проводят идентификацию каждого пика афлатоксина на хроматограмме образца путем сравнения значений времени удерживания со значениями соответствующих стандартов.

Афлатоксины можно идентифицировать одновременным вводом раствора испытуемой пробы и градуировочных растворов. Кроме того, при идентификации помогает исчезновение пиков афлатоксинов В

и G

в случае, когда не проводится добавка реагента для дериватизации.

6.6 Построение градуировочной зависимости

Для каждого афлатоксина строят градуировочную зависимость путем ввода 50 мкл стандартных растворов 1, 2, 3 и 4 (см. таблицу 2). Проверяют линейность зависимости (см. [3]).

6.7 Определение

Количественное определение проводится методом внешнего стандарта с интегрированием площади пика или измерением высоты пика, которые далее соотносятся с соответствующими значениями для стандарта.

В петлю инжектора вводят 50 мкл стандартного раствора в соответствии с инструкциями производителя инжектора. Афлатоксины элюируют в порядке G

, G

, B

и В

с временем удерживания приблизительно 6, 8, 9 и 11 мин соответственно. Пики должны быть разделены до базовой линии. При необходимости регулируют значения времени удерживания путем изменения концентрации метанола подвижной фазы (4.11).

Вводят 50 мкл (

) очищенного экстракта образца (см. 6.3) в инжекторную петлю.

      7 Обработка* результатов

Рассчитывают массу

, г, анализируемой пробы, присутствующей во фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки (

), по формуле

,                                                                (2)

где

- масса пробы образца (см. 6.2), г (

25

г);

- общий объем первого фильтрата (см. 6.2),

см

(

125

см

);*

- объем фракции первого фильтрата (см. 6.2), взятый для разбавления,

см

(

15

см

);

- общий объем второго фильтрата (см. 6.2),

см

(

45

см

);

- объем фракции второго фильтрата (см. 6.3),

с

м

(

15

см

).

________________

* Принимая во внимание данные по точности метода,

может рассматриваться как эквивалент объема растворителя экстракции.

Рассчитывают массовую долю каждого афлатоксина

, в микрограммах на килограмм пробы, вычисляют по формуле (метод внешнего стандарта)

,                                                               (3)

где

- объем элюата (6.3), мкл (

2000 мкл);

- объем очищенного и введенного экстракта образца (6.7), мкл (

50 мкл);

- масса

данного

афлатоксина, присутствующего в введенном объеме, соответствующая измеренной площади пика или высоте пика, определяемая по градуировочной характеристике, в нанограммах;

- масса

анализируемой

пробы, г, соответствующей фракции второго фильтрата, взятого для IA колонки (

) [см. формулу (2)].

Для получения массовой доли суммы афлатоксинов суммируют массовые доли четырех афлатоксинов.

      8 Прецизионность

8.1 Межлабораторное сравнительное испытание

Детали межлабораторного сравнительного испытания прецизионности данного метода приведены в приложении А. Значения, полученные в результате межлабораторного сравнительного испытания, могут быть неприменимы к диапазонам концентраций и матрицам, отличным от тех, которые приведены в приложении А.

8.2 Повторяемость

Абсолютная разница между двумя независимыми отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, идентичных материалов для испытаний в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором с использованием того же оборудования в течение короткого интервала времени, будет превышать предел повторяемости

, значения которого приведены ниже, не более чем в 5% случаев.

Значения для кукурузы:

- афлатоксин В : 14,9 мкг/кг,	2,4 мкг/кг,
- афлатоксин В : 1,4 мкг/кг,	1,0 мкг/кг,
- афлатоксин G : 7,2 мкг/кг,	1,9 мкг/кг,
- афлатоксин G : 1,0 мкг/кг,	0,6 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

24,5 мкг/кг.

b) Значения для арахисового масла:

- афлатоксин В : 5,3 мкг/кг,	2,2 мкг/кг,
- афлатоксин В : 0,6 мкг/кг,	0,3 мкг/кг,
- афлатоксин G : 2,3 мкг/кг,	1,5 мкг/кг,
- афлатоксин G : 0,2 мкг/кг,	0,5 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

8,4 мкг/кг.

с) Значения для арахиса:

- афлатоксин В : 9,7 мкг/кг,	1,5 мкг/кг,
- афлатоксин В : 1,1 мкг/кг,	0,7 мкг/кг,
- афлатоксин G : 4,5 мкг/кг,	0,8 мкг/кг,
- афлатоксин G : 0,6 мкг/кг,	0,8 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

16 мкг/кг.

Основываясь на полученных результатах, содержание афлатоксинов в арахисовом масле можно только оценить. В случае кукурузы и арахисовых орехов афлатоксины В

и G

могут быть определены, а афлатоксины В

и G

могут быть только обнаружены, и их содержание может быть оценено качественно.

8.3 Воспроизводимость

Абсолютная разница между двумя отдельными результатами испытаний, полученными при использовании одинакового метода, идентичных материалов для испытаний, в различных лабораториях, различными операторами и с использованием различного оборудования, будет превышать предел воспроизводимости

, значения которого приводятся ниже, не более чем в 5% случаев.

а) Значения для кукурузы:

- афлатоксин В : 14,9 мкг/кг,	4,2 мкг/кг,
- афлатоксин В : 1,4 мкг/кг,	1,2 мкг/кг,
- афлатоксин G : 7,2 мкг/кг,	1,9 мкг/кг,
- афлатоксин G : 1,0 мкг/кг,	1,5 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

24,5 мкг/кг.

b) Значения для арахисового масла:

- афлатоксин В : 5,3 мкг/кг,	4,4 мкг/кг,
- афлатоксин В : 0,6 мкг/кг,	0,6 мкг/кг,
- афлатоксин G : 2,3 мкг/кг,	2,0 мкг/кг,
- афлатоксин G : 0,2 мкг/кг,	0,7 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

8,4 мкг/кг.

с) Значения для арахиса:

- афлатоксин В : 9,7 мкг/кг,	4,5 мкг/кг,
- афлатоксин В : 1,1 мкг/кг,	1,2 мкг/кг,
- афлатоксин G : 4,5 мкг/кг,	1,8 мкг/кг,
- афлатоксин G : 0,6 мкг/кг,	1,4 мкг/кг,

- общее содержание афлатоксинов:

16 мкг/кг.

Основываясь на полученных результатах, содержание афлатоксинов в арахисовом масле можно только оценить качественно. В случае кукурузы и арахиса афлатоксины В

и G

могут быть определены, а афлатоксины В

и G

могут быть только обнаружены, и их содержание может быть оценено качественно.

      9 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

- используемый метод отбора образцов, если он известен;

- используемый метод испытаний, со ссылкой на настоящий стандарт;

- детали проведения работ, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также все факторы, влияющие на результат(ы) испытаний;

- полученные результат(ы) испытаний или, если была проведена проверка повторяемости, полученный окончательный результат.

Приложение А

(справочное)

 Результаты межлабораторного сравнительного испытания

Нижеприведенные данные получены в процессе межлабораторного сравнительного испытания, которое проводилось в 1999 г. и было организовано АОАС и ИЮПАК (Международный союз теоретической и прикладной химии) в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1. Были исследованы образцы кукурузы, арахисовых орехов и арахисового масла, имеющие естественное загрязнение и зафиксированные на уровне 10, 20 и 30 мкг/кг общей суммы афлатоксинов с соотношением афлатоксинов В

, В

, G

и G

- 7:1:3:1 соответственно.

В исследовании участвовало десять лабораторий, имелся один экземпляр каждого образца. Во время проведения данного межлабораторного сравнительного испытания в качестве реагента послеколоночной дериватизации использовался йод.

Таблица А.1 - Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для кукурузы

Параметр	Афлатоксин
	B	B	G	G	Сумма
Число лабораторий, оставшихся после исключения резко отличающихся лабораторий	9	9	9	10	9
Число принятых результатов	18	18	18	20	18
Среднее значение , мкг/кг	14,88	1,38	7,18	1,05	24,49
Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг	0,68	0,35	0,68	0,20	1,79
Коэффициент вариации сходимости, %	5,8	25	9,5	19	7,3
Предел сходимости ( ), мкг/кг	2,4	0,98	1,90	0,56	5,0
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	1,50	0,41	0,68	0,53	2,86
Коэффициент вариации воспроизводимости, %	10	30	9,5	51	11,7
Предел воспроизводимости ( ), мкг/кг	4,20	1,15	1,90	1,48	8,01
Выход, %	85	55	96	42	81

Таблица А.2 - Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для арахисового масла

Параметр	Афлатоксин
	B	B	G	G	Сумма
Число лабораторий, оставшихся после исключения резко отличающихся лабораторий	10	9	10	10	10
Число принятых результатов	20	18	20	20	20
Среднее значение , мкг/кг	5,26	0,58	2,34	0,24	8,42
Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг	0,78	0,12	0,55	0,19	1,45
Коэффициент вариации сходимости, %	14,9	21	24	79	17
Предел сходимости ( ), мкг/кг	2,2	0,34	1,54	0,53	4,06
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	1,56	0,22	0,71	0,24	2,54
Коэффициент вариации воспроизводимости, %	30	38	31	101	30
Предел воспроизводимости ( ), мкг/кг	4,37	0,62	1,99	0,67	7,11
Выход, %	90	70	93	29	84

Таблица А.3 - Данные по прецизионности и открываемости афлатоксина для арахиса

Параметр	Афлатоксин
	B	B	G	G	Сумма
Число лабораторий, оставшихся после исключения резко отличающихся лабораторий	9	10	10	10	9
Число принятых результатов	18	20	20	20	18
Среднее значение , мкг/кг	9,71	1,07	4,54	0,65	16
Стандартное отклонение сходимости , мкг/кг	0,53	0,25	0,28	0,27	0,83
Коэффициент вариации сходимости, %	5,5	23	6,2	42	5,2
Предел сходимости ( ), мкг/кг	1,48	0,70	0,78	0,76	2,3
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	1,62	0,41	0,66	0,50	2,58
Коэффициент вариации воспроизводимости, %	17	38	15	77	16
Предел воспроизводимости ( ), мкг/кг	4,54	1,15	1,85	1,4	7,22
Выход, %	83	64	91	39	80

Приложение В

(справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок

Таблица В.1

Библиография

[1]	Castegnaro M., Hunt D.C., Sansone E.B., Schuller P.L., Siriwardana M.G., Telling G.M., van Egmond H.P. и Walker E.A. Лабораторная очистка и разрушение афлатоксинов В , В , G и G в лабораторных отходах. Научная публикация IARC N 37, Международное агентство по исследованиям в области рака (ВОЗ), Лион (Франция), 1980 г., стр.59
[2]	Castegnaro M., Barek J., Fremy J.M., Lafontaine M., Miraglia M., Sansone E.B. и Telling G.M. Лабораторная очистка и разрушение канцерогенов в лабораторных отходах: некоторые микотоксины. Публикация IARC N 113, Международное агентство по исследованиям в области рака (ВОЗ), Лион (Франция), 1991 г., стр.63
[3]	Van Trijp J.M.P. и Roos A.H. Модель для расчета калибровочных кривых, доклад RIKILT, 91, 02, январь 1991 г.
[4]	Trucksess M.W. и др. Иммуноаффинная колоночная хроматография в сочетании с флуорометрией раствора или послеколоночной дериватизацией жидкой хроматографии для определения афлатоксинов в зерне, арахисе и арахисовом масле. Журнал Ассоциации уполномоченных химиков-аналитиков, 74(1), 1991 г., стр.81-88
[5]	ИСО 31-0:1992	Величины и единицы. Часть 0. Основные принципы
[6]	ЕН 12955:1999	Пищевые продукты. Определение афлатоксина B и общего содержания афлатоксинов B , В , G и G в зерновых культурах, плодах с кожурой и продуктах переработки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с послеколоночной дериватизацией и чисткой иммуноаффинной колонки
[7]	ЕН 14123:2003	Пищевые продукты. Определение афлатоксина B и общего содержания афлатоксинов B , В , G и G в арахисе, фисташках, инжире и порошке паприки. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с послеколоночной дериватизацией и чисткой иммуноаффинной колонки