ГОСТ ISO 16931-2014 Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ).

   

ГОСТ ISO 16931-2014

 

      

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 

 

 Жиры и масла животные и растительные

 

 ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИМЕРИЗОВАННЫХ ТРИАЦИЛГЛИЦЕРИНОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЭКСКЛЮЗИОННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЭХ)

 

 Animal and vegetable fats and oils. Determination of polymerized triacylglycerols by high-performance size-exclusion chromatography (HPSEC)

МКС 67.200.10

Дата введения 2017-07-01

 

      

     

 

 Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

           

Сведения о стандарте

 

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" и Техническим комитетом по стандартизации Республики Казахстан ТК 72 в области нанотехнологий

 

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан

 

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

 

За принятие проголосовали:

 

 

 

 

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Молдова

MD

Молдова-Стандарт

Россия

RU

 

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

Узбекистан

UZ

 

Узстандарт

 

(Поправка).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 мая 2016 г. N 393-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16931-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

 

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 16931:2009* ("Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания полимеризованных триацилглицеринов методом высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ)" ("Animal and vegetable fats and oils - Determination of polymerized triacylglycerols by high-perfomance size-exclusion chromatography (HPSEC)", IDT).

 

           

Настоящий межгосударственный стандарт был разработан Техническим комитетом ISO/TC 34 "Пищевые продукты", Подкомитетом SC 11 "Животные и растительные жиры и масла".

 

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного международного стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

 

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

 

7 ИЗДАНИЕ (декабрь 2019 г.) с Поправкой (ИУС N 6-2019)

 

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

 

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

           

 

 

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод с использованием высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ВЭЭХ) для определения содержания, в массовых долях, полимеризованных триацилглицеринов (PTAGs) в маслах и жирах, которые содержат не менее 3% (по площадям пиков) этих полимеров. PTAGs (это двумерные и олигомерные триацилглицерины) образуются при нагреве жиров и масел, и этот метод применяют для оценки термической деградации обжарочных жиров после использования.

 

Этот метод применим к обжарочным жирам и маслам, которые были термически обработаны, при условии, что содержание PTAGs составляет не менее 3%. Данный метод применим для определения полимеризованных триацилглицеринов в жирах для животных кормов, в этом случае используемый метод экстрагирования может повлиять на результат.

 

Примечание - Подробное описание метода см. в [1].

 

 

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий международный стандарт:

               

ISO 661, Animal and vegetable fats and oils. Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Подготовка пробы для испытания).

 

 

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

 

3.1 полимеризованные триацилглицерины (polymerized triacylglycerols; PTAGs): Составляющие нагретых жиров и масел, которые определяют методом ВЭЭХ в условиях, установленных в настоящем стандарте.

Примечание - Содержание PTAGs выражается как процентная массовая доля в граммах на 100 г продукта и рассчитывается как процент площади пика от суммы площадей всех пиков, обусловленных элюированными полимеризованными и моно-, ди- и триацилглицеринами (PTAGs, MAGs, DAGs и TAGs).

 

 

      4 Сущность метода

Пробу тщательно смешивают с тетрагидрофураном (THF) до образования однородной смеси, и PTAGs разделяют с применением гель-проникающей хроматографии в соответствии с молекулярным весом. Соединения проверяют с помощью рефрактометрического детектора.

 

Примечание - Для лучшего разрешения используют последовательно две колонки (2х300 мм).

 

 

      5 Реактивы

Используют реактивы только признанной аналитической чистоты.

 

Примечание - Необходимо обратить внимание на регламент, который устанавливает процедуры работы с опасными веществами. Должны соблюдаться технические, организационные и индивидуальные меры безопасности.

 

5.1 Тетрагидрофуран (THF) для высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), стабилизированный бутилгидрокситолуолом (ВНТ), дегазированный, безводный. THF, используемый в качестве растворителя для пробы, должен иметь такое же содержание воды, как элюент; иначе может наблюдаться отрицательный пик.

 

5.2 Толуол для HPLC.

 

5.3 Оливковое масло первого холодного отжима в качестве стандартного образца: добавить от 100 до 300 мг масла к 10 см
THF и смесь гомогенизировать.
 

Примечание - Оливковое масло первого холодного отжима не содержит PTAGs и может быть использовано для определения времени удержания мономерных TAGs.

 

 

      6 Оборудование

Используют следующее лабораторное оборудование:

 

6.1 Сосуд для растворителя вместимостью от 500 до 1000 см
, с политетрафторэтиленовым линейным фильтром для подвижной фазы.
 
6.2 HPLC-насос, безимпульсный, с объемным расходом от 0,5 до 1,5 см
/мин.
 
6.3 Инжекционный клапан с петлей 20 мкл и соответствующим шприцем объемом от 50 до 100 мм
или с соответствующей автоматической пипеткой.
 
6.4 Колонки из нержавеющей стали, 2 шт., длиной 300 мм, внутренним диаметром от 7,5 до 7,8 мм, наполненные гранулами высокоэффективного геля из сополимера стирола и дивинилбензола диаметром 5 мкм; размер пор от 10 до 50 нм
.
 

_______________

1 нм = 10
.
 

Примечание - Хроматограммы в приложении А показывают требуемое разрешение с двумя колонками.

 

Рекомендуют использование защитной колонки. Эффективность колонки, определяемая как число n теоретических тарелок для мономерных TAGs, должна быть не менее 6000.

 

Температуру колонки поддерживают от 30°С до 35°С с помощью устройства управления.

Колонку держать в токе THF. При необходимости можно хранить в толуоле (5.2).

 

6.5 Детектор, рефрактометрический детектор с регулируемой температурой.

 

Идеальная температура для детектора должна быть выше температуры колонки (от 30°С до 35°С).

 

6.6 Система хроматографических данных (CDS) обеспечивает отображение и точный количественный анализ площадей пиков.

 

6.7 Шприцы одноразового использования объемом 1 см
.
 
6.8 Нейлоновые фильтры, размер пор 0,45 мм
.
.
 

_______________

Nalgene 4 mm Syringe Filter является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой этого продукта. Можно использовать аналогичные продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
 
6.9 HPLC-шприц объемом от 50 до 100 мм
.
 

      7 Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть репрезентативной и не должна быть повреждена или изменена во время транспортировки или хранения.

 

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте.

 

Рекомендованный метод отбора проб приведен в [2].

 

 

      8 Приготовление пробы для испытания

Проба для испытания должна быть приготовлена согласно ISO 661.

 

 

      9 Проведение испытания

9.1 Запуск HPLC-оборудования

 

Необходимо точно следовать рекомендациям изготовителей. Включить систему и закачать THF с объемным расходом от 0,5 до 1 мл/мин, чтобы прочистить всю систему до инжекционного клапана. Соединить колонку с инжекционным клапаном и промыть его, используя 30 см
THF.
 

Присоединить колонку к детекторной ячейке для пробы. Наполнить контрольную ячейку THF.

 

Установить скорость элюента подвижной фазы от 0,5 до 1,0 см
/мин. Подождать, пока не будет получена соответствующая стабилизация системы (без существенного отклонения базовой линии).
 

Если используют колонку, рекомендованную в этом подразделе, приемлемая стабилизация системы наступит примерно через 15 мин. С другими наполнителями колонки стабилизация системы может быть более трудной.

 

Изменение подвижной фазы должно быть ступенчатым от толуола к THF, с применением различных смесей, каждая из которых содержит на 25% больше THF. Приемлемая стабилизация наступит примерно через 12 ч.

Установлены следующие оптимальные условия:

 

 

 

Колонка:

PLgel
10 нм, 2
300 мм
7,6 мм, 5 мкм;
 

     

Элюент:

THF;

Течение:

0,8 мл/мин;

Термостат колонки:

35°С;

Детектор:

RI (показатель преломления) установлен на 35°С;

Инжекционный объем:

20 мкл.

 

_______________

PLgel является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей данного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO. Можно использовать аналогичные продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
 

9.2 Приготовление испытательного образца и анализ

 

Для приготовления раствора необходимо добавить пробу для испытания в количестве от 100 до 300 мг (раздел 8) к 10 см
THF и гомогенизировать. При необходимости отфильтровать через нейлоновый фильтр (6.8). Ввести HPLC-шприцем (6.9) от 20 до 40 мм
этого раствора.
 

      10 Обработка результатов

10.1 Качественный анализ

Хроматограмма определения показывает основной пик, характерный для мономерных TAGs (относительная молекулярная масса около 900), и один или несколько меньших пиков с более коротким временем удержания, характерных для PTAGs (димеры и высшие олигомеры).

 

При соблюдении условий (9.1 и 9.2) TAGs и PTAGs могут быть разделены с хорошим разрешением (рисунки А.1 и А.2) даже при низких уровнях PTAGs.

 

В некоторых случаях (которые, очевидно, связаны со сложными явлениями деградации) картина пиков, предшествующих пикам триацилглицеринов, может быть менее четкой, с последующими трудностями для вычислений (рисунок А.2).

 

10.2 Количественный анализ

 

Вычисление проводят методом внутренней нормализации, предполагая, что все компоненты пробы, которые элюируются, имеют один и тот же коэффициент отклика. Важно иметь прямую базовую линию.

 

Массовую долю PTAGs, в граммах на 100 г продукта
, вычисляют по формуле
 
,
 
где
- сумма площадей пиков для всех PTAGs;
 
- сумма площадей пиков для всех ацилглицеринов (PTAGs, TAGs, DAGs and MAGs).
 

Результаты округляют до первого десятичного знака.

 

      11 Прецизионность

11.1 Межлабораторные испытания

 

Подробная информация о точности метода межлабораторных испытаний приведена в приложении В. Значения, полученные при проведении межлабораторных испытаний, не применимы к диапазонам концентраций и матрицам, кроме указанных в приложении В.

 

11.2 Сходимость

 

Если значения двух независимых результатов испытаний, полученных с использованием одного и того же метода на идентичном исследуемом материале в той же лаборатории одним и тем же оператором с использованием одного и того же оборудования в течение короткого промежутка времени, лежат в пределах диапазона средних значений, приведенных в таблице В.1, абсолютная разница между двумя полученными результатами испытаний должна не более чем в 5% случаев быть больше, чем предел повторяемости
, который в общем случае может быть вычислен путем линейной интерполяции из значений в таблице В.1.
 

11.3 Воспроизводимость

 

Если значения двух независимых результатов испытаний, полученных с использованием одного и того же метода на идентичном исследуемом материале в разных лабораториях разными операторами, использующими различное оборудование, лежат в пределах значений, указанных в таблице В.1, абсолютная разница между этими двумя результатами испытаний должна не более чем в 5% случаев быть больше, чем предел воспроизводимости
, который в общем случае может быть выведен путем линейной интерполяции из значений в таблице В.1.
 

      12 Отчет об испытании

Протокол испытаний должен содержать следующую информацию:

 

а) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

 

б) используемый метод отбора проб, если известно;

в) использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

 

г) все рабочие подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями о любых случаях, которые могут повлиять на результат(ы);

 

д) полученный(ые) результат(ы) или, если воспроизводимость была проверена, конечный результат.

                

 

Приложение А

(информационное)

 

      

Хроматограммы

     

    

 

 

 

Обозначение

 

 

 

1а/1b

поли-/олигомерные TAGs

1b

двумерные TAGs

2

TAGs

3

DAGs

4

MAGs

5

жирные кислоты

 

время

 

отклик

 

Примечание - Условия указаны в 9.1.

 

Рисунок А.1 - ВЭЭХ испытываемой смеси TAGs, DAGs, MAGs и свободных жирных кислот

     

    

 

 

 

Обозначение

 

 

 

1a/1b

 

поли-/олигомерные TAGs

1b

 

двумерные TAGs

2

 

TAGs

3

 

DAGs

4

 

MAGs

5

 

жирные кислоты

 

время

 

отклик

Примечание 1 - Условия указаны в 9.1.

 

Примечание 2 - Порядок элюирования определяется молекулярным размером и относительной молекулярной массой. Во время жарки DAGs не образуются. Однако пик от DAGs увеличивается из-за окисления, обусловленного термической деградацией TAGs до TAGs с двумя фрагментами, С7 или С8, и жирной кислотой С18. Относительная молекулярная масса равна массе DAGs.

 

Рисунок А.2 - ВЭЭХ TAGs и PTAGs: хроматограммы обжарочных масел с различными массовыми долями PTAGs

     

     

Приложение В

(информационное)

 

      

Результаты межлабораторных испытаний

Межлабораторные испытания, проведенные на международном уровне DIN и DGF в 2007 году с участием 15 лабораторий, каждая из которых получила по два результата для каждой пробы, дали статистические результаты (оцененные согласно [3] и [4]), приведенные в таблице В.1.

 

Таблица В.1 - Результаты межлабораторных испытаний

 

 

 

 

 

 

Пробы используемых обжарочных масел

А

В

С

D

Е

Количество лабораторий

15

15

15

15

15

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов

14

15

13

15

14

Количество принятых результатов

28

30

26

30

28

Среднее,
, %
 

5,23

11,95

12,81

15,78

20,42

Стандартное отклонение повторяемости,
 

0,10

0,12

0,11

0,13

0,14

Коэффициент вариации повторяемости,
, %
 

1,9

1,0

0,8

0,8

0,7

Предел повторяемости,
(2,8
)
 

0,28

0,32

0,30

0,37

0,39

Стандартное отклонение воспроизводимости,
 

0,22

0,20

0,19

0,26

0,15

Коэффициент вариации воспроизводимости,
, %
 

4,1

1,7

1,4

1,6

0,7

Предел воспроизводимости,
(2,8
)
 

0,61

0,57

0,52

0,72

0,42

Примечание - Результаты и статистика выражены в граммах на 100 граммов (процентные массовые доли).

 

     

   

Приложение ДА

(информационное)

 

 Сведения о соответствии ссылочного международного стандарта межгосударственному стандарту

Таблица ДА.1

 

 

 

Обозначение ссылочного международного стандарта

Степень соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

ISO 661

IDT

ГОСТ ISO 661-2016 "Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания"

     

Примечание - В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:

 

 

- IDT - идентичные стандарты.

 

 

 

 

          

 

      

 

 Библиография

[1] ISO 6492, Корма для животных. Определение содержания жира (Animal feeding stuffs - Determination of fat content)

 

[2] ISO 5555, Жиры и масла животные и растительные. Отбор проб (Animal and vegetable fats and oils - Sampling)

 

[3] ISO 5725-1:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 1. Общие принципы и определения (Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions)

 

[4] ISO 5725-2:1994, Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 2. Основной метод для определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения (Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method)

 

[5] IUPAC Method 2.508, Определение полимеризованных триглицеридов в маслах и жирах с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа (Determination of polymerized triglycerides in oils and fats by high performance liquid chromatography. Pure Appl. Chem. 1991, 63, pp.1168-1171. Available (2008-10-16) at: http://www. iupac.org/publications/pac/1991/pdf/6308x1163.pdf)

 

 

 

 

УДК 665.2/.3:543

 

МКС 67.200.10

 

Ключевые слова: жиры, масла, полимеризование, триацилглицерин, метод, хроматография

 

Чат GPT

Вверх