ГОСТ 30712-2001 Продукты безалкогольной промышленности. Методы микробиологического анализа.

ГОСТ 30712-2001

Группа Н79

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ БЕЗАЛКОГОЛЬНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ

Методы микробиологического анализа

Products of non-alcoholic industry. Methods of microbiological analysis

МКС 67.160.20

         07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 2002-07-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности (ВНИИ ПБиВП), Техническим комитетом ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность", Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 91 "Пивобезалкогольная и винодельческая продукция"

ВНЕСЕН Госстандартом России

2 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 19 от 24 мая 2001 г.)

За принятие проголосовали:

3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 31 июля 2001 г. N 304-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 30712-2001 введен в действие в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 июля 2002 г.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ИЗДАНИЕ (июль 2010 г.) с Поправкой (ИУС 7-2007)

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты безалкогольной промышленности (безалкогольные и слабоалкогольные напитки, сиропы, концентраты напитков в потребительской таре, напитки на зерновом сырье) и устанавливает методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий), дрожжей и плесневых грибов.

Методы предназначены для определения количества микроорганизмов:

- посевом в агаризованные питательные среды жидкого продукта, содержащие в 1 см

более 15 или в 1 г твердого продукта более 150 колониеобразующих единиц (КОЕ);

- посевом на агаризованные питательные среды жидкого продукта, содержащего в 1 см

более 150 КОЕ, а с применением мембранной фильтрации в продуктах, содержащих в нормируемом объеме 100 и более КОЕ.

(Поправка).

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1341-97 Пергамент растительный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2874-82* Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством

__________________

* На территории Российской Федерации действуют СанПиН 2.1.4.1074-2001 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4159-79 Реактивы. Йод. Технические условия

ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5962-67* Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

__________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 10444.12-88 Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов

ГОСТ 10444.15-94 Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13739-78 Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17206-96 Агар микробиологический. Технические условия

ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные. Общие технические условия

ГОСТ 19569-89* Стерилизаторы паровые медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002.

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

________________

* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29225-91 (ИСО 1775-75) Посуда и оборудование фарфоровые лабораторные. Общие требования и методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ГОСТ 29229-91 (ИСО 835-3-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 3. Пипетки градуированные с временем ожидания 15 с

ГОСТ 29230-91 (ИСО 835-4-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 4. Пипетки выдувные

ГОСТ 30518-97/ГОСТ Р 50474-93* Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52816-2007.

ГОСТ 30519-97/ГОСТ Р 50480-93* Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Sallmonella.

________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52814-2007.

      3 Отбор и подготовка проб

3.1 Отбор проб по ГОСТ 26668 со следующим дополнением:

Перед взятием пробы готового напитка пробку и горловину бутылки, поверхность металлической банки или другой упаковки протирают ватным тампоном, смоченным в 70%-м растворе этилового спирта по ГОСТ 5962. Затем стерильным ключом быстро снимают кроненпробку или пробку бутылки отвинчивают. Горловину открытой бутылки обжигают в пламени спиртовки или протирают 70%-м раствором этилового спирта по ГОСТ 5962 и отбирают необходимый для анализа объем напитка.

Не допускается обжигать над пламенем стеклянную бутылку с газированным напитком, закупоренную кроненпробкой, так как она может взорваться.

3.2 Подготовка проб - по ГОСТ 26669.

      4 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы, материалы

4.1 При проведении испытаний используют:

автоклав или стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569;

весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 1 кг, 3-го класса точности по ГОСТ 24104;

прибор вакуумного фильтрования;

термостаты любого типа, обеспечивающие поддержание заданной температуры от 24°С до 55°С с допустимой погрешностью ±1°С;

шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева 100°С-200°С;

рН-метр или потенциометр;

микроскоп световой биологический любого типа, обеспечивающий увеличение 900-1000

;

ареометр-сахаромер по ГОСТ 18481;

холодильник по ГОСТ 16317;

плитку электрическую с закрытой спиралью по ГОСТ 14919;

баню водяную;

фильтры мембранные для микробиологических целей;

пинцеты медицинские по ГОСТ 21241;

шпатели металлические и стеклянные;

термометры жидкостные стеклянные (нертутные) диапазоном измерений от 0°С до 100°С и ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498;

лупу по ГОСТ 25706;

спиртовку по ГОСТ 25336;

сетку асбестовую;

петли бактериологические;

чашки фарфоровые по ГОСТ 29225;

ключ для вскрытия бутылок;

колбы К, П, Кн вместимостью 50, 100, 250, 500 и 1000 см

по ГОСТ 25336;

пробирки П1, П2, П2Т по ГОСТ 25336;

пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 см

по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228, ГОСТ 29229, ГОСТ 29230;

стаканы типов В и Н вместимостью 100, 150, 250, 400, 600, 800, 1000 см

по ГОСТ 25336;

стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ или СН по ГОСТ 25336;

стекла часовые;

кюветы для окрашивания препаратов;

стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;

стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672;

цилиндры мерные вместимостью от 25 до 2000 см

по ГОСТ 1770;

шарики стеклянные, используемые для обеспечения равномерности кипения;

чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412;

вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;

пергамент по ГОСТ 1341;

бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;

агар микробиологический по ГОСТ 17206;

агар сухой питательный;

среду сухую Кесслер;

среду сухую Эндо;

среду сухую Сабуро;

сусло пивное неохмеленное;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;

бумагу индикаторную универсальную;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;

воду питьевую по ГОСТ 2874;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

калий йодистый по ГОСТ 4232;

йод по ГОСТ 4159;

натрия гидроокись по ГОСТ 4328;

кислоту соляную по ГОСТ 3118;

кристаллический фиолетовый;

фуксин основной.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов, материалов, по техническим характеристикам не уступающих указанным выше.

      5 Подготовка к проведению анализов

5.1 Подготовка посуды

5.1.1 Новую посуду, предназначенную для микробиологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной долей 1% - 2%) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой до полного удаления следов моющего раствора и высушивают в сушильном шкафу.

5.1.2 Пробирки, колбы, бутылки закрывают ватно-марлевыми пробками, покрывают колпачком так, чтобы исключить загрязнение после стерилизации в процессе работы и хранения. Пипетки со вставленными тампонами из ваты упаковывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бактериологические чашки в закрытом виде укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации. Режимы стерилизации посуды - по ГОСТ 26668.

5.1.3 Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

5.1.4 Посуду с питательными средами после подсчета на них колоний микроорганизмов обеззараживают перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при (121±1)°С в течение 30 мин или кипячением в течение 1 ч.

5.2 Приготовление реактивов и растворов

5.2.1 Реактивы для окраски по Граму (модификация Г.П.Калины) - по ГОСТ 10444.1.

Приготовление реактива 1

В 100 см

96%-го ректификованного спирта по ГОСТ 5962 растворяют 0,5 г кристаллического фиолетового.

Приготовление реактива 2

К 96 см

спиртового раствора йодистого калия массовой концентрации 5 г/дм

добавляют 2 см

спиртового раствора основного фуксина массовой концентрации 50 г/дм

и 2 см

спиртового раствора йода массовой концентрации 50 г/дм

.

Йодистый калий растворяют в спирте на водяной бане при температуре (45±5)°С при постоянном помешивании.

5.2.2 Раствор гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм

по ГОСТ 10444.1 (4.17). Готовый раствор стерилизуют при (120±1)°С в течение 20 мин.

Раствор применяется для подщелачивания питательных сред.

5.2.3 Спиртовой раствор основного фуксина массовой концентрации 5 г/дм

по ГОСТ 10444.1 (4.25).

Применяют для повышения дифференцирующих свойств среды Эндо.

5.2.4 Приготовление 70%-го раствора этилового спирта.

Для приготовления 70%-го раствора этилового спирта необходимо к 70 см

96%-го ректификованного этилового спирта добавить 26 см

дистиллированной воды.

Применяют для асептической обработки тары при отборе проб для анализа.

5.2.5 Приготовление стерильной воды

Питьевую воду разливают в колбы или пробирки и стерилизуют в автоклаве при (121±1)°С в течение 30 мин.

5.2.6 Сроки хранения реактивов и растворов не более месяца.

5.3 Приготовление питательных сред

5.3.1 Среда из сухого питательного агара

Среду готовят по прописи на этикетке или используют мясо-пептонный агар, приготовленный по ГОСТ 10444.1 (5.12).

Применяют для определения мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

5.3.2 Среда Кесслер с лактозой

Среду готовят по прописи на этикетке. При приготовлении среды в пробирки или колбы помещают поплавки. Для приготовления среды двойной концентрации навеску среды увеличивают в 2 раза.

Допускается приготовление среды из отдельных ингредиентов по ГОСТ 30518 (4.2.4).

Селективную среду применяют для накопления бактерий группы кишечных палочек.

5.3.3 Среда Эндо

Среду готовят по прописи на этикетке.

Для повышения дифференцирующих свойств в готовую и охлажденную до 60°С-70°С среду перед розливом в чашки допускается прибавлять на 100 см

среды 0,2 см

5%-го спиртового раствора основного фуксина.