ГОСТ ISO 7218-2015 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям.
ГОСТ ISO 7218-2015
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
Microbiology of food and animal feed. General requirements and guidance for microbiological examinations
___________________________________________________________
МКС 07.100.30
Дата введения 2016-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены
ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и
ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 июня 2015 г. N 47-2015)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
4
Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 сентября 2015 г. N 1392-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 7218-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2016 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 7218:2007* "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям" ("Microbiology of foods and animal feeding stuffs - General requirements and guidance for microbiological examinations"), IDT, включая изменение Amd. 1:2013.
Международный стандарт разработан подкомитетом ISO/ТС 34/SC 9 "Микробиология" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном
приложении ДА
6 ВЗАМЕН
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
Введение
При проведении микробиологических исследований особенно важным является следующее:
- необходимо выделять и подсчитывать только те микроорганизмы, которые присутствуют в пробах;
- следует исключить загрязнение окружающей среды микроорганизмами.
Чтобы достичь этого, необходимо уделять особое внимание личной гигиене и использовать рабочие методики, гарантирующие, насколько это возможно, исключение загрязнения извне.
При проведении микробиологических экспертиз является важным знание микробиологических методов и исследуемых микроорганизмов. Также важно, чтобы исследования проводились с максимальной аккуратностью, включая вопросы контроля и регистрации, которые могут влиять на результаты и вычисление количества микроорганизмов, а также вызывать сомнения в полученных результатах.
В конечном счете, ответственность лежит на руководителе лаборатории, который определяет, являются ли методические приемы безопасными и приемлемыми в рамках установившейся лабораторной практики.
Большое количество манипуляций может, например, непреднамеренно приводить к перекрестному загрязнению, и поэтому аналитику требуется всегда проверять точность результатов, полученных посредством методик, используемых в лаборатории.
Чтобы проводить экспертизы правильно, необходимо предпринимать определенные правила безопасности, касающиеся оснащения и оборудования лаборатории.
Необходимо предпринимать меры предосторожности не только по причине гигиены, но также и для того, чтобы гарантировать удовлетворительную воспроизводимость результатов. Невозможно предусмотреть все меры для всех возможных ситуаций, но настоящий стандарт, по меньшей мере, предусматривает основные правила приготовления, стерилизации, хранения питательных сред и использования соответствующего оборудования.
Следование правилам, изложенным в настоящем стандарте, поможет обеспечить безопасность персонала. Дополнительную информацию по этому вопросу можно найти в литературе, указанной в разделе "Библиография".
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает общие требования и дает рекомендации/варианты по трем основным направлениям:
- внедрение стандартов Технического комитета ISO/ТС 34/SC 9 или ТС 34/SC 5 по обнаружению и подсчету микроорганизмов, здесь и далее называемых соответствующими "стандартами на конкретный метод испытания";
- надлежащая лабораторная практика для микробиологических лабораторий, исследующих пищевые продукты (в задачи настоящего стандарта не входит их описание, для этого имеются специальные справочники);
- руководство по аккредитации микробиологических лабораторий (в настоящем стандарте описываются технические требования согласно приложению В, [44] для аккредитации микробиологических лабораторий национальными органами).
Дополнительные требования по исследованиям в области молекулярной биологии приведены в ISO 22174.
Настоящий стандарт распространяется на исследования бактерий, дрожжей и плесеней. Допускается применение настоящего стандарта при исследованиях паразитов и вирусов при условии дополнения конкретными рекомендациями.
Настоящий стандарт не распространяется на исследования токсинов и других продуктов метаболизма микроорганизмов (например, аминов).
Настоящий стандарт применяется в микробиологии пищевых продуктов, кормов для животных, окружающей среды производства пищевых продуктов и производства сырья для пищевых продуктов.
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы*. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).
ISO 835, Laboratory glassware - Graduated pipettes (Посуда лабораторная стеклянная. Градуированные пипетки)
ISO 6887-1:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)
ISO 6887-2:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила для приготовления мяса и мясных продуктов)
ISO 6887-3:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 3: Specific rules for the preparation of fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для приготовления рыбы и рыбных продуктов)
ISO 6887-4:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 4: Specific rules for the preparation of products other than milk and milk products, meat and meat products, and fish and fishery products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для приготовления продуктов, кроме молока и молочных продуктов)
ISO 6887-5:2010 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 5: Specific rules for the preparation of milk and milk products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб для анализа, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования. Часть 5. Специальные правила подготовки молока и молочных продуктов)
ISO 8199:2005 Water quality - General guidance on the enumeration of microorganisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)
ISO 8655-1:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 1: Terminology, general requirements and user recommendations (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 1. Терминология, общие требования и рекомендации пользователю)
ISO 8655-2:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 2: Piston pipettes (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 2. Пипетки, приводимые в действие поршнем)
ISO 8655-3:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 3: Piston burettes (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 3. Бюретки, приводимые в действие поршнем)
ISO 8655-4:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 4: Dilutors (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 4. Разбавители)
ISO 8655-5:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 5: Dispensers (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 5. Раздаточные устройства)
ISO 8655-6:2002 Piston-operated volumetric apparatus - Part 6: Gravimetric methods for the determination of measurement error (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 6. Гравиметрические методы для определения ошибки измерения)
ISO 8655-7:2005 Pistonoperated volumetric apparatus - Part 7: Nongravimetric methods for the assessment of equipment performance (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 7. Негравиметрические методы для оценки рабочих характеристик оборудования)
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of culture media (Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и проверка эксплуатационных характеристик питательных сред)
ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the validation of alternative methods (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки достоверности альтернативных методов)
ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines for the estimation of measurement uncertainty for quantitative determinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство для оценки неопределенности измерения количественных показателей)
ISO 22174:2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens - General requirements and definitions [Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Общие требования и определения]
3 Помещения
3.1 Общие положения
В данном разделе представлены общие требования и принципы планирования и организации при размещении микробиологической лаборатории.
Экспертизу проб на стадии производства пищевого сырья (особенно для приемки проб и стандартной подготовки проб) следует проводить отдельно от исследования других проб, чтобы уменьшить риск перекрестного загрязнения.
3.2 Условия безопасности
Проектирование лаборатории должно учитывать требования безопасности, которые будут зависеть от типа эпидемиологической опасности микроорганизма. По этому принципу микроорганизмы классифицируются на четыре категории риска:
- 1-я группа опасности (группа патогенности) (отсутствие риска или очень низкий риск для отдельного человека и общества).
Вероятность заражения таким микроорганизмом человека или животного мала.
- 2-я группа опасности (группа патогенности) (умеренный риск для отдельного человека, низкий риск для общества).
Это патоген, который может вызвать заболевание у человека или животного, но не представляющий серьезной угрозы для сотрудников лаборатории, общества или окружающей среды. Контакт с таким микроорганизмом в лаборатории может вызвать серьезную инфекцию у человека, но имеются способы эффективного лечения и профилактические меры, а риск распространения инфекции ограничен.
- 3-я группа опасности (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума, низкий риск для общества).
Это патоген, который способен вызвать тяжелую болезнь у человека или животного, но обычно не распространяется от одного инфицированного индивидуума к другому. Существуют способы эффективного лечения и меры профилактики.
4-я группа опасности (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума и для общества).
Это патоген, который обычно вызывает тяжелую болезнь у человека или животного и легко передается от больного к здоровому человеку или животному прямым контактом или с помощью другого механизма передачи возбудителя. Эффективных способов лечения и профилактических мер обычно не существует.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Группа опасности микроорганизма, распространенного в пределах конкретной страны, устанавливается соответствующими национальными нормативными документами.
3.3 Проектирование лаборатории
Рекомендации и правила по принципам обустройства лабораторий, описываемые ниже, применимы к исследованиям по выявлению микроорганизмов, относящихся к 1-й, 2-й и 3-й группам опасности в области микробиологии пищевых продуктов.
Следует принять во внимание, что в зависимости от конкретного национального законодательства может возникнуть необходимость в дополнительных мерах безопасности.
3.4 Участки лаборатории
3.4.1 Общие положения
Лаборатория включает отдельные участки, предназначенные для работы с пробами и их исследованием (см. 3.4.2) и общие помещения (см. 3.4.3). Они должны быть раздельными.
3.4.2 Участки, предназначенные для работы с пробами и их исследованием
Необходимо, чтобы лаборатория имела отдельные помещения или четко обозначенные зоны для следующих операций:
- приемки, регистрации и хранения проб;
- подготовки проб, особенно в случае сырья (например, порошкообразные продукты, содержащие высокое количество микроорганизмов);
- экспертизы проб (начиная от исходной суспензии), включая инкубацию (термостатирование) посевов;
- манипуляций с предполагаемыми патогенами;
- хранения контрольных и других штаммов;
- приготовления и стерилизации питательных сред и оборудования;
- хранения питательных сред и реактивов;
- экспертизы пищевых продуктов на стерильность;
- дезактивации (обеззараживания);
- подготовки стеклянной посуды и другого оборудования;
- хранения опасных химических веществ, предпочтительно в предназначенных для этого боксах, шкафах, отдельных комнатах или строениях.
3.4.3 Общие участки
Отдельно должны быть предусмотрены следующие участки:
- входы, коридоры, лестницы, лифты;
- административные помещения (например, комната для секретаря и офисные комнаты, комнаты для работы с документами и т.д.);
- раздевалки и туалеты;
- помещение для хранения архива;
- кладовые;
- комнаты отдыха.
3.5 Расположение и оснащение помещений
3.5.1 Цели
Цель состоит в том, чтобы условия окружающей среды, в которой проводят микробиологические исследования, не влияли на достоверность получаемых результатов исследований.
Помещения располагают таким образом, чтобы избежать риска перекрестного заражения. С этой целью необходимо соблюдать следующие положения:
a) организацию помещений лаборатории согласно принципу "нет пути назад", то есть без пересечения потоков;
b) выполнять процедуры последовательно, придерживаясь правил необходимой безопасности, чтобы гарантировать чистоту и целостность пробы (например, путем использования герметичных и опломбированных контейнеров);
c) разделять деятельность при выполнении различных этапов работы во времени и пространстве.
Необходимо избегать экстремальных ситуаций, таких как повышенная температура, запыленность, повышенная влажность, пар, шум, вибрация и т.д.
Помещения и площадь для лаборатории должны быть достаточными для поддержания чистоты и порядка в них. Помещения и площадь лаборатории должны быть соизмеримы с объемом проводимых исследований и общей внутренней организации лаборатории. Они должны соответствовать требованиям национальных инструкций или регламентов, если таковые существуют.
3.5.2 Оборудование помещений
Чтобы уменьшить риск загрязнения пылью и, следовательно, микроорганизмами (для 3-й группы опасности необходимо соблюдать национальные нормативные документы), помещения для проведения исследований должны быть построены и оборудованы следующим образом:
a) стены, потолки и поверхность пола должны быть гладкими, стойкими к моющим и дезинфицирующим средствам, используемым в лаборатории, легко мыться;
b) полы не должны быть скользкими;
c) верхние трубы, по которым проходит жидкость, не должны пересекать помещение, если они герметично не изолированы. Все другие навесные конструкции должны быть закрыты, но легко доступны при необходимости их периодической очистки;
d) при проведении исследований окна и двери должны быть закрытыми. Конструкция окон и дверей должна исключать возможность скопления пыли и облегчать их чистку. Окружающая температура (от 18°С до 27°С) и качество воздуха (содержание микроорганизмов, скорость распространения пыли и т.д.) должны удовлетворять условиям проведения исследований. Для этой цели рекомендуется использовать вентиляционную систему, оборудованную фильтрами для очистки поступающего в помещение воздуха и воздуха, удаляемого из помещения;
e) необходимо установить адекватную систему вытяжной вентиляции, чтобы предотвратить распыление при работе, возникающее при приготовлении дегидратированных питательных сред, пылеобразных и порошковых проб;
f) если исследования необходимо проводить в атмосфере с низким уровнем контаминации, комната должна быть специально оборудована чистым ламинарным шкафом с потоком воздуха и/или безопасным боксом;
g) если необходимо, помещения лаборатории должны быть защищены от вредных воздействий солнечной радиации с помощью ставней или специально обработанных стеклянных панелей. Не допускается устанавливать шторы или жалюзи изнутри, поскольку их трудно чистить, и они могут быть источником пыли.
3.5.3 Прочие условия
Необходимо также предусмотреть выполнение следующих условий:
- подведение воды надлежащего качества для использования;
- наличие электрического питания;
- подведение газа (по трубам - централизованного или в баллонах);
- достаточное освещение в каждой зоне лаборатории;
- поверхности лабораторного инвентаря и мебели должны быть изготовлены из гладкого, непроницаемого материала, который легко мыть и дезинфицировать;
- лабораторная мебель должна быть разработана таким образом, чтобы облегчить ее обработку (например, передвижная мебель);
- в помещениях, где проводят исследования проб, не должны находиться мебель, документация и другие вещи, которые не применяют при проведении исследования;
- документацию, используемую в работе с пробами, питательными средами, реактивами и т.п. необходимо хранить в закрытых шкафах или ящиках столов;
- в каждой комнате, где проводят исследования, необходимо установить раковины для мытья рук и, если необходимо, в других участках, предпочтительно около двери;
- наличие автоклава для обеззараживания зараженных отработанных материалов и использованных питательных сред, если нет специальной системы для удаления зараженных отходов для сжигания на месте;
- обеспечение защитными системами для борьбы с огнем (огнетушители, ведра и т.д.), системой аварийного электропитания, аварийного обеспечения водой для душа и промывания глаз;
- обеспечение средствами для оказания первой помощи.
3.6 Чистка и дезинфекция
Необходимо соблюдение следующих аспектов:
a) полы, стены, потолки, поверхности лабораторных столов, мебель следует содержать в чистоте и ремонтировать, чтобы избежать образования трещин, которые могут быть источником загрязнения;
b) чтобы содержать помещение в состоянии, пригодном для проведения исследований, уборку и дезинфекцию следует выполнять постоянно. Загрязненные или потенциально зараженные поверхности следует дезактивировать, для чего необходимо использовать дезинфицирующие средства, обладающие способностью уничтожать бактерии и грибы.
Примечание - Комнаты и оборудование могут быть дезактивированы окуриванием парами формальдегида, если это допускается национальными нормативными документами.
c) системы вентиляции и их фильтры следует регулярно проверять, при необходимости, с заменой фильтров на новые;
d) микробиологическое состояние рабочих поверхностей лаборатории, поверхностей, с которыми соприкасается персонал, а также воздух необходимо регулярно проверять (частота проверок зависит от результатов предыдущих исследований);
e) загрязненность поверхностей следует оценивать наложением на них пластин, содержащих соединения, способные нейтрализовать дезинфицирующие вещества (например, лецитин, тиосульфат натрия). Качество воздуха может быть исследовано при экспозиции открытой чашки Петри в течение 15 мин, содержащей неселективную агаровую питательную среду [например, среду для подсчета колоний - мясопептонный агар - МПФ-РСА (plate count agar)] или селективную агаровую среду, используемую для выявления искомых микроорганизмов (например, плесеней).
Примечание - Могут также использоваться другие методы для оценки загрязнения поверхностей и воздуха. См. [47]
4 Требования к персоналу
4.1 Общие положения
Общие требования к квалификации персонала изложены в [44].
4.2 Квалификация
Как при приеме на работу сотрудников, так и для уже работающих в лаборатории необходимо установить объективные критерии оценки соответствующей квалификации по владению необходимыми методами или техническими приемами.
Квалификация может быть установлена в пределах лаборатории с помощью внутреннего контроля качества (см. 15.1.2).
Примечание - Одна из причин некачественного выполнения работы (пипетирование, недостаточная гомогенность первичной суспензии, подсчет и т.д.) в случае учета числа колоний описана в [41].
4.3 Проверка квалификации персонала лаборатории
Проверку квалификации работающего персонала в лаборатории необходимо проводить регулярно, основываясь на объективных параметрах. Она включает участие в программах по внутреннему контролю качества, проверку квалификации (см. ISO 43-1), использование стандартных образцов или проверку по тестам самооценки при подсчете микроорганизмов, как описано в [42].
4.4 Гигиена
В лаборатории следует соблюдать следующие меры личной гигиены, чтобы избежать загрязнения проб и питательных сред, а также избежать риска инфицирования персонала:
a) Лабораторная одежда должна быть застегнутой надлежащим способом, чистой, в хорошем состоянии, изготовленной из ткани, ограничивающей риск воспламенения. Эту одежду не следует носить вне рабочей зоны и, в частности, в ней нельзя выходить в туалет.
b) На волосяной покров головы и лица следует надеть защитные повязки.
c) Ногти следует содержать в чистоте и желательно короткими.
d) Необходимо мыть руки в теплой воде из нерегулируемого вручную крана до и после микробиологических исследований, а также после посещения туалета. Рекомендуется использовать жидкое или порошковое мыло, или другое дезинфицирующее средство, поступающее из дозатора, поддерживаемого в чистом состоянии. Для сушки рук следует использовать одноразовые бумажные или матерчатые салфетки или полотенца. Эти предосторожности относятся как к персоналу лаборатории, так и посетителям.
e) При работе с открытыми пробами, питательными средами и при посеве материала не допускается разговаривать, кашлять и т.д.
f) Люди, имеющие инфекционные заболевания кожи или страдающие заболеваниями кожи, должны предпринимать меры предосторожности, если микроорганизмы от них способны инфицировать пробы, что может отразиться на результатах исследований.
g) В лаборатории нельзя принимать пищу, пить, оставлять пищевые продукты для личного потребления в лабораторных холодильниках или морозильных камерах.
h) Недопустимо осуществлять пипетирование ртом.
5 Аппаратура и оборудование
5.1 Общие положения
В соответствии с установившейся лабораторной практикой всю аппаратуру и оборудование содержат в чистоте и в хорошем рабочем состоянии. Перед использованием оборудование следует проверить на пригодность для соответствующих целей. В процессе работы оборудование периодически проверяют по определенным характеристикам, когда это целесообразно.
При необходимости оборудование и контрольно-измерительные приборы калибруют в соответствии с действующими национальными стандартами. Выполняют также повторную калибровку и необходимые промежуточные поверки, а проведенные процедуры, результаты калибровок и проверок документируют.
Оборудование регулярно проверяют и проводят сервисное обслуживание, чтобы обеспечить безопасность и пригодность его к использованию. Оборудование проверяют согласно рабочим условиям и точности, требуемой для получения результатов.
Частота калибровки и проверок каждой единицы оборудования в большинстве случаев не установлена в настоящем стандарте, поскольку должна определяться каждой лабораторией в зависимости от типа оборудования и уровня активности лаборатории и в соответствии с инструкциями изготовителя оборудования. В ограниченном числе случаев частота калибровок и проверок устанавливается, поскольку это необходимо для эффективной деятельности лаборатории.
Аппаратуру и оборудование следует сконструировать и установить таким образом, чтобы облегчить работу персоналу и обеспечить выполнение технического обслуживания, очистки, дезактивации и калибровки.
Все неопределенности измерений, приведенные в данном разделе, связаны с рассматриваемой здесь аппаратурой и оборудованием, но не с методом исследования в целом.
В этом разделе установлены требования, предъявляемые к точности измерительного оборудования. Они основаны на практической допустимости отклонений, позволяющей гарантировать надлежащий контроль оборудования в процессе обычной рабочей деятельности. Установленная точность связана с метрологической неопределенностью прибора (см. ISO/IEC Руководство 99).
У приборов, контролирующих температуру, следует проверить стабильность и равномерность распределения температуры перед началом использования и после любого ремонта или их модификации, которые могут влиять на достоверность температурного контроля.
5.2 Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований
5.2.1 Описание
Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований - это рабочее помещение, оснащенное установкой для горизонтального и вертикального ламинарных потоков воздуха, предназначенной для удаления пыли и других частиц из воздуха, в том числе микроорганизмов.
Максимально допустимое количество частиц в кубическом метре с размером не менее или равным 0,5 мкм представляет класс устранения пыли из защитного бокса с очисткой воздуха. Для боксов, используемых в микробиологии пищевых продуктов, количество частиц должно быть не более 4000 в кубическом метре.
Боксы для использования в лабораториях микробиологии пищевых продуктов подразделяют на четыре типа.
a) Боксы биологической безопасности класса I - это открытые с лицевой стороны безопасные вытяжные шкафы, защищающие оператора и окружающую среду, но не защищающие продукт от загрязнения извне. Потенциально инфицированные аэрозоли будут циркулировать внутри бокса и затем поглощаться фильтром. Отфильтрованный воздух затем поступает в атмосферу; если этого не происходит, воздух должен пройти через два сухих воздушных фильтра (НЕРА), установленных последовательно. Данный тип боксов не допускается для работы с микроорганизмами 3-й группы патогенности из-за трудностей в поддержании и обеспечении соответствующей безопасности оператора.
b) Боксы биологической безопасности класса II защищают продукт, оператора и окружающую среду. В них профильтрованный воздух циркулирует, а часть выделяется в атмосферу и заменяется воздухом через рабочее отверстие. Таким образом, обеспечивается защита оператора. Эти боксы подходят для работы с микроорганизмами 2-й и 3-й групп патогенности.
c) Ламинарные боксы с горизонтальным оттоком воздуха защищают рабочее место от загрязнения, но выносят любые аэрозоли на лицо оператора. Поэтому они не могут использоваться для работы с инокулируемыми культурами или для приготовления культуры ткани.
d) Ламинарные боксы с вертикальным потоком воздуха защищают продукт при помощи вертикального ламинарного потока воздуха, профильтрованного через фильтр НЕРА. Они также защищают оператора при помощи использования внутреннего рециркулированного воздуха. Они особенно подходят для обеспечения стерильной окружающей среды при работе со стерильными продуктами и для защиты оператора при работе с порошками.
Если это определено национальными регламентами, боксы биологической безопасности используют для любых видов работы с патогенными микроорганизмами и контаминированными порошками.
В боксах биологической безопасности не допускается использовать газовые горелки или прокаливатели проволоки. В случае необходимости газовую горелку применяют при условии создания маленького пламени, таким образом, чтобы не нарушить поток воздуха. Приемлемой альтернативой является использование одноразового оборудования (бактериологических петель, пипеток и т.д.)
5.2.2 Использование
В лабораториях используют боксы биологической безопасности, которые пригодны для конкретного исследования и с учетом условий окружающей среды.
Боксы не должны загромождаться оборудованием.
Все необходимое размещают до начала работы внутри бокса, чтобы свести к минимуму количество движений рук внутри и вне рабочей зоны. Расположение оборудования и материалов должно быть таким, чтобы свести к минимуму нарушение потока воздуха в рабочей зоне.
Операторы должны быть обучены правильному использованию боксов, чтобы обеспечивать как их безопасность, так и сохранность пробы или культуры микроорганизмов.
5.2.3 Очистка и дезинфекция
Рабочую зону очищают и обеззараживают после использования с помощью соответствующего, не обладающего коррозийными свойствами, дезинфицирующего средства, руководствуясь инструкцией изготовителя. Регулярно обследуют защитные предфильтры проволочных сеток и вытирают их чистой, пропитанной дезинфицирующим средством, тканью.
Для ламинарных шкафов с очисткой воздуха наружную часть фильтра необходимо регулярно очищать под вакуумом таким образом, чтобы не повредить фильтрующий элемент.
Боксы биологической безопасности следует дезинфицировать перед заменой фильтра или плановым обслуживанием.
После очистки бокса для обеззараживания можно использовать ультрафиолетовые (УФ) лампы. УФ лампы регулярно очищают или заменяют в соответствии с инструкциями изготовителя. При их использовании они подлежат регулярной очистке с целью удаления пыли и грязи, которые могут повлиять на бактерицидную эффективность ультрафиолетового света. Необходимо проверять интенсивность ультрафиолетового излучения в процессе повторной сертификации бокса, чтобы гарантировать соответствие светового излучения лампы инструкциям изготовителя.
См. [17].
5.2.4 Техническое обслуживание и контроль
Квалифицированный оператор должен проверять эффективность бокса биологической безопасности при получении и затем с регулярными интервалами, как рекомендует изготовитель, а также после любого ремонта или модификации. Эффективность проверяют после перемещения бокса.
Следует периодически выполнять проверку чистоты рабочей поверхности и стен бокса от любого микробиологического загрязнения.
Необходимо периодически осуществлять проверку числа микроорганизмов, циркулирующих в воздухе во время работы фильтров, с помощью обычного оборудования. Например, экспонируя несколько открытых чашек Петри, содержащих неселективную агаровую культуральную среду (например, агара для подсчета микроорганизмов), в каждом боксе в течение 30 мин. Допускается использовать другие методы.
5.3 Весы и гравиметрические разбавители
5.3.1 Использование и неопределенность измерения
Весы используют преимущественно для взвешивания испытуемой пробы, компонентов питательных сред и реактивов. Кроме того, весы допускается использовать для измерений объемов разведенной жидкости с помощью определения массы.
Гравиметрические разбавители - это электронные инструменты, состоящие из весов и программируемого дозатора жидкости, который применяют для приготовления исходных суспензий проб. В их функции входит добавление разбавителя к первичной пробе в определенном отношении. Пробу взвешивают в установленных пределах допустимости для данного применения, далее добавляют разбавитель для получения определенного объема, чтобы получить достаточное разведение для требуемого отношения (например, 9:1 для десятикратных разведений). См. ISO 6887-1.
Лаборатория микробиологии пищевых продуктов должна быть оборудована весами требуемого диапазона с требуемой неопределенностью для взвешивания различных продуктов.
Если нет других указаний, разрешающая способность весов должна быть не более 1%, чтобы обеспечить максимальную допустимую погрешность 5% по массе.
Примеры
Для взвешивания 10 г весы должны обеспечить считывание до 0,1 г.
Для взвешивания 1 г весы должны обеспечить считывание до 0,01 г.
Оборудование устанавливают на устойчивую горизонтальную поверхность с защитой от вибраций и сквозняков.
5.3.2 Очистка и обеззараживание
Оборудование очищают и дезинфицируют после каждого использования или после проливания (рассыпания) при взвешивании с помощью подходящего некоррозирующего дезинфицирующего средства.
5.3.3 Проверка показателей и калибровка
5.3.3.1 Калибровка
Обученный оператор должен проверять калибровку по всему диапазону, частота проверки зависит от интенсивности использования.
5.3.3.2 Проверка
Обученный оператор должен регулярно проверять рабочие характеристики системы взвешивания во время использования и после очистки с помощью контрольных разновесов.
Примечание - Контрольные разновесы могут быть проверены также непосредственно после калибровки весов.
5.4 Гомогенизаторы, смесители и миксеры
5.4.1 Описание
Данное оборудование используют для получения исходной суспензии из испытуемой пробы.
Допускается использовать следующую аппаратуру:
- перистальтический смеситель со стерильными пакетами, возможно с устройством для регулирования скорости и таймером;
Примечание - Stomacher® - пример подходящей продукции, имеющейся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не налагает обязательств со стороны ISO применять данную продукцию.
- ротационный гомогенизатор (блендер), способный создавать скорость от 8000 до 45000 об/мин включительно, со стерилизуемыми стеклянными или металлическими флаконами, закрываемыми крышками;
- вибрационный миксер (вибратор) со стерильными пакетами; или
Примечание - Pulsifier® - пример подходящей продукции, имеющейся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не налагает обязательств со стороны ISO применять данную продукцию.
- другая система гомогенизации эквивалентной эффективности.
В некоторых случаях перемешивание может быть выполнено вручную с использованием стерильных стеклянных бус, имеющих соответствующий диаметр (приблизительно 6 мм; см. ISO 6887-2 и ISO 6887-5).
5.4.2 Применение
Обычно рабочее время гомогенизатора перистальтического типа составляет от 1 до 3 мин (см. ISO 6887-2 и ISO 6887-5 для конкретных пищевых продуктов).
Для некоторых видов пищевых продуктов эту аппаратуру использовать нельзя, а именно для продуктов:
- способных проколоть пакет (наличие острых, твердых или сухих частиц);
- которые трудно гомогенизировать из-за их структуры (например, колбаса типа салями).
Ротационный гомогенизатор должен использоваться в таком режиме, чтобы общее количество оборотов составляло от 15000 до 20000 об/мин включительно. Даже при использовании минимального числа оборотов продолжительность работы не должна превышать 2,5 мин.
Вибрационный миксер можно использовать для большинства пищевых продуктов, включая твердые или сухие изделия. Обычное время работы составляет от 30 до 60 с. Если микроорганизмы расположены глубоко внутри клейкой структуры продукта, пробу перед обработкой следует разрезать на маленькие кусочки.
Стеклянные бусы применяют для подготовки исходных суспензий контролируемых вязких или густых продуктов, в частности, молочных продуктов (см. соответствующие стандарты на конкретные методы испытаний).
5.4.3 Очистка и обеззараживание
Перистальтические гомогенизаторы и вибрационные миксеры моют и обеззараживают после каждого применения, а также после любого разрыва пакета или протекания.
Ротационные гомогенизаторы моют и стерилизуют после каждого применения.
5.4.4 Техническое обслуживание
Контроль и техническое обслуживание оборудования - в соответствии с инструкциями изготовителя.
5.5 рН-метр
5.5.1 Описание
рН-метр применяют для измерения при определенной температуре разности потенциалов между измеряющим электродом и электродом сравнения, погруженными в продукт. рН-метр должен обеспечивать считывание показаний до ±0,01 ед. рН, а погрешность измерений должна составлять 0,1 ед. рН. Он должен быть оснащен ручным или автоматическим определителем температуры.
Примечание - Измерительный электрод и электрод сравнения обычно соединяют в одну систему электродов.
5.5.2 Использование рН-метра
рН-метр используют для измерения значения рН питательных сред и реактивов с целью проверки, требуется ли регулирование значения в процессе приготовления, а также для проверки их качества после стерилизации.
Прибор может также использоваться для измерения значений рН проб и суспензий проб. Использование рН-метра предусматривают в стандарте на конкретный анализируемый продукт, в котором определены условия для измерения значения рН и условия получения нужного значения рН.
рН-метр регулируют в соответствии с инструкцией изготовителя для измерения значения рН при стандартизированной температуре, например, 25°С. Значение рН считывают после того, как стабилизируется показание. Значение рН записывают с точностью до двух знаков после запятой.
Примечание - Показание можно считать стабильным, когда значение рН, измеренное в течение 5 с, изменяется не более чем на 0,02 ед. рН. При использовании электродов в хорошем состоянии равновесие обычно достигается в пределах 30 с.
5.5.3 Калибровка и проверка
5.5.3.1 Калибровка
рН-метр проверяют в соответствии с инструкцией изготовителя, используя не менее двух, а лучше трех стандартных буферных растворов, по меньшей мере один раз в день перед началом работы. При этой проверке определяют максимально допустимые погрешности, которые должны быть более строгими, чем погрешность, допустимая при обычном использовании.
Буферные растворы должны быть прослеживаемыми и иметь значения рН, определяемые с точностью до двух знаков после запятой при температуре измерения (как правило, рН 7,00, рН 4,00 и/или рН 9,0 при 25°С, в соответствии с инструкцией изготовителя). Измеряемое значение рН должно находиться между значениями рН стандартных растворов.
5.5.3.2 Проверка
После калибровки рН-метра с двумя определенными стандартными буферными растворами рН необходимо проверить возможность считывания (в режиме считывания), используя третий буферный раствор, чтобы убедиться в исправности рН-метра.
Если при проверке устанавливается, что результат находится за пределами максимально допустимой ошибки, выполняют регулировку рН-метра в соответствии с инструкцией изготовителя. После регулировки следует провести дальнейшую калибровку и проверку.
5.5.4 Обслуживание
Электроды проверяют и поддерживают в соответствии с инструкцией изготовителя. Необходимо, в частности, регулярно проверять:
- состояние электродов с учетом их старения и загрязнения,
- характеристики, относящиеся к времени ответа при измерении и к стабильности измеряемых показателей.
Электроды необходимо ополаскивать дистиллированной или деионизированной водой после каждого использования. Учитывая загрязнение и старение электродов, их регулярно тщательно чистят в соответствии с инструкцией изготовителя.
Электроды хранят в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.6 Автоклав
5.6.1 Описание
Автоклав позволяет поддерживать в камере температуру насыщенного пара.
Автоклав должен быть оснащен:
- как минимум, одним предохранительным клапаном,
- сливным краном,
- регулятором температуры для поддержания необходимой температуры в камере в пределах ±3°С (с учетом неопределенности измерения, связанной с измерительной термопарой),
- температурным датчиком или регистрирующим термоэлементом.
Автоклав должен также быть оснащен таймером и устройством для записи температуры.
5.6.2 Использование
При стерилизации водяным паром воздух перед автоклавированием удаляется с помощью увеличения давления. Если автоклав не снабжен автоматическим устройством удаления воздуха, его необходимо вытеснить, пока не начнет выходить непрерывная струя пара.
С целью достижения стерилизации питательных сред насыщенный пар в камере должен иметь температуру не менее (121±3)°С или температуру, установленную инструкцией изготовителя, инструкцией на продукцию либо установленную в методе испытания.
Для уничтожения (разрушения) микроорганизмов и деконтаминации используемых питательных сред насыщенный пар в камере должен иметь температуру не менее (121±3)°С.
В течение одного и того же цикла стерилизации нельзя использовать автоклав для стерилизации чистого оборудования (и/или питательных сред) и одновременно обеззараживать использованное оборудование (и/или использованные питательные среды).
Для осуществления двух данных процессов предпочтительно использовать отдельные автоклавы. После автоклавирования все материалы и оборудование необходимо охладить в автоклаве перед их извлечением.
В целях безопасности нельзя извлекать содержимое из автоклава, пока температура не снизится приблизительно до 80°С.
5.6.3 Обслуживание
Регулярно моют камеру, сушат фильтр и уплотнители дверцы. Проверяют уплотнители дверцы на целостность. Через определенные интервалы и по мере необходимости выполняют операции по высушиванию и удалению накипи в соответствии с рекомендациями изготовителя.
5.6.4 Проверка и калибровка
Автоклав необходимо содержать в хорошем эксплуатационном режиме и регулярно проверять компетентным квалифицированным персоналом в соответствии с инструкциями изготовителя.
Контрольно-измерительные приборы необходимо поддерживать в порядке и готовности к работе, калибровать их и регулярно проверять.
Начальная проверка должна включать в себя испытание рабочих показателей для каждого операционного цикла и каждой используемой в практической работе конфигурации загрузки. Этот процесс необходимо повторять после существенного ремонта или модификации прибора. При проверке устанавливают достаточное количество датчиков температуры, чтобы установить надлежащее поступление тепла во все рабочие зоны прибора. При проверке и перепроверке необходимо установить продолжительность как времени нагревания, так и периода охлаждения, а также температуру стерилизации.
Там, где отсутствует прослеживаемая эффективность автоклавирования, необходимо как минимум при каждой загрузке в середину автоклава поместить индикатор автоклавирования для проверки процесса нагревания.
5.7 Аппарат для приготовления питательных сред
5.7.1 Описание
Кроме того, прибор должен иметь замок-предохранитель, чтобы предотвратить открывание, пока температура не достигнет значения чуть менее 80°С.
5.7.2 Использование
Необходимо всегда следовать инструкциям изготовителя.
Весь процесс приготовления питательных сред происходит внутри аппарата. После добавления всех компонентов они растворяются посредством размешивания и нагревания. Затем происходит стерилизация.
5.7.3 Обслуживание
Аппарат моют и полностью ополаскивают чистой водой после каждой партии сред.
5.7.4 Проверка
Аппарат для приготовления питательных сред содержат в хорошем рабочем состоянии, регулярно проверяют компетентным квалифицированным персоналом в соответствии с инструкциями изготовителя.
Контрольно-измерительные приборы необходимо поддерживать в порядке и готовности к работе, калибровать их и регулярно проверять.
Начальная проверка должна включать в себя изучение рабочих показателей для каждого операционного цикла и каждого объема загрузки, используемого в практике. Этот процесс необходимо повторить после существенного ремонта или модификации. Для демонстрации однородности нагревания следует установить два датчика температуры: один - примыкающий к контрольной пробе, а другой - отдаленный от нее.
Необходимо проверять температуру и продолжительность каждого цикла.
5.8 Термостат (инкубатор)
5.8.1 Описание
Термостат состоит из изолированной камеры, которая позволяет удерживать постоянство температуры, равномерно распределенной в камере в пределах максимально допустимой температурной ошибки, указанной в методе испытания.
5.8.2 Использование
Термостаты должны быть оборудованы системой регулирования, которая позволяет сохранять температуру или другие параметры равномерными и постоянными по полному рабочему объему камеры. Чтобы это условие выполнялось, определяют рабочий объем термостата.
Если окружающая температура близка или выше температуры в термостате, необходимо использовать систему охлаждения камеры.
Стенки термостата должны быть защищены от солнечного света.
Термостаты по возможности не следует заполнять полностью ни в одном операционном цикле, поскольку питательные среды будут отнимать значительно большее время для достижения постоянства необходимой температуры независимо от типа используемого инкубатора (с принудительной воздушной вентиляцией или другого типа). Нельзя оставлять дверцы термостата открытыми в течение длительного периода времени.
При загрузке термостатов необходимо проследить за циркуляцией воздуха (см. 10.2.5).
5.8.3 Очистка и санитарная обработка
Регулярно очищают и проводят санитарную обработку внешних и внутренних стенок термостата и, если необходимо, удаляют пыль из системы вентиляции.
5.8.4 Проверка
Проверяют стабильность температуры и однородность распределения температуры в рабочем объеме камеры термостата с помощью одновременного использования нескольких термометров или термоэлементов известной точности в необходимом диапазоне температуры.
Полученную информацию используют для определения приемлемого операционного диапазона термостата и оптимального местоположения термометра или регистрирующей термопары для контроля рабочих температур.
Например, чтобы достигнуть необходимой температуры (37±1)°С при данных контроля, который показывает диапазон 36,8°С-37,3°С в разных частях рабочего объема термостата, рабочий диапазон необходимо уменьшить до 36,2°С-37,7°С, чтобы обеспечить во всех частях термостата требуемую температуру 37°С.
Этот процесс требуется повторять после каждого существенного ремонта или модификации термостата.
Температуру в процессе работы необходимо проверять с помощью одного или нескольких термометров с выявлением максимальной и минимальной границ диапазона или, например, с помощью записывающих термопар.
Температуру термостата проверяют, по меньшей мере, каждый рабочий день. С этой целью каждый термостат должен включать не менее одного термометра, шарик которого погружен в глицерин (или в другую подходящую теплопоглощающую жидкость). Можно использовать другие системы проверки работы с равноценными характеристиками.
5.9 Холодильник, холодная комната (помещение для хранения на холоде)
5.9.1 Описание
Холодильники представляют собой камеры, которые позволяют хранить при пониженной температуре. Для хранения проб пищевых продуктов температура должна быть (3±2)°С (максимальные допустимые отклонения), за исключением специальных случаев использования. Для других вариантов использования температура, если не установлено иначе, должна быть (5±3)°С.
5.9.2 Использование
Чтобы избежать перекрестного загрязнения, используют разные камеры, или, по крайней мере, различные контейнеры, достигая тем самым физического разделения, для хранения следующих продуктов:
- незасеянных питательных сред и реактивов;
- проб для исследований;
- культур микроорганизмов и инкубированных питательных сред.
Загрузку холодильников, холодильных камер и холодных комнат проводят таким образом, чтобы поддерживалась необходимая циркуляция воздуха и возможность перекрестного заражения была сведена к минимуму.
5.9.3 Проверка
Температуру каждой камеры проверяют ежедневно, используя термометр или постоянно установленный датчик. Точность, требуемая для контролирующего температуру устройства, зависит от цели, с которой эта камера используется.
5.9.4 Обслуживание и очистка
Выполняют следующие профилактические операции с постоянными интервалами, чтобы обеспечить надлежащую работу оборудования:
- удаление пыли с лопастей мотора или с внешних пластин термообменника;
- размораживание;
- мытье и санитарную обработку внутренней части камеры.
5.10 Морозильная камера и установка для глубокого замораживания
5.10.1 Описание
Морозильная камера - это аппарат, который гарантирует хранение в условиях замораживания. Температура, кроме особо оговоренных случаев, должна быть не более минус 15°С, предпочтительно не более минус 18°С для проб пищевых продуктов.
Установка для глубокого замораживания - это камера, которая гарантирует хранение глубокозамороженного продукта. Температура, если не указано иначе, должна быть не более минус 70°С.
5.10.2 Использование
5.10.2.1 Морозильная камера
Необходимо иметь разные камеры или, по меньшей мере, разные контейнеры, чтобы обеспечить физическое разделение при хранении:
- неинокулированных реактивов;
- проб для анализа; и
- культур микроорганизмов.
Морозильные камеры заполняют таким способом, чтобы поддерживалась достаточно низкая температура, особенно в случаях, когда в них загружают незамороженные продукты.
5.10.2.2 Установка для глубокого замораживания
Морозильные камеры применяют для хранения микроорганизмов, контрольных и/или рабочих культур и реагентов.
Их загружают таким способом, чтобы поддерживалась низкая температура и не допускалось взаимное загрязнение между микроорганизмами и реагентами.
5.10.3 Проверка
Регулярно проверяют температуру каждой камеры, используя подходящие устройства, контролирующие температуру.
5.10.4 Техническое обслуживание
Регулярно выполняют следующие операции для поддержания морозильных камер в рабочем состоянии:
- удаление пыли с лопастей мотора и с внешних пластин термообменника (если возможно);
- размораживание;
- мытье и санитарную обработку внутренней части камеры.
5.11 Баня термостатическая контролируемая
5.11.1 Описание
Баня с терморегулятором, заполненная жидкостью (вода, этиленгликоль и т.д.), с подогнанной крышкой или без нее или другим устройством, ограничивающим испарение, требуется для поддержания необходимой температуры. Контроль температуры часто более точен, чем в воздушном термостате, и обеспечивает максимально допустимое отклонение ±0,5°С или менее. Рабочие температуры и требуемые максимально допустимые погрешности устанавливают для каждого отдельного метода или контрольного метода. Для поддержания температуры, близкой к окружающей температуре или ниже данной температуры, необходима система охлаждения.
5.11.2 Использование
В основном баню используют для решения следующих задач:
- инкубации при постоянной температуре засеянных питательных сред;
- поддержания стерильных расплавленных агаровых сред при приготовлении сред;
- термообработки стерильных расплавленных агаровых сред для использования в определенных методах;
- приготовления первичных суспензий проб или растворов при контролируемой температуре;
- обработки нагреванием первичных суспензий проб при контролируемой температуре (например, пастеризация).
Там, где требуется точный контроль температуры, баня должна быть оборудована циркуляционным водяным насосом и автоматической системой регулирования температуры. Любое перемешивание жидкости не должно приводить к разбрызгиванию капель.
Для использования при точной или высокой температуре предпочтительны бани с крышками. Следует использовать покатые крышки, создающие условия для стока конденсата.
Для инкубации засеянных питательных сред жидкость в бане поддерживают на уровне, чтобы верхний край питательной среды был на 2 см ниже уровня жидкости в бане в течение времени инкубации.
Другие контейнеры необходимо размещать в бане таким образом, чтобы уровень их содержимого был ниже уровня жидкости.
Глубина погружения должна препятствовать попаданию воды через крышку.
Допускается применять устройства для поддержания контейнеров в стабильном положении, например, штативы.
После выемки из бани все контейнеры должны быть высушены перед дальнейшим использованием.
5.11.3 Проверка
Проверке подлежат стабильность и однородность температуры во всех частях бани перед началом использования и после любого ремонта или модификаций, оказывающих влияние на контроль температуры.
Контроль температуры в бане осуществляют с помощью термометра, термоэлементов или устройства регистрации температуры с подходящей минимальной неопределенностью измерения (см. 5.28.2) и независимо от автоматической системы регуляции температуры.
Примечание - Допускается также использовать цифровой дисплей при условии, что его точность и разрешение проверены на соответствие требованиям.
Температуру бани контролируют в течение каждого использования и, как минимум, ежедневно при продолжительной инкубации.
5.11.4 Обслуживание
Баню перед началом работы необходимо заполнить жидкостью, как рекомендуется изготовителем. Для инкубации культур предпочтительно следует использовать дистиллированную или деионизированную воду.
Регулярно проверяют уровень жидкости, чтобы обеспечить правильное функционирование бани и надлежащее погружение помещенных в нее проб. Уровень жидкости должен всегда закрывать нагревательные элементы.
Следует регулярно выливать жидкость из бани, очищать, санировать и снова заполнять баню жидкостью, в зависимости от частоты использования, а также после того, когда происходит разбрызгивание или протекание бани.
5.12 Пароварки, включая бани с кипящей водой
5.12.1 Описание
Пароварки и бани с кипящей водой состоят из нагревательного элемента, окруженного водой в сосуде с плотно подогнанной крышкой. В пароварке при атмосферном давлении образуется пар; в бане с кипящей водой нагревается вода до температуры кипения или близкой к таковой с образованием или без образования пара.
5.12.2 Использование
Данное оборудование используют, главным образом, для следующего:
- расплавления агаризованных питательных сред;
- приготовления неустойчивых к повышенной температуре сред;
- уменьшения зараженности мелких компонентов оборудования между использованием.
В сосуде должен быть достаточный уровень воды, чтобы обеспечить полное постоянное погружение нагревательных элементов.
Можно использовать автоклав с автономной парообразущей способностью.
5.12.3 Обслуживание
Пароварки и бани с кипящей водой необходимо содержать в чистоте.
При необходимости следует чистить приборы от накипи с частотой, зависящей от жесткости местной воды.
5.13 Стерилизационный сушильный шкаф
5.13.1 Описание
Стерилизационный сушильный шкаф - это камера, которая способна поддерживать температуру от 160°С до 180°С для уничтожения (разрушения) микроорганизмов с помощью сухого горячего воздуха.
5.13.2 Использование
В стерилизационном сушильном шкафу следует стерилизовать только прочное и твердое оборудование, такое как стеклянная посуда и металлические изделия.
Перед стерилизацией стеклянной посуды и металлических инструментов их очищают и моют.
При стерилизации мерной стеклянной посуды ее регулярно проверяют на точность маркированных объемов.
Температура в стерилизационном сушильном шкафу должна быть одинаковой во всех частях камеры. Сушильный шкаф должен быть оснащен термостатом и термометром или устройством регистрации температуры, соответствующей точности.
Сушильный шкаф должен быть оборудован индикатором продолжительности работы, программируемым устройством или таймером.
После достижения температуры стерилизации процедура стерилизации должна длиться не менее одного часа при температуре (170±10)°С или поддерживать равноценный режим по параметрам время/температура.
После стерилизации, чтобы предотвратить растрескивание стеклянной посуды, перед ее изъятием из сушильного шкафа необходимо дать время для охлаждения, не вынимая из шкафа.
5.13.3 Проверка
Проверке подлежат стабильность и равномерность распределения температуры во всех зонах шкафа перед началом применения и после любого ремонта или модификации, которые могут повлиять на контроль температуры.
Стерилизационный сушильный шкаф должен быть оснащен калиброванным термометром, термопарой или устройством регистрации температуры, соответствующей точности, которые являются независимыми от автоматической системы регуляции температуры. Контролирующее устройство должно иметь разрешение 1°С или менее при температуре, используемой в сушильном шкафу.
Температуру сушильного шкафа следует проверять и регистрировать в течение каждого цикла использования.
5.13.4 Обслуживание
По мере необходимости моют внутренние поверхности сушильного шкафа.
5.14 Микроволновая печь
5.14.1 Описание
Микроволновая печь - это устройство, в котором нагревание продукта осуществляется с помощью микроволнового излучения при атмосферном давлении.
5.14.2 Использование
Имеющиеся в настоящее время микроволновые печи рекомендуется использовать только для нагревания жидкостей или плавления агаровых питательных сред.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Не допускается нагревание сред, содержащих чувствительные к высокой температуре компоненты, если не проверено, что этот способ нагревания не оказывает влияния на свойства среды. До настоящего времени нет оценки эффективности микроволн для стерилизации питательных сред, и поэтому микроволновые печи не допускается использовать для этой цели.
Микроволновая печь должна обеспечивать нагревание жидкостей и питательных сред в контролируемых условиях с помощью цикла микроволнового излучения. Микроволновое поле должно быть гомогенным, чтобы избежать зон перегревания. Микроволновые печи, оснащенные поворотным столом или смесителем для микроволн, характеризуются лучшим распределением высокой температуры.
Не допускается использовать металлическое оборудование, включая металлические крышки. Крышки флаконов или пробки перед нагреванием в микроволновой печи необходимо приоткрыть.
Нагревание в течение более длинных периодов времени при меньшей номинальной мощности может обеспечить лучшее распределение высокой температуры.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Нагревание изделий следует проводить с осторожностью. Содержимое сосудов может перегреваться и выкипать, возможен взрыв флаконов.
После процесса нагревания следует подождать не менее 5 мин перед удалением содержимого из микроволновой печи.
5.14.3 Проверка
Необходимо определить подходящие время нагревания и мощность при первоначальном использовании микроволновой печи для различных объемов жидкостей и питательных сред, с которыми обычно работают в лаборатории. Таким образом обеспечивают оптимальный режим, при котором не происходит перегрев чувствительных продуктов.
5.14.4 Обслуживание
Печь немедленно очищают и моют при малейшем попадании брызг, а также через регулярные интервалы времени, в зависимости от интенсивности использования.
Регулярно осматривают целостность уплотнителя двери печи, а печь регулярно проверяют на потерю излучения через регулярные интервалы времени, используя датчик или аналогичное устройство, в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.15 Машина для мытья стеклянной посуды
5.15.1 Описание
Лабораторные машины для мытья стеклянной посуды - это машины с электронным управлением, которые можно программировать на различные режимы мойки и полоскания (например, дистиллированной или деионизированной водой, или кислотой).
Лабораторные машины для мытья стеклянных пипеток могут иметь специальные устройства, разработанные специально для промывания узких отверстий пипеток.
5.15.2 Использование
Существует много типов машин для мытья стеклянной посуды, и обычно их устанавливают и эксплуатируют в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.15.3 Проверка
Эффективность мытья оценивают посредством визуального осмотра, а в критических случаях проводят испытания, чтобы убедиться, что вымытая стеклянная посуда не содержит веществ, ингибирующих рост микроорганизмов.
Наличие щелочных и кислых остатков проверяют посредством использования универсального индикаторного раствора. Необходимо, чтобы рН оставался в пределах диапазона 6,5-7,3.
5.15.4 Обслуживание
Регулярное обслуживание осуществляют в соответствии с рекомендациями изготовителя и установленным графиком.
При интенсивном использовании машины для мытья стеклянной посуды или в регионах с повышенной жесткостью воды может потребоваться более частое обслуживание.
5.16 Оптический микроскоп
5.16.1 Описание
5.16.2 Использование
Оптику микроскопа устанавливают в соответствии с инструкцией изготовителя. Оптическая ось света от лампы высокой интенсивности должна проходить через центр конденсора микроскопа, колено окуляра и линзу объектива в окуляр так, чтобы не возникали сферические и хроматические аберрации.
5.16.3 Обслуживание
Необходимо следовать инструкции изготовителя в отношении хранения, очистки и обслуживания. Необходимо предотвращать появление конденсата, возникающего при высокой влажности, так как это приводит к ухудшению качества линз.
Ежедневно или после каждого исследования удаляют иммерсионное масло с линз и прилегающих частей, используя ткань для протирки линзы. Можно использовать растворитель, рекомендованный изготовителем. Регулярно удаляют жир с поверхности окуляра, обусловленный прикосновением ресниц.
Оптические системы могут легко повреждаться, и поэтому желательно, чтобы они обслуживались изготовителем.
5.17 Газовая горелка и прокаливатель проволоки
5.17.1 Описание
Газовые горелки (Бунзена) производят узкое открытое пламя и работают или от магистрального газа, или газа из баллона. Степень нагревания горелки регулируют с помощью изменения количества воздуха, смешиваемого с газом.
Газовые или электрические горелки используют в основном для стерилизации бактериологических петель и непосредственно проволоки путем нагрева их до температуры красного каления, а также стерилизации пламенем других мелких прочных элементов оборудования.
5.17.2 Использование
Прокаливатели используют для стерилизации металлических петель и прямой проволоки и являются предпочтительными при работе с патогенными бактериями, поскольку данные условия предотвращают разбрызгивание и риск перекрестного заражения сведен к минимуму.
Газовые горелки могут производить много тепла и создавать турбулентность воздуха в лаборатории.
Работу в стерильных условиях можно осуществлять без газовой горелки при использовании одноразовых материалов.
В боксах биологической безопасности следует отказаться от использования газовых горелок, поскольку пламя газовых горелок будет смешиваться с ламинарным потоком воздуха и нарушать его течение. В этом случае рекомендуется использование стерильного одноразового инструментария.
5.17.3 Обслуживание
Регулярно чистят и обеззараживают горелки и крышки прокаливателей, особенно в случае пролива или попадания брызг какой-либо микробной культуры на приборы.
5.18 Дозатор (устройство для разливки) питательных сред и реактивов
5.18.1 Описание
Дозатор - это инструмент или устройство, используемое для дозированной разливки питательных сред и реактивов в пробирки, флаконы или чашки Петри. Такие приборы включают средства от простых мерных цилиндров, пипеток, ручных шприцев, автоматических шприцев и перистальтических насосов до приборов, программируемых электронными устройствами с различными автоматическими настройками дозирования.
5.18.2 Использование
Чистое оборудование, используемое для дозированной разливки питательных сред и реактивов, должно быть свободно от ингибирующих веществ, подавляющих рост микроорганизмов. Необходимо использовать отдельные пробирки для селективных сред, чтобы минимизировать выщелачивание/перенос таких веществ.
Если требуется разливка стерильных питательных сред в условиях стерильности, все части дозатора, контактирующие со средами, должны быть стерильными.
5.18.3 Проверка
Максимально допустимая погрешность измерения дозатора при дозировании объема питательной среды, который необходимо разлить, не должна превышать ±5%.
Максимальная допустимая погрешность измерения объема разлитой жидкости, используемой для приготовления десятичных разведений, ±2%.
Дозированные объемы жидкостей проверяют до первого применения, а затем регулярно в соответствии с зарегистрированным графиком и всегда после любых наладочных операций, которые могут влиять на дозирование объема.
5.18.4 Очистка и обслуживание
Наружную поверхность дозатора очищают после каждого использования. Тщательно моют и ополаскивают все части дозатора, которые входят в контакт с продуктом, и, если требуется для разливки стерильной жидкости, стерилизуют их. Не допускается использовать дезинфицирующие средства, входящие в контакт с продуктом, который будет разливаться, так как они могут обладать ингибирующими свойствами.
Все автоматические дозаторы должны содержаться в хорошем состоянии посредством постоянного обслуживания в соответствии с инструкциями изготовителя.
5.19 Вихревой механический смеситель (Вортекс)
5.19.1 Описание
Этот прибор облегчает гомогенизирующее смешивание жидких сред (например, десятикратных разведений и проб жидкости для исследований) или суспензий бактериальных клеток в жидкости.
Перемешивание достигается с помощью эксцентричного вращательного движения содержимого пробирки или контейнера (создаваемого водоворотом).
5.19.2 Использование
Прижимают основание пробирки или контейнера, содержащих жидкость, которую надо перемешать, к дну смесителя. Скорость перемешивания регулируется с помощью изменения оборотов двигателя или угла контакта с дном смесителя.
Оператор должен следить за тем, чтобы в течение перемешивания не произошло разбрызгивания. Это осуществляется посредством регулирования скорости и удерживания пробирки приблизительно на одной трети ее длины от верхнего края, чтобы лучше контролировать положение пробирки и, следовательно, избежать слишком высокого подъема жидкости в пробирке.
Необходимо предпринять соответствующие меры предосторожности, чтобы свести к минимуму выброс аэрозолей при открывании контейнеров после перемешивания.
5.19.3 Проверка
Об адекватном перемешивании свидетельствует появление воронки по всей глубине жидкости в процессе перемешивания.
5.19.4 Обслуживание
Смеситель содержат в чистоте. Если происходит разбрызгивание, прибор обеззараживают, используя применяемое в лаборатории дезинфицирующее средство.
5.20 Устройство для подсчета колоний
5.20.1 Описание
Ручные устройства подсчета колоний используют счетное устройство, приводимое в действие под давлением, и обычно выдающее звуковой сигнал каждой единицы счета и цифровую индикацию общего количества колоний. Они могут быть простыми устройствами, похожими на авторучку или могут состоять из освещенного столика с калиброванной сеткой для помещения чашки и увеличительного экрана для облегчения подсчета колоний. Автоматические электронные счетчики колоний, включающие анализаторы изображения, работают в комбинации с аппаратными средствами ЭВМ и системами программного обеспечения; используют также видеокамеры и монитор.
5.20.2 Использование
Необходимо выполнять инструкции изготовителя. Регулируют чувствительность автоматического счетчика, чтобы обеспечить подсчет всех подлежащих подсчету колоний. Автоматические электронные счетчики колоний также требуют отдельного программирования, если их применяют с различными типами питательных сред и матриц и обеспечивают надлежащий подсчет целевых колоний на поверхности агара или внутри питательной среды.
5.20.3 Проверка
Необходимо регулярно осуществлять проверку подсчета вручную, чтобы гарантировать точность подсчета, выполненного счетчиком колоний.
Кроме того, автоматические счетчики колоний следует проверять каждый день с калибровочной чашкой, содержащей известное число подсчитываемых частиц или колоний для подсчета.
5.20.4 Обслуживание
Оборудование необходимо содержать в чистоте, свободным от пыли; следует избегать повреждения поверхностей, которые являются существенным элементом процесса подсчета. Осуществляют плановое регулярное обслуживание электронных счетчиков, включающих анализаторы изображения, в соответствии с инструкциями изготовителя, с подходящей частотой.
5.21 Оборудование для культивирования в измененной атмосфере
5.21.1 Описание
Может применяться сосуд, герметично запечатанный, или любое другое подходящее оборудование, которое способно поддерживать условия измененной атмосферы (например, необходимые для анаэробиоза) в течение всего периода инкубации питательной среды. Допускается использовать другие системы с равноценными характеристиками типа анаэробных камер.
При установке и обслуживании следуют инструкциям изготовителя оборудования.
5.21.2 Использование
Состав требуемой атмосферы может быть достигнут посредством заполнения газовой смесью (например, из газового баллона) после вытеснения воздуха из сосуда, изменением атмосферы в шкафу или любыми другими подходящими средствами (например, газовые пакеты, имеющиеся в продаже).
Инкубация в анаэробных условиях требует атмосферы, содержащей менее чем 1% кислорода, от 9% до 13% двуокиси углерода; микроаэробное инкубирование требует атмосферы, содержащей 5%-7% кислорода и приблизительно 10% двуокиси углерода.
Условия могут требовать модификации в зависимости от потребностей конкретного микроорганизма.
5.21.3 Проверка
В каждую камеру при использовании помещают биологический или химический индикатор для контроля за качеством атмосферы. Рост контрольного штамма или изменение цвета химического индикатора свидетельствует, что соответствующие условия инкубации достигнуты.
5.21.4 Обслуживание
Если катализатор соответствует условиям исследования, его необходимо установить в соответствии с инструкциями изготовителя. Если имеется клапан, его необходимо чистить и смазывать, чтобы гарантировать надлежащее функционирование. Заменять его следует по мере необходимости.
Оборудование необходимо регулярно очищать и проводить санитарную обработку.
5.22 Центрифуга
5.22.1 Описание
Центрифуги - это механические устройства, в том числе управляемые с помощью электроники, которые используют центробежную силу для отделения взвешенных частиц, включая микроорганизмы, от жидкостей.
5.22.2 Использование
В некоторых случаях концентрация определяемых микроорганизмов достигается путем центрифугирования жидких проб, чтобы получить осадок, который можно снова суспендировать в жидкости и подвергнуть дальнейшему исследованию.
Необходимо принять все меры предосторожности, чтобы предотвратить возникновение аэрозоля и перекрестное заражение. С этой целью необходимо надлежащим образом обращаться с оборудованием и использовать закрытые и стерильные центрифужные пробирки или другие специальные сосуды.
5.22.3 Проверка
Когда скорость центрифугирования максимальная, как указано в инструкции по применению, индикатор скорости или установочные параметры следует регулярно проверять по калиброванному независимому тахометру, а также после существенного ремонта или модификаций.
5.22.4 Обслуживание
Центрифуги регулярно очищают и обеззараживают. В случае пролива материала с микроорганизмами или потенциально зараженных проб центрифуги дополнительно очищают и обеззараживают.
Необходимо постоянное обслуживание центрифуг.
5.23 Нагревательная плитка и кожух с нагревом
5.23.1 Описание
Нагревательные плитки и кожухи представляют собой нагревательные устройства с термостатическим контролем. Некоторые нагревательные плитки и кожухи имеют системы магнитных мешалок.
5.23.2 Использование
Нагревательные плитки и кожухи с нагревом, оборудованные системами магнитных мешалок, используют для нагревания относительно больших объемов жидкостей, таких как питательные среды.
Нельзя использовать нагревательные плитки и кожухи без систем перемешивания при приготовлении питательных сред.
5.23.3 Обслуживание
Все брызги и пролитый материал удаляют сразу после остывания нагревательного прибора.
5.24 Дозатор для нанесения посевного материала на поверхность сред по спирали (спиральный дозатор)
5.24.1 Описание
Спиральный дозатор - это аппарат, который распределяет предварительно установленный объем жидкости по поверхности вращающихся чашек с агаром. Дозирующая игла движется от центра чашки к наружному ее краю по траектории, называемой спиралью Архимеда. Распределяемый объем уменьшается по мере движения иглы от центра к краю чашки таким образом, чтобы существовала обратно пропорциональная зависимость между выливаемым объемом и радиусом спирали. Объем пробы, распределенной на любой конкретный сегмент, известен и постоянен. Для загрузки и разливки жидкостей требуется источник вакуума, плунжер с электроприводом, если в приборе используется одноразовый микрошприц, либо аналогичная система.
5.24.2 Использование
Прибор применяют для разливки жидкой пробы, гомогенной пробы или разведения на соответствующей агаровой чашке для подсчета колоний. После инкубации колонии распределяются по линиям, по которым была распределена жидкость. Подсчитывают количество колоний на определенной площади, используя сетку для подсчета, поставляемую с оборудованием, и определяют количество колоний.
Дозирующая система должна проходить санитарную обработку и ополаскиваться дистиллированной или деионизированной водой перед и после разливки каждой пробы. Дезинфекцию можно проводить, например, путем промывки раствором, содержащим 0,5%-1,0% свободного хлора (по массе).
Оборудование, которое функционирует по другому принципу (например, когда используют одноразовые микрошприцы с плунжером), следует использовать в соответствии с инструкцией изготовителя.
Поверхность чашек с агаром, которые используют со спиральным дозатором, должна быть ровной и без воздушных пузырей.
Чашки не должны содержать избыточную поверхностную влагу, что позволит гарантировать образование отдельных колоний.
Во избежание закупорки перед загрузкой суспензии пробы и использованием порции надосадочной жидкости следует добиться осаждения частиц. Допускается также использование мешков для смесителей с встроенными фильтрами.
5.24.3 Проверка
Необходимо обеспечить центровку чашек Петри на поворотном столе.
Рисунок распределения пробы следует проверять ежедневно с помощью смываемых чернил. Рисунок распределения пробы должен быть наиболее плотным около центра пластины, где начинается разливка пробы, и становиться менее плотным в точке подъема кончика иглы дозатора.
Спираль должна быть полной и не иметь разрывов. Чистая часть чашки должна быть в центре и иметь диаметр приблизительно 2,0 см. Положение иглы в моменты начала и завершения инокуляции должно быть проверено в то же самое время при помощи отметок на поворотном столе.
Если рисунок является неправильным, иглу следует обрезать в соответствии с инструкцией изготовителя. Следует выполнять проверку, чтобы обеспечить расположение наконечника дозирующей иглы под правильным углом к поверхности агара, используя вакуум для удерживания покровного стекла относительно передней части иглы. Покровное стекло должно быть параллельно поверхности агара.
Стерильность спирального дозатора следует проверять с помощью стерильной воды для каждой партии исследуемых проб.
Гравиметрическую проверку распределяемого объема необходимо выполнять регулярно с помощью дистиллированной воды. Полученная масса должна быть в пределах максимально допустимой ошибки ±5% от ожидаемой массы для распределенного объема.
5.24.4 Обслуживание
Пролитый материал необходимо немедленно удалить, а дозатор регулярно очищать.
Дозатор необходимо обслуживать и проверять в зависимости от интенсивности использования.
5.25 Дистилляторы, деионизаторы и установки обратного осмоса
5.25.1 Описание
Данные устройства применяют для получения дистиллированной или деионизированной (деминерализованной) воды требуемого качества (см. ISO 11133) для получения микробиологических питательных сред или реактивов и для других работ в лаборатории.
5.25.2 Использование
Устанавливают, проверяют и используют оборудование в соответствии с инструкцией изготовителя, принимая во внимание местоположение подачи воды в лаборатории, электрического питания и стоков для отходов.
5.25.3 Проверка
После хранения воды или пропускания ее через ионообменник, перед использованием воду проверяют на микробное загрязнение в соответствии с ISO 11133.
5.25.4 Обслуживание
Дистилляторы необходимо промывать и освобождать от накипи при помощи кислоты, например, лимонной кислоты с массовой долей 5%-10% с частотой, которая зависит от жесткости пропускаемой через них воды. Затем их следует тщательно промывать свежей водой с целью удаления остатков кислоты. Деионизаторы и установки обратного осмоса обслуживают в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.26 Таймеры и счетчики времени
5.26.1 Описание
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.