ГОСТ 33460-2015 Продукция соковая. Определение ксилита, сорбита и маннита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 33460-2015
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ
Определение ксилита, сорбита и маннита методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Juice products. Determination of xylite, sorbite and mannitol by high performance liquid chromatography
МКС 67.080.01
Дата введения 2017-01-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены
ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и
ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии Общества с ограниченной ответственностью "Аналит Продактс" (ООО "Аналит Продактс")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по MК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4
Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 ноября 2015 г. N 1881-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33460-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случав пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары, сокосодержащие напитки, фруктовые и овощные концентрированные соки, пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы (далее - соковую продукцию), в том числе диетические и предназначенные для детского питания, и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии определения массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования
________________
ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2222-95 Метанол технический. Технические условия
________________
ГОСТ Р 52501-2005 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
________________
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".
________________
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".
ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ ISO 7886-1-2011 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования
ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия
ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 26671-2014 Продукты переработки фруктов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на хроматографическом разделении ксилита, сорбита и маннита на аминопропильной колонке в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды, с последующим детектированием с помощью рефрактометрического детектора после очистки раствора пробы от сопутствующих примесей твердофазной экстракцией.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
________________
________________
- детектора рефрактометрического с пределом допускаемого значения относительного среднеквадратического отклонения выходного сигнала по площади или высоте пика не более 2%;
- компьютера с установленным программным обеспечением для управления хроматографом и обработки результатов измерений.
Весы лабораторные по
ГОСТ OIML R 76-1 , высокого класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г с поверочным интервалом весов ±0,001 г.
Цилиндры 1-20-2 по
Колбы мерные 1-10-2, 1-50-2, 1-100-2 по
Пипетки градуированные 1-2-1-0,5, 1-2-1-1, 1-2-1-5, 1-2-1-10 по
________________
Установка для твердофазной экстракции (манифольд вакуумный) любого типа.
ГОСТ 28311 , снабженные сменными наконечниками.
Фильтры мембранные из нейлона с диаметром пор 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.
Шприц медицинский одноразовый по
Установка лабораторная для вакуумной фильтрации с насосом.
Центрифуга настольная с относительным центробежным ускорением ротора не менее 1000 g, снабженная соответствующими адаптерами для пробирок.
Бумага фильтровальная по
Фильтры обеззоленные.
Ацетонитрил для ВЭЖХ, с содержанием основного вещества не менее 99,9%.
Ксилит (ксилитол), с массовой долей основного вещества не менее 98%.
D(-)-Маннит, с массовой долей основного вещества не менее 98%.
Сорбит (сорбитол), с массовой долей основного вещества не менее 98%.
Спирт изопропиловый по
ГОСТ 9805 , х.ч.
Спирт этиловый технический по
ГОСТ 17299 или ректификованный по
Метанол технический марки Б по
Вода по ГОСТ ISO 3696, не ниже второй степени чистоты.
Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.
5 Отбор и подготовка проб
5.1 Отбор проб - по
ГОСТ 26313 . Подготовка лабораторных проб - по
5.2 Подготовку проб осветленной соковой продукции проводят по
ГОСТ 31643 (пункт 6.2.1).
Подготовку проб соковой продукции с объемной долей мякоти до 10,0% включительно или содержащих нерастворимые в воде вещества предварительно разбавляют водой ГОСТ ISO 3696 в соотношении 1:5 для осветления раствора. Для этого в мерную колбу по
Концентрированную соковую продукцию разбавляют водой в пять раз весовым методом и далее проводят подготовку по
ГОСТ 31643 (пункты 6.2.1, 6.2.2).
5.3 Очистка проб на картридже
Раствор лабораторной пробы, полученный по 5.2, делят на две части и каждую очищают на картриджах, заполненных обращенно-фазовым сорбентом с помощью вакуумного манифольда в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Полученный после очистки раствор пробы отфильтровывают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
6 Подготовка к проведению измерений
6.1 Подготовка хроматографа к работе
Включение и подготовку прибора к работе, вывод его на режим и выключение по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации и условиями, указанными в 6.2.
Перед проведением измерений хроматографическую систему кондиционируют подвижной фазой до установления стабильной базовой линии в условиях проведения измерений.
6.2 Условия хроматографических измерений
При проведении хроматографических измерений соблюдают следующие условия:
|
|
- температура термостата колонки, °С | (30±5); |
- режим элюирования | изократический; |
- объем вводимой пробы, мм | 20; |
- скорость подачи подвижной фазы, см /мин | 1,8-2,0 (ориентировочное значение) |
- элюент | смесь ацетонитрил:вода в объемном соотношении 85:15; |
- температура ячейки детектора, °С | 30; |
- время измерений, мин | 25. |
В зависимости от типа применяемого хроматографа и хроматографической колонки допускается изменение условий измерений, обеспечивающих требуемое разделение компонентов пробы в порядке, указанном в настоящем разделе.
6.3 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии
Смешивают ацетонитрил и воду в объемном соотношении 85:15. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют под вакуумом в течение 15 мин.
Раствор хранят в течение 30 дней в холодильнике при температуре не выше 10°С, при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ. Перед использованием подвижную фазу дегазируют путем фильтрации под вакуумом или другим способом.
7 Условия проведения измерений
При подготовке к проведению измерений и проведении измерений соблюдают следующие условия:
|
|
- температура окружающего воздуха, °С | (25±5); |
- атмосферное давление, кПа | (97±10); |
- относительная влажность, % | не более 80; |
- напряжение в питающей сети, В | (220±20); |
- частота тока в питающей сети, Гц | (50±1). |
В помещениях, предназначенных для проведения измерений, не должно быть загрязненности воздуха рабочей зоны пылью, агрессивными веществами, должны отсутствовать вибрация или другие факторы, влияющие на измерения массы и объема.
8 Проведение измерений
8.1 Приготовление градуировочных растворов
Срок хранения полученных растворов в холодильнике при температуре не выше 4°С в герметично закрытой колбе - не более двух недель.
где m - масса соответствующего компонента, г;
1000 - коэффициент пересчета грамм через миллиграммы;
100 - коэффициент пересчета процентов в долю единицы.
8.1.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов
Таблица 1 - Приготовление рабочих градуировочных растворов для определения массовой концентрации ксилита, сорбита и маннита
|
|
|
|
|
N градуиро- вочного раствора | Компоненты | Объем мерной колбы, см | Способ приготовления | Массовая концентрация в полученном растворе, мг/см |
5 | Ксилит | 10 | В мерную колбу помещают 5 см раствора, приготовленного по 8.1.1, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 50 |
| Сорбит |
|
|
|
| Маннит |
|
|
|
4 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см раствора, приготовленного по 8.1.1, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 10 |
| Сорбит |
|
|
|
| Маннит |
|
|
|
3 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см градуировочного раствора N 5, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 5 |
| Сорбит |
|
|
|
| Маннит |
|
|
|
2 | Ксилит | 10 | В мерную колбу приливают 1 см раствора N 4, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 1 |
| Сорбит |
|
|
|
| Маннит |
|
|
|
1 | Ксилит | 100 | В мерную колбу приливают 1 см раствора N 3, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают | 0,5 |
| Сорбит |
|
|
|
| Маннит |
|
|
|
Рабочие градуировочные растворы готовят непосредственно перед выполнением измерений.
8.2 Построение градуировочной зависимости
Построение и обработку градуировочной зависимости выполняют методом абсолютной градуировки с помощью программного обеспечения хроматографа.
Хроматограммы обрабатывают в соответствии с руководством пользователя программного обеспечения хроматографа. Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания.
Проводят измерения всех градуировочных растворов, проводя по три параллельных измерения для каждого уровня, в порядке возрастания массовой концентрации компонентов, полностью заполняя петлю инжектора в условиях, указанных в 6.2. Регистрируют площади пиков, проверяя приемлемость выходных сигналов.
Выходные сигналы признают приемлемыми, если относительное среднеквадратичное отклонение (СКО), вычисленное с помощью программного обеспечения, при построении градуировочной характеристики не превышает 5%. В случае превышения - измерения повторяют.
Пример хроматограммы градуировочного раствора приведен в приложении Б, рисунок Б.1.
Градуировочную характеристику считают линейной, если коэффициент корреляции составляет не менее 0,995.
8.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом измерений.
Проводят измерения двух градуировочных растворов, приготовленных по 8.1.2, с массовой концентрацией близкой к началу и концу диапазона измерений в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика.
Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если для обоих растворов выполняется условие
100 - коэффициент пересчета в проценты;
Если условие стабильности (3) не выполняется только для одного градуировочного раствора, то выполняют повторное измерение этого раствора с целью исключения результата, содержащего ошибку.
Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других растворов для градуировки. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики градуировку проводят заново.
8.5 Измерение раствора пробы
Проводят измерения растворов проб, очищенных по 5.3, два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 5725-1 (подраздел 3.14).
Значения площадей пиков на хроматограмме раствора пробы используют для вычисления массовых концентраций ксилита, сорбита, маннита (см. раздел 9) при условии, что они не выходят за верхнюю границу диапазона градуировочной характеристики.
Регистрируют на хроматограммах пики, соответствующие временам удерживания ксилита, сорбита и маннита, найденных при измерении градуировочных растворов.
Если массовая концентрация ксилита, сорбита, маннита на хроматограммах раствора пробы выходит за верхнюю границу диапазона градуировки хроматографа, то пробу разбавляют водой так, чтобы результат измерений не превышал верхнюю границу градуировочной зависимости и проводят повторное измерение.
Типовые хроматограммы ксилита, сорбита и маннита в соковой продукции приведены в приложении Б, рисунки Б.2-Б.3.
9 Обработка и оформление результатов измерений
9.1 В соответствии с данными, полученными при измерениях градуировочных растворов, оформляют таблицу пиков с использованием программного обеспечения хроматографа.
Обработку хроматограмм проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных с использованием градуировочной зависимости, с учетом степени разведения раствора пробы.
9.3 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных измерений, если выполняется условие приемлемости
100 - коэффициент пересчета в проценты;
9.6 Результаты измерений в документах, предусматривающих их использование, представляют согласно
ГОСТ ИСО/МЭК 17025 с указанием метода измерений и настоящего стандарта в виде
Вычисления проводят до третьего десятичного знака. Числовое значение окончательного результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение границ абсолютной погрешности, содержащей не более двух значащих цифр.
10 Метрологические характеристики
При соблюдении всех условий проведения измерений метод обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 2.
Таблица 2 - Диапазоны измерения концентраций ксилита, сорбита, маннита и значения показателей точности и прецизионности метода
|
|
|
|
|
Наимено- вание компонента | Диапазон измерений массовой концентрации, г/дм | Показатель повторяемости (относительное cреднеквад- ратическое отклонение повторяемости) , % | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадрати- ческое отклонение воспроизводимости) , %
| Показатель точности (границы относительной погрешности при доверительной вероятности P =0,95) ± ,% |
Ксилит | От 2,6 до 100,0 включ. | 3 | 5 | 14 |
Сорбит | От 2,6 до 100,0 включ. | 3 | 5 | 14 |
Маннит | От 2,6 до 100,0 включ. | 3 | 5 | 14 |
Примечание - Указанные границы погрешности измерений соответствуют расширенной неопределенности измерений при коэффициенте охвата k=2.
|
Значения пределов повторяемости и воспроизводимости метода приведены в таблице 3.
|
|
|
|
Наименование компо- нента | Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных измерений), , % | Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между четырьмя результатами параллельных измерений) , %
| Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами, полученными в условиях воспроизводимости), , % |
Ксилит | 8 | 29 | 14 |
Сорбит | 8 | 29 | 14 |
Маннит | 8 | 29 | 14 |
11 Контроль результатов измерений при реализации метода
Контроль результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6. Периодичность контроля и процедуры контроля регламентируют в руководстве по качеству лаборатории*.
Контроль результатов измерений в лаборатории при реализации метода выполняют по ГОСТ ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического отклонения промежуточной прецизионности по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.3) и показателя правильности по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункт 6.2.4). Проверку стабильности проводят с применением контрольных карт Шухарта.
Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.
При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.
12 Требования безопасности
12.1 Условия безопасного проведения работ
При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по
ГОСТ 12.1.007 , требования пожарной безопасности - по
ГОСТ 12.1.018 , электробезопасности при работе с электроустановками - по
ГОСТ 12.1.019 , а также требования, изложенные в технической документации на хроматограф.
12.2 Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженеры-химики, лаборанты, имеющие высшее или среднеспециальное образование, опыт работы с данным оборудованием и знакомые с настоящим методом.
Первое применение метода в лаборатории должно проводиться под руководством специалиста, владеющего теорией высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.
Построение градуировочной характеристики, приготовление градуировочных растворов, проведение внутреннего контроля следует проводить специалисту высшей квалификации, имеющего стаж работы в данной области не менее двух лет.
Приложение А
(обязательное)
Проверка эффективности хроматографической колонки
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического анализа градуировочного раствора N 4 по таблице 1 (см. 8.1.2).
Данный раствор готовят из основных растворов ксилита, сорбита, маннита по 8.1.2.
Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если коэффициент разрешения пиков ксилита, сорбита, маннита составляет не менее 1,3, а число эффективных теоретических тарелок, вычисленное по пику ксилита, составляет не менее 4000. В противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают новые условия хроматографического измерения, т.е. новый состав подвижной фазы (объемную долю ацетонитрила в ней) и скорость ее потока. При невозможности достижения требуемых условий эффективности хроматографического разделения проводят испытания других хроматографических колонок аналогичным образом.
Контроль эффективности хроматографического разделения проводят не реже одного раза в две недели.
Приложение Б
(справочное)
Примеры хроматограмм стандартного раствора ксилита, сорбита и маннита в соковой продукции
Б.1 Примеры хроматограмм стандартного раствора ксилита, сорбита и маннита в соковой продукции представлены на рисунках Б.1-Б.3.
|
|
|
|
|
|
|
УДК 664.863.001.4:006.354 |
|
| МКС 67.080.01 |
|
|
|
| ||||||
Ключевые слова: соковая продукция, фруктовые и овощные соки, нектары, морсы, высокоэффективная жидкостная хроматография, градуировочные растворы, массовая концентрация, ксилит, сорбит, маннит |