Методические указания по методам контроля МУК 4.2.577-96 Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов.
МУК 4.2.577-96
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов
Дата введения: с момента утверждения
1. РАЗРАБОТАНЫ: Институтом питания Российской академии медицинских наук (В.А.Тутельян, И.Б.Куваева, И.Я.Конь, С.А.Шевелева, Н.Р.Карликанова); Научно-исследовательским институтом детского питания Российской академии сельскохозяйственных наук (Н.Н.Липатов, Г.П.Шаманова, Н.А.Пронягина); Минсельхозпродом России (Г.Ю.Сажинов, И.Г.Вертинская, Р.Е.Овакимян).
2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Первым заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России, заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 29 октября 1996 г.
3. ВВЕДЕНЫ ВЗАМЕН СанПиН "Микробиологические нормативы и методы анализа продуктов детского, лечебного и диетического питания и их компонентов", утвержденных бывшим Минздравом СССР от 21.12.88, N 42-123-4940-88, в части методов микробиологического контроля.
1. Общие положения
1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методы лабораторных исследований (испытаний) качества продуктов детского, лечебного питания и их компонентов (в том числе импортируемых в Российскую Федерацию) по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимых в порядке производственного контроля, государственного и ведомственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при испытаниях указанной продукции в целях сертификации соответствия.
1.2. Методические указания разработаны в соответствии с Законом РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения"*, Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании**, Положением о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации***.
1.3. Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений (далее - организации), осуществляющих производственный контроль качества при разработке новых видов продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, постановке их на производство и в процессе промышленного выпуска, в лабораториях организаций Государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и ведомственных санитарно-эпидемиологических служб федеральных органов исполнительной власти, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний указанной продукции для целей ее сертификации.
1.4. В соответствии с настоящими Методическими указаниями должен осуществляться микробиологический контроль за безопасностью пищевых компонентов и продуктов детского, лечебного и диетического питания, импортируемых в Российскую Федерацию.
1.5. Настоящие Методические указания должны учитываться при пересмотре действующей и разработке вновь создаваемой нормативной документации на продукты детского и лечебного питания и компоненты, используемые при их изготовлении.
2. Нормативные ссылки
2.1. Закон РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 19 апреля 1991 г.
2.2. Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. N 625.
2.3. Положение о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации от 5 июня 1994 г. N 625.
2.4. ГОСТ 26668-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".
2.5. ГОСТ 26809-86 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытаниям".
2.6. ГОСТ 9225-84* "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа".
2.7. ГОСТ 13928-84 "Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу".
3. Методы отбора проб сырья, компонентов и готовой продукции
3.1. Отбор проб - по ГОСТу 26809 "Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытанию", ГОСТу 13928 "Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу", ГОСТу 9225 "Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа", ГОСТу 26668 "Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов".
3.2. Посуду с пробой или пробу в потребительской таре снабжают этикеткой, на которой указывают:
- номер пробы;
- наименование продукта;
- номер и объем партии;
- дату и час отбора пробы;
- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;
- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт.
3.3. Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой указывают:
- номер пробы;
- наименование предприятия-изготовителя;
- наименование продукта;
- номер и объем партии;
- дату и час выработки продукта с момента окончания технологического процесса;
- дату и час отбора пробы;
- должность и подпись лица, отбиравшего пробу;
- объем необходимых анализов;
- обозначение действующей нормативной документации, по которой вырабатывался продукт.
3.4. Микробиологические анализы продукта проводят не более, чем через 4 часа с момента отбора проб.
3.5. Пробы должны храниться и транспортироваться до начала исследований при температуре продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания.
3.6. Отбор проб для микробиологических исследований производится специалистом Центра госсанэпиднадзора в присутствии должностного лица данного предприятия.
4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы
4.1. Аппаратура и инструментарий
Анализатор потенциометрический, диапазон измерений рН от -1 до 14, погрешность измерений рН±0,05 | |
Аппарат универсальный типа АВУ-6С для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (шуттель-аппарат) | ТУ 64-1-2451-78 |
Ареометр-сахаромер с диапазоном измерений 0-10%, с ценой деления шкалы 0,1% и пределом допускаемой погрешности ±0,1% | |
Баня водяная с подогревом | |
Весы лабораторные общего назначения, 2-го и 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г (или получаемые по импорту) | ГОСТ 24104-80* |
| |
Иономер универсальный ЭВ-74 или потенциометр рН-340 | |
Лотки эмалированные или кристаллизаторы |
|
Лупа измерительная | |
Микрокалькулятор типа "Электроника БЭ-0914М", "БЭ-14", "БЭ-21" или др. типов | |
Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3 (или полученный по импорту с иммерсионной системой) | ГОСТ 8284-78 |
Нож консервный |
|
Ножницы медицинские | ГОСТ 21239-89 |
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов | ТУ 16-535-84 |
Осветители к микроскопу типа ОИ-7, ОИ-9, ОИ-18, ОИ-19 или других марок |
|
Пинцет медицинский | |
Прибор для счета колоний бактерий ПСБ | ТУ 64-1-2041-72 |
Скальпель хирургический, 15 см | |
Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные | |
| |
Стерилизаторы медицинские паровые и воздушные | |
Термостат, позволяющий поддерживать температуру (15-65) °С с отклонением от заданной +1 °С (или получаемый по импорту) | ТУ 64-1-1382-72 |
Холодильник бытовой электрический (или получаемый по импорту) | |
Центрифуга медицинская с числом оборотов, не менее 3000 об/мин |
|
Часы механические сигнальные | |
Часы песочные настольные на 1, 5 и 10 мин |
|
Шкаф сушильный стерилизационный ШCC-80П или др. видов, позволяющий поддерживать температуру (160+5) °С | ТУ 64-1-9009-74 |
Шпатели металлические или фарфоровые 15-20 см |
|
Штативы металлические, пластмассовые или деревянные |
|
Электроплитка | |
4.2. Лабораторная посуда и материалы | |
Бумага индикаторная универсальная | ТУ 6-091181-76 |
Бумага фильтровальная лабораторная | |
Бутылки стеклянные для химических реактивов |
|
Вата медицинская гигроскопическая | |
Воронки стеклянные | |
Бюретки исполнения 1, 2, 3-го классов точности, вместимостью 5, 10, 50 см  , с ценой деления 0,1 см | |
Дозатор пипеточный одноканальный ДП-1-1000 производства ВНИИ биопрепаратов (г.Москва) |
|
Карандаш по стеклу |
|
Кастрюли разные | |
Кастрюли эмалированные | |
Марля медицинская | ГОСТ 9412-77 |
Колбы типа Кн, номинальной вместимостью 40, 200, 400, 1000, 1600 см | |
Колбы исполнения 2, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 250 см | |
Колбы исполнения 2, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 50, 100, 200, 500, 1000 см | |
Колбы мерные исполнения 1, 2-го класса точности, номинальной вместимостью 50, 100 и 1000 см | |
Палочки стеклянные |
|
Пергамент | |
Подпергамент | |
Петли бактериологические |
|
Пипетки исполнения 5, 1, 2-го классов точности, вместимостью 1 см | |
Пипетки исполнения 7, 1, 2-го классов точности, вместимостью 10 см | |
Пробирки Уленгута (поплавки) |
|
Пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диаметром 21 мм, высотой 200 мм | |
Пробки корковые | |
Проволока нихромовая, диаметром 0,4-0,5 мм для изготовления бактериологических петель и игл |
|
Проволока платиновая для изготовления бактериологических петель |
|
Спиртовки лабораторные стеклянные | |
Стаканчики для взвешивания типа СВ | |
Стаканы типа ВН, вместимостью 100 и 200 см | |
Стекла предметные для микропрепаратов | |
Стекла покровные для микропрепаратов | |
Ступка фарфоровая с пестиком | |
Термометр (ртутный) с диапазоном измерения от 0 до 100 °С, с ценой деления шкалы 1 °С | |
Термометр жидкостный (нертутный) с диапазоном измерения от 0 до 100 °С, с ценой деления шкалы 1 °С | |
Ткань мягкая льняная (кусочки) |
|
Трубки медицинские резиновые, диаметром 7-10 мм | |
Цилиндры исполнения 1, вместимостью 100, 500 см | |
Чашки биологические (Петри) | |
Шпагат | ГОСТ 16266-70 |
4.3. Реактивы, питательные среды | |
Агар микробиологический | ГОСТ 17206-84 |
Агар питательный сухой | ТУ 42-14-33-75 |
или | ТУ 10-02-789-177-94 |
Агар сывороточный БФ | ТУ 49 1059-84 |
или | ТУ 10-02-02-789-177-94 |
Агар типа Байрд-Паркера | ТУ 10-02-02-789-176-94 |
Агар солевой | ТУ 10-02-02-789-176-94 |
Бульон солевой | ТУ 10-02-02-789-176-94 |
 -нафтол технический |
|
Бензин авиационный | |
Бриллиантовый зеленый | ТУ 6-09-4279-76 |
Бромтимоловый синий | ТУ 6-09-20-86-77 |
Вода дистиллированная | |
Вода питьевая | |
| |
Висмут сульфитный агар | ТУ 42 141-27-78 |
Гидролизат казеина панкреатический | ТУ 42-14-1-74 |
Дефибринированная кровь человека, барана или кролика |
|
Дрожжи хлебопекарные прессованные | |
D-глюкоза, ч. | |
D-лактоза, 1-водная | ТУ 6-09-22-98-79 |
D(+) мальтоза для микробиологических целей |
|
DL-триптофан | ТУ 6-09-1492-80 |
Желчь сухая или желчь нативная сельскохозяйственных животных, стерильная | ОСТ 49 278-75 |
Железо III сернокислое, 9-водное | |
Йод | |
Калия гидроокись | |
Калий йодистый, ч.д.а. | |
Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч. | |
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный | |
Кальций углекислый | |
Кислота соляная, х.ч. | |
Кислота молочная пищевая | |
Кристаллический фиолетовый | ТУ 6-09-4119-75 |
Левомицетин (медпрепарат) |
|
Лимонная кислота, х.ч. или ч. | |
Литий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а. | |
L-цистин солянокислый или цистин солянокислый, получаемый по импорту | ТУ 6-093252-80 |
Магний сернокислый, 7-водный | |
Магний хлористый 6-водный, ч.х.ч. или х.ч., или ч.д.а. | |
Масло иммерсионное для микроскопии | |
Медь сернокислая, 5-водная, х.ч. | |
Метиленовый голубой, индикатор, получаемый по импорту |
|
Молоко коровье, обезжиренное, стерильное, приготовленное (в пробирках) | |
| |
Молоко коровье, обезжиренное, сухое | |
| |
Мочевина (карбамид) | |
Мясо-пептонный бульон |
|
Набор для окраски по Граму |
|
Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный, 4-водный, ч. или х.ч. | |
Натрия гидроокись, ч.д.а. | |
Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч.д.а. | |
Натрий серноватистокислый (натрия трисульфат), 5-водный | |
Натрий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а. | |
Неомицин (медпрепарат) |
|
Панкреатин медицинский, активностью 50 ЕД в 1 г | ФХ 362 |
Пара-диметиламидобензальдегид, ч. | ТУ 6-09-3272-77 |
Пенициллин (медпрепарат) |
|
Пергидроль 30%-ная (водорода перекись) | |
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей | |
Полимиксин "М" сульфат по 500000 ЕД (медпрепарат) |
|
Плазма крови кролика сухая |
|
Сахароза | |
Спирт этиловый ректификованный технический | |
Спирт этиловый ректификованный | |
| |
Соль Мора | |
Среда с индикатором ВР и маннитом сухая |
|
Среда агаровая модифицированная для определения общего количества бактерий в молоке и молочных продуктах | ТУ 49 513-83 |
Среда для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (общего количества бактерий) КМАФАнМ | ТУ 10-02-02-789-177-94 |
Среда Сабуро | ТУ 9229-014-004 19789-95 |
Среда Левина сухая | ФС-42-53 ВС-88 |
Среда Плоскирева | ФС-42-193 ВС-88 |
Среда Ресселя | ФС-42-190 ВС-88 |
Среда Эндо | ФС-42-186 ВС-88 |
или | ТУ 49 876-82 |
Среда Клиглера |
|
Среда Кесслер сухая | ТУ 10.02.875-90 |
Среда Козера |
|
Среда гидролизатно-молочная (ГМС-1) для количественного учета бифидобактерий | ТУ 10-02-02-789-176-94 |
Среда кукурузно-лактозная (ГМК-1) для количественного учета бифидобактерий | ТУ 10-02-02-789-176-94 |
Стрептомицин (медпрепарат) |
|
Сусло солодовое неохмеленное |
|
Сыворотка диагностическая сальмонеллезная 0-агглютинирующая адсорбированная | ТУ 6-09-3838-78 |
2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, ч.д.а. |
|
Феноловый красный | |
Фенолфталеин | |
Фуксин основной | ТУ 6-09-4119-75 |
Хлороформ технический | ГОСТ 20015-76 |
Экстракт кормовых дрожжей | ТУ 42-14-56-76 |
Экстракт солодовый | ГОСТ 418-84 |
Яйцо куриное диетическое |
|
5. Подготовка к анализу
5.1. Подготовка проб к анализу
5.1.1. Молоко, сливки и другие жидкие продукты и компоненты
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают.
5.1.2. Сгущенные продукты и компоненты
Отобранную пробу тщательно перемешивают стерильной ложкой, затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.
5.1.3. Кисло-молочные продукты и напитки, закваски
5.1.4. Стерилизованные продукты детского питания
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают. Перед вскрытием бутылок (пакетов) с продуктом крышку (поверхность пакета) протирают ватой, смоченной спиртом.
Открывают крышку фламбированным или стерильным консервным ножом. Края пакета вскрывают стерильным ножом, скальпелем или ножницами. После снятия крышки края бутылки вновь фламбируют.
5.1.5. Сыр, творог, творожные изделия и пастообразные продукты
Навеску сыра, творога, творожных изделий и пастообразных продуктов взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри, в бюксе, переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, и тщательно растирают, нейтрализуют по п.5.1.3.
5.1.6. Топленое масло или молочный жир
Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре от 40 до 45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
5.1.7. Сухие продукты детского питания и компоненты
Отобранную среднюю пробу тщательно перемешивают, взвешивают навеску продукта на кусочке стерильного пергамента, на чашке Петри, в бюксе или на часовом стекле, затем взвешенную пробу переносят в стерильную колбу или другую посуду.
5.2. Приготовление разведений прдуктов для посева
5.2.1. Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных растворах разбавленного фосфатного буфера, изотонического раствора натрия хлорида, пептонной воды или лимоннокислого натрия (для сыра).
Получают разведение 1:10 (первое разведение).
Топленое масло или молочный жир вносят в растворы, подогретые до температуры от 40 до 45 °С.
Получают разведение 1:10.
5.2.4. Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание на аппарате для встряхивания жидкостей в течение (6±1) мин, избегая намокания пробок. Первое разведение продукта (1:10) можно гомогенизировать в стерильном стакане гомогенизатора или растереть в стерильной ступке.
Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. Вводят пипетку в пробирку не более, чем на 2-3 см ниже поверхности взвеси.
Время от момента приготовления разведений до посева не должно превышать 20-30 мин. Перед посевом все разведения осторожно встряхивают. При посеве на чашки Петри или в пробирки посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случае пользуются одной пипеткой.
5.2.6. Для приготовления разведений сухих молочных каш для детского питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания его в течение 2-3 мин.
5.3. Подготовка посуды и материалов
5.3.1. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1-2%) в течение (15±5) мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.
Посуду, бывшую в употреблении, моют 0,5%-ным щелочным раствором с помощью ершей и щеток и ополаскивают водопроводной водой. Сильно загрязненную посуду со следами жира, красок и иммерсионного масла опускают на 2 ч в хромовую смесь, подогретую от 40 до 45 °С, затем тщательно промывают проточной водопроводной водой.
Посуда с питательными средами, после подсчета на них дрожжей, плесневых грибов, бактерий группы кишечных палочек, Е. coli, S. aureus, энтерококков, сальмонелл и других видов условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при (121±1) °С в течение (30±1) мин или кипячением в течение 1 ч.
Вымытую посуду не вытирают, а сушат при комнатной температуре или горячим воздухом.
Предметные стекла после мойки и ополаскивания вытирают чистой салфеткой или помещают в склянку с притертой пробкой в смесь этилового спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1.
5.3.2. Лабораторную посуду перед использованием обязательно стерилизуют. Стерилизацию осуществляют сухим жаром в сушильном шкафу при (160±5) °С в течение 2 ч или паром в автоклаве при 1 атм (121±1) °С в течение (30±1) мин с последующим подсушиванием в сушильном шкафу.
Перевод давления, показываемого манометром автоклава, в температуру проводится следующим образом:
- 0,5 атм - 112 °С;
- 0,7 атм - 116 °С;
- 0,8 атм - 118 °С;
- 1,0 атм - 121 °С;
- 2,0 атм - 134 °С.
Чашки Петри, пипетки и т.п. стерилизуют завернутыми в плотную оберточную бумагу или в пеналах. В верхнюю часть пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты.
Пробирки, флаконы, бутылки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробки (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок, который обвязывают вокруг горлышка ниткой или закрепляют резиновым колечком.
Каучуковые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют отдельно в автоклаве завернутыми в бумагу.
Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. Срок хранения стерильной посуды - не более 30 суток при ненарушенной завертке или невскрытых пеналах.
6. Приготовление питательных сред и реактивов
6.1. Питательные среды и реактивы общего назначения
6.1.1. Концентрированный фосфатный буферный раствор
6.1.2. Разбавленный фосфатный буферный раствор
6.1.3. 0,1%-ный водный раствор пептона (пептонная вода)
6.1.4. Изотонический 0,85%-ный раствор хлористого натрия
Для приготовления изотонического раствора, активной кислотностью (7,0±0,1) ед. рН используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимолблау. При его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют.
6.1.5. Приготовление раствора лимоннокислого натрия для приготовления разведений сыра
6.1.6. Стерильная дистиллированная вода
Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимых количествах и стерилизуют в течение (20±1) мин при (121±1) °С.
6.1.7. Раствор двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисло-молочных продуктов и закваски
6.1.8. Реактивы для окраски по Граму (модификация Г.П.Калины)
Реактив 1.
Реактив 2.
Примечание. Растворение йодистого калия в спирте рекомендуется проводить в водяной бане при температуре от 45 до 50 °С при постоянном помешивании.
6.1.9. Приготовление реактивов из метиленового голубого
Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого.
Приготовление рабочего раствора метиленового голубого.
Приготовление раствора метиленового голубого для окраски препаратов.
6.1.10. Приготовление карболового раствора кристаллического фиолетового для окраски препаратов
Растворы хранят в темном флаконе под притертой пробкой.
6.1.11. Мясо-пептонный бульон
Говяжье мясо, освобожденное от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку, взвешивают, складывают в кастрюлю, смешивают с двойным количеством водопроводной воды и оставляют на (18±6) ч при температуре (5±1) °С. Для ускорения процесса выделения питательных веществ из мяса содержимое кастрюли подогревают при температуре (50±5) °С в течение (1±0,1) ч и затем кипятят (35±5) мин. После кипячения бульон в горячем состоянии фильтруют через двойной бумажный фильтр. Фильтрат доводят питьевой водой до первоначального объема, добавляют к нему (1,0±0,1)%-ного пептона и (0,5±0,1)%-ного хлористого натрия. Устанавливают с помощью 1 н раствора гидроокиси натрия активную кислотность (7,3±0,1) ед рН. Приготовленный бульон разливают в колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (20±1) мин.
6.1.12. Мясо-пептонный агар
6.2. Специальные питательные среды и реактивы
6.2.1. Среды для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
6.2.1.1. Среда для определения аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
Сухой питательный агар промышленного производства (на основе килечного гидролизата) |
| - 35 г |
Экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) |
| - 2,5 г |
Глюкоза |
| - 1,0 г |
Вода дистиллированная |
| - до 1000,0 см |
рН |
| - 7,0 |
Стерилизация в автоклаве при (121±1) °С в течение (20±1) мин.
6.2.1.2. Сухие питательные среды промышленного производства по ТУ 49513-83 или по ТУ 10-02-02-789-177-94.
Подготовку сред для посевов проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.2. Среды и реактивы для обнаружения бактерий группы кишечных палочек и эшерхий коли
6.2.2.1. Среда Кесслер (с лактозой)
6.2.2.2. Сухая среда Кесслер промышленного производства по ТУ 10.02.875-90
Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.2.3. Среды сухие Левина, Эндо
Среды Левина (эозинметиленовоголубой агар), Эндо промышленного выпуска готовят согласно прописи, указанной на этикетке банок. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить при температуре (4±2) °С до 10 суток.
6.2.2.4. Среда на индол
6.2.2.5. Среда Кларка
6.2.2.6. 90%-ный раствор этилового спирта
6.2.2.7. Раствор индикатора метилового красного
6.2.2.8. 0,5%-ный раствор бромтимолового синего в спирте.
6.2.2.9. 0,5%-ный и 0,1%-ный растворы бриллиантового зеленого
Растворы хранят в холодильнике в течение 7-10 суток.
6.2.2.10. 1,6%-ный раствор бромкрезолового пурпурного в спирте
6.2.2.12. 40%-ный раствор гидроокиси калия
6.2.2.13. 1%-ный водный раствор генцианового (кристаллического) фиолетового
6.2.2.14. Реактив на индол (Эрлиха)
6.2.2.15. Среда Козера
6.2.2.16. Среда Симмонса
6.2.2.17. Среда с 5% сахарозы
6.2.3. Среды и реактивы для обнаружения бактерий рода Salmonella
6.2.3.1. Магниевая среда
Среду готовят из трех растворов*.
_______________
* При необходимости использования среды двойной концентрации масса (объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.
1 раствор:
пептон | - 4,2 г |
натрий хлористый | - 7,15 г |
дрожжевой диализат или дрожжевой экстракт (ЭКД) | - 20 см или 2 г |
калий фосфорнокислый однозамещенный | - 1,42 г |
вода дистиллированная | - 890,0 см |
2 раствор: |
|
магний хлористый кристаллический (MgCl  ·6H О) | - 35,7 г |
вода дистиллированная | - 90,0 см |
3 раствор: |
|
0,5%-ный водный раствор бриллиантового зеленого | - 0,9 см |
После растворения всех ингредиентов растворы соединяют, устанавливают активную кислотность (7,2±0,2) ед рН, разливают приготовленную таким образом среду в колбы и флаконы. Среду стерилизуют при температуре (112±1) °С в течение (30±1) мин.
6.2.3.2. Дрожжевой диализат
6.2.3.3. Среда Мюллера
После добавления указанных ингредиентов смесь взбалтывают и разливают в необходимых количествах. Допускается использовать среду в течение 7 дней после приготовления.
6.2.3.4. Среда Кауфмана
6.2.3.5. Приготовление селенитовой среды
6.2.3.5.1. Селенитовая среда накопления Лейфсона*
_______________
* При использовании среды двойной концентрации масса (объем) всех ингредиентов, кроме воды, удваивается.
Натрий кислый селенистокислый | - 4 г |
Пептон импортный | - 5 г |
Натрий фосфорнокислый двузамещенный | - 7 г |
Натрий фосфорнокислый однозамещенный | - 3 г |
Лактоза | - 4 г |
Дистиллированная вода | - 1000,0 см |
Среду готовят из 2-х основных растворов. Прежде всего экспериментально определяют точную пропорцию двузамещенного и однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым образцом пептона и кислого селенистокислого натрия дает активную кислотность (7,0±0,1) ед рН, что регулируется соотношением фосфатов. Такая предварительная подтитровка производится всякий раз, когда меняется серия любого из входящих в среду основных ингредиентов (пептон, кислый селенистокислый натрий, фосфаты).
После установления указанных соотношений к приготовленному раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу, разливают во флаконы и стерилизуют текучим паром 2 дня по (30±1) мин или при (112±1) °С однократно в течение (30±1) мин.
6.2.3.5.2. Селенитовая среда сухая
Селенитовую среду приготавливают согласно прописи на этикетке.
6.2.3.6. Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар
Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар (ВСА) промышленного производства выпускаются в сухом виде. Их следует готовить согласно прописи, указанной на этикетке банки. Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить в холодильнике до 10 суток.
6.2.3.7. Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого)
Трехсахарный агар с мочевиной готовят смешением следующих ингредиентов:
Дистиллированная вода | - 100,0 см |
Сухой питательный агар | - 2,5 г |
Лактоза | - 1,0 г |
Сахароза | - 1,0 г |
Глюкоза | - 0,1 г |
Мочевина | - 1,0 г |
Железо сернокислое (FeSО  ·7H О) | - 0,02 г |
Натрий серноватистокислый (Na S О ·5H О) | - 0,03 г |
0,04%-ный водный раствор фенолового красного | - 0,04 см |
6.2.3.8. 0,4%-ный водный раствор фенолового красного
6.2.3.9. Среда Ресселя из сухих питательных сред
6.2.3.10. Среда Клиглера из сухих питательных сред
Среду готовят и стерилизуют согласно прописи на этикетке. Готовую среду скашивают в пробирках так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).
6.2.3.11. Диагностическая поливалентная агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная сыворотка
Необходимые разведения сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемой к коробке инструкции.
6.2.4. Среды и реактивы для обнаружения стафилококков
6.2.4.1. Солевой бульон
6.2.4.2. Бульон солевой и агар солевой - сухая питательная основа для приготовления желточно-солевого или молочно-солевого агара - промышленного производства. Подготовку сред для посевов проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.4.3. Агар типа Байрд-Паркер
6.2.4.4. Агар типа Байрд-Паркера - арбитражная среда промышленного производства в сухом виде.
6.2.4.5. Желточно-солевой агар (ЖСА)
6.2.4.6. Эмульсия яичного желтка
6.2.4.7. Цитратная плазма кролика
Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.
6.2.5. Среды и реактивы для обнаружения В. cereus
6.2.5.1. Среда Донована
6.2.5.2. Эмульсия яичных желтков для среды Донована
6.2.5.3. Солевой полимиксиновый агар с 2,3,5-трифенилтетразолием хлористым
Полимиксин, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый и эмульсию желтков асептично добавляют в агар после расплавления и охлаждения до 40-45 °С, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри. Хранят среду в холодильнике не более 7-10 суток.
6.2.5.4. Кровяной агар
_______________
* В качестве антикоагулянта применяют 5%-ный раствор лимоннокислого натрия или 5%-ный раствор щавелевокислого натрия (или калия). Антикоагулянт берут из расчета 1 объем на 9 объемов крови (1:9).
6.2.5.5. Среда с маннитом
В дистиллированную воду прибавляют 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Растворяют при нагревании, прибавляют 0,1% спиртового (1,6%) раствора бромкрезолового пурпурного (можно бромкрезолового синего), нагревают до 80 °С и устанавливают активную кислотность (7,1±0,1) ед рН, проверяя значение на рН-метре. Затем среду кипятят (5±1) мин, фильтруют и доливают до первоначального объема дистиллированной водой. Добавляют 0,5-1% маннита, разливают по пробиркам с поплавками. Стерилизуют автоклавированием при (115±1) °С в течение (15±1) мин.
6.2.5.6. Среда с индикатором ВР и маннитом сухая промышленного производства
Подготовку среды для посева проводят согласно прописи на этикетке.
6.2.6. Среды и реактивы для обнаружения плесневых грибов и дрожжей
6.2.6.1. Раствор солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5±0,5)%
Сусло фильтруют через фильтрованную бумагу, разливают в колбы и стерилизуют (30±1) мин в автоклаве при (108±2) °С. Затем сусло декантируют. В сусле определяют массовую долю сухих веществ ареометром-сахарометром. Сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ (7,5±0,5)%, разливают в колбы и стерилизуют при (116±1) °С в течение (20±1) мин. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, которое готовят аналогично солодовому.
6.2.6.2. Сусловый агар
6.2.6.3. Приготовление среды из сухого сывороточного агара "БФ"
6.2.6.4. Среда для определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах промышленного производства* по ТУ 49 1059-84.
_______________
* Использование сред 6.2.6.4-6.2.6.6 допускается только в производственных лабораториях.
Среда готовится по прописи на этикетке.
6.2.6.5. Среда Сабуро
6.2.6.6. Среда с солодовым экстрактом
Среды хранят при температуре от 4 до 6 °С не более 14 суток.
Для повышения элективности питательных сред 6.2.6.3-6.2.6.6 добавляют антибиотики в объеме, указанном в табл.10.
Таблица 10
Объем питательной среды | Объем добавляемых к среде растворов антибиотиков, см | |||
| пенициллин | стрептомицин | неомицин | левомицетин |
980 | 10 | 10 | - | - |
930 | - | - | 70 | - |
975 | - | - | - | 25 |
Антибиотики готовят согласно п.6.2.6.7-6.2.6.10.
Водные растворы антибиотиков готовят непосредственно перед использованием и вносят в расплавленную и охлажденную до (46±1) °С питательную среду.
Среды с антибиотиками хранению не подлежат.
6.2.6.7. Приготовление раствора пенициллина
6.2.6.8. Приготовление раствора стрептомицина
6.2.6.9. Приготовление раствора неомицина
6.2.6.10. Приготовление раствора левомицетина (хлорамфеникола)
6.2.7. Среды и реактивы для определения бифидобактерий
6.2.7.1. Гидролизованное молоко
Обычное или восстановленное обезжиренное молоко (обрат) доводят до кипения и кипятят (2±1) мин, охлаждают до (14±1) °С, устанавливают активную кислотность (7,8±0,1) ед рН 10-20%-ным раствором NaOH.
6.2.7.2. Гидролизатно-молочная среда
Гидролизованное молоко, приготовленное по п.6.2.7.1 разводят питьевой водой в соотношениии 1:1.
6.2.7.3. Кукурузно-лактозная среда
6.2.7.4. Селективная среда для определения количества бифидобактерий в продуктах, в микрофлоре которых присутствуют молочно-кислые бактерии
6.2.7.5. Приготовление раствора неомицина
6.2.8. Среды для определения молочно-кислых бактерий
6.2.8.1. Стерилизованное обезжиренное молоко
6.2.8.2. Агар с гидролизованным молоком
К приготовленному гидролизованному молоку (п.6.2.7.1) добавляют 1,5% агара. Смесь расплавляют при (121±1) °С (15±1) мин, фильтруют через вату (в теплом автоклаве), разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (10±1) мин.
6.2.8.3. Агар с гидролизованным молоком, глюкозой и дрожжевым автолизатом
6.2.8.4. Приготовление дрожжевого автолизата
6.2.8.5. Приготовление водного (голодного) агара
6.2.9. Среды и реактивы для обнаружения энтерококков
6.2.9.1. Молочная среда с полимиксином по Г.П.Калине
6.2.9.2. 1%-ный раствор перекиси водорода
6.2.9.3. Бульон с 40% желчи
6.2.9.4. Бульон с активной кислотностью 9,6 ед рН
Мясо-пептонный бульон с активной кислотностью (7,0±0,2) ед рН нейтрализуют 1 н раствором гидроокиси натрия до активной кислотности 9,6 ед рН, проверяя значение рН универсальной индикаторной бумагой или по РН-метру. Разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при (121±1) °С в течение (30±1) мин.
6.2.10. Контроль питательных сред
6.2.10.1. Определение активной кислотности (pH)
Электрометрическое определение проводят на потенциометре или рН-метре по прилагаемым к ним инструкциям.
Определение активной кислотности с помощью индикаторной бумаги проводится по прилагаемой к ней инструкции.
6.2.10.2. Контроль на стерильность
Среды проверяют на стерильность путем выдержки при температуре (37±1) °С в течение 2-х суток. Если после этого на пробных питательных средах не обнаруживается колоний микроорганизмов, а в жидких средах нет помутнения среды или осадка, свидетельствующих о росте микроорганизмов, питательные среды считаются стерильными.
6.2.10.3. Сроки и условия хранения питательных сред
При отсутствии специально установленных условий и сроков хранения плотные питательные среды хранят не более месяца при температуре (20±1) °С и не более 2-х месяцев - при температуре 6 °С. Жидкие питательные среды хранят не более 14 дней при 6 °С.
7. Методы анализа
При контроле микробиологического качества и безопасности продуктов детского питания определяются следующие группы микроорганизмов: общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов; бактерии группы кишечных палочек, Е. coli, S. aurеus, В. cеrеus; бактерии рода Salmonella; дрожжи; плесневые грибы.
В кисло-молочных продуктах проводится контроль за количеством технологически значимой микрофлоры: молочно-кислых бактерий и бифидобактерий.
При проведении посевов на индикаторные, условно-патогенные и патогенные микроорганизмы должны быть использованы контрольные культуры соответствующих микроорганизмов, которые изучают в тестах идентификации параллельно с культурами, выделенными из исследуемых образцов продуктов.
7.1. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
7.1.1. Сущность метода
Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих на плотном питательном агаре при температуре (30±1) °С в течение 72 ч.
Аппаратура, материалы и реактивы согласно п.4.
7.1.2. Подготовка к анализу
Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют как указано в п.5.1 и 5.2. Посуду, материалы и реактивы стерилизуют как указано в п.5.3.
7.1.3. Проведение анализа
Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний. При посеве продуктов, не требующих разведения, учитывают все выросшие на чашках колонии (т.е. и менее 15).
Посев на чашки
Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки карандашом по стеклу ставят номер исследуемого образца продукта, разведение и дату.
Края колб с питательной средой перед каждой заливкой фламбируют в пламени газовой горелки или спиртовки. Сразу после заливки агара содержимое чашки Петри тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала.
7.1.4. Инкубация
После застывания среды чашки Петри переворачивают крышками вниз и помещают в таком виде в термостат при (30±1) °С на 72 ч (допускается предварительный учет через (48±1) ч с последующим окончательным учетом еще через (24±1) ч.
Чашки Петри с посевами распределяют в термостате таким образом, чтобы каждая их группа отделялась от соседних чашек, от верха и стенок термостата не менее, чем на 3 см.
7.1.5. Учет и обработка результатов
Количество выросших колоний подсчитывают на каждой чашке, поместив ее вверх дном на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением от 4 до 10 раз. Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами. При подсчете колоний рекомендуется пользоваться специальным прибором.
При большом числе колоний и равномерном их распределении дно чашки Петри делят на четыре и более одинаковых сектора, подсчитывают число колоний на двух-трех секторах (но не менее, чем на 1/3 поверхности чашки), находят среднее арифметическое число колоний и умножают на общее количество колоний, выросших на одной чашке.
Полученный результат округляют в соответствии с ГОСТом 26670-91 "Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов":
- до числа, кратного 5, если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100;
- до числа, кратного 20, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5;
- до числа, кратного 10, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5.
Ответ выражают в виде числа КОЕ/г с указанием соответствия или несоответствия продукта микробиологическому нормативу на этот показатель.
Пример: посеяно разведение 1:10; чашка 1 - 185 колоний, чашка 2 - 203 колонии;
расчет:
185+203=388:2=194 - округляем до 200;
7.2. Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
7.2.1. Сущность метода
В соответствии с принятой международной номенклатурой в настоящих Методических указаниях к бактериям группы кишечных палочек (БГКП) отнесены грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре (37±1) °С в течение 24-48 ч, в основном являющиеся представителями родов Eshеrichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Sеrratia (т.e. учитываются как цитратотрицательные, так и цитратположительные варианты БГКП).
Сухие продукты типа "Детолакт", "Новолакт ММ", "Алеся" и др., предназначенные для детей с первого дня жизни и употребляемые после восстановления при (37±1) °С и (70±1) °С, перед посевом должны подвергаться предварительной инкубации в неселективной жидкой среде для восстановления физиологических свойств бактерий, поврежденных в процессе технологической обработки продукта. В качестве неселективной среды обогащения используют фосфатный буферный раствор (п.6.1.2).
Без предварительной инкубации исследуют сухие продукты, подвергающиеся различным способам термической обработки перед употреблением (разведение кипяченой водой (85±1) °С и выше, доведение до кипения, пастеризация восстановленной смеси и т.д.), биологически активные добавки, стерилизованные, кисло-молочные (сухие и жидкие) и пастообразные продукты детского питания, а также составляющие их компоненты.
7.2.2. Подготовка к анализу
Посуду, материалы и реактивы подготавливают как указано в п.5.3.
7.2.3. Приготовление разведений
Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют как указано в п.5.1 и 5.2.
7.2.4. Посев с предварительной инкубацией детских сухих молочных продуктов
7.2.5. Прямой посев
Для посева используют то количество продукта, в котором предусматривается отсутствие БГКП (колиформных бактерий) соответствующими пунктами таблиц 1-9. Посев производится в среду Кесслер с лактозой (с поплавками), с соблюдением соотношения продукта и среды 1:10. Применение среды Кода не допускается.
Прямые посевы продуктов или посевы после преинкубации помещают в термостат при температуре (37±1) °С на (24±1) ч. При отсутствии признаков роста - газообразования или помутнения среды, дают заключение об отсутствии БГКП (колиформных бактерий) и соответствии исследуемого продукта нормативу на БГКП (колиформные бактерии). При наличии признаков роста - газообразования, помутнения среды Кесслер с лактозой, для окончательного заключения о наличии в продукте БГКП (колиформных бактерий), из подозрительных колб или пробирок производят высев на чашки со средой Эндо или Левина (п.6.2.2.3). Посев производят петлей из каждой пробирки так, чтобы получить рост изолированных колоний - на отдельный сектор, лучше - на отдельную чашку. Чашки с посевами помещают в термостат при температуре (37±1) °С от 18 до 24 ч.
Учет результатов.
При отсутствии на среде Эндо или Левина колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) (на среде Эндо - красных с металлическим блеском или без него, розовых и бледно-розовых; на среде Левина - черных с металлическим блеском, темных с черным центром, сиреневых с темным центром) засеянная навеска продукта считается незагрязненной ими, т.е. исследуемый продукт соответствует нормативу на БГКП (колиформные бактерии).
При наличии на среде Эндо или Левина типичных или подозрительных для кишечных палочек (колиформных бактерий) колоний их продолжают изучать. Из изолированных колоний, характерных или подозрительных на БГКП, делают препараты, окрашивают их по Граму и микроскопируют.
Обнаружение грамотрицательных не содержащих спор палочек указывает на наличие БГКП (колиформных бактерий) в анализируемой массе продукта и несоответствие продукта микробиологическому нормативу.
Примечание.
Обнаружение на среде Эндо колоний с желтым или желто-коричневым оттенком при анализе сухих молочных каш, содержащих в качестве компонента муку рисовую и гречневую, толокно овсяное, крупу манную, указывает на возможную принадлежность выделенных бактерий к роду Erwinia.
Бактерии рода Erwinia - грамотрицательные, необразующие спор палочки, способные утилизировать лактозу с образованием кислоты и газа, по комплексу других биохимических признаков отличающиеся от бактерий группы кишечных палочек. Бактерии рода Erwinia являются типичными представителями эпифитной микрофлоры зерновых культур и не обладают патогенностью для человека и животных. Для определения принадлежности к роду Erwinia выросших на среде Эндо нетипичных для БГКП колоний последние пересевают на питательный агар с 5% сахарозы (п.6.2.2.17), на котором они дают выраженный мукоидный рост, не свойственный бактериям группы кишечных палочек. При подтверждении принадлежности подозрительных колоний роду Erwinia и отсутствии других микроорганизмов, типичных для БГКП, исследуемый продукт считается соответствующим нормативу на БГКП (колиформные бактерии).
7.3. Определение Е. coli
Е. coli - не утилизирующие цитрат грамотрицательные бесспоровые палочки, входящие в группу колиформных бактерий и являющиеся индикатором относительно свежего фекального загрязнения, способные расти и ферментировать лактозу при температурах выше температуры тела человека и теплокровных животных (от 44,0 до 45,5 °С).
7.3.1. Сущность метода
Метод основан на способности Е. соli ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 44,0 °С от 24 до 48 часов. Идентификацию Е. coli проводят по признакам: образование индола, положительная реакция с метиловым красным, отрицательная реакция Фогес-Проскауэра (образование ацетилметилкарбинола) и отсутствие способности утилизировать цитраты.
7.3.2. Аппаратура, материалы и реактивы
При проведении анализов используют аппаратуру, материалы и реактивы, перечисленные в п.4.
7.3.3. Подготовка к анализу
Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют, как указано в п.5.1 и 5.2.
Посуду и материалы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.3.4. Проведение анализа с предварительной инкубацией
Для доведения активной кислотности до 7,0 ед рН используют простерилизованный 1 Н раствор гидроокиси натрия или 1 Н раствор соляной кислоты, проверяя рН индикаторной бумагой.
Колбу помещают в термостат и выдерживают при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч.
7.3.5. Проведение анализа без предварительной инкубации
7.3.5.2. Пробирки и колбы с посевами просматривают на присутствие газа. При отсутствии газа и других признаков роста (помутнения и т.д.) в посевах дают заключение об отсутствии в продукте Е. coli и соответствии нормативу по этому показателю.
Пробирки (колбы), в которых обнаружен газ или другие признаки роста (помутнение среды), подвергают дальнейшим исследованиям. Из этих пробирок производят посев штрихом или рассевом на поверхность чашки Петри с подсушенной средой Эндо или Левина так, чтобы получить изолированные колонии. Посевы выдерживают в термостате (37±1) °С в течение (24±1) ч.
Эшерихии на среде Эндо образуют колонии красные с металлическим блеском или без него, розовые, на агаре Левина - черные, темно-коричневые колонии с темным центром, с металлическим блеском или без него. Если при окрашивании по Граму и просмотре под микроскопом подтверждается наличие грамотрицательных бесспоровых палочек, то все типичные колонии подвергают идентификации по ИМАЦ-тестам (реакция на индол, реакция с метиловым красным, реакция Фогес-Проскауэра, утилизация цитрата).
7.3.5.3. Реакция на индол
Из типичной изолированной колонии на среде Эндо (Левина) производят высев в пробирку с бульоном на индол (п.6.2.2.4). Пробирки выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч.
После выдерживания в термостате в пробирки с индольной средой добавляют 5-10 капель реактива Эрлиха (п.6.2.2.14). Появление темно-красного окрашивания в поверхностном слое свидетельствует об образовании индола.
7.3.5.4. Реакция Фогес-Проскауэра
7.3.5.5. Реакция с метиловым красным
В пробирки с оставшейся культурой в среде Кларка добавляют по 5 капель реактива метилового красного (п.6.2.2.7) в каждую пробирку. Четкое малиново-красное окрашивание указывает на положительную реакцию.
7.3.5.6. Утилизация цитратов
Производят пересев из типичных колоний со среды Эндо или Левина на чашки Петри с подсушенной средой Симмонса (или в пробирки со средой Козера (п.п.6.2.2.15, 6.2.2.16). Посевы выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С от 24 до 48 ч. При учете результатов обращают внимание на наличие роста и изменение окраски среды.
Наличие роста и изменение цвета среды с зеленого в синий или желтый характерно для цитрат-положительных культур.
Для цитрат-отрицательных разновидностей характерно отсутствие роста и изменения цвета среды.
7.3.6. Оценка результатов идентификации
Таблица 11
Классификация колиформных бактерий по ИМАЦ-тестам
Образование индола | Реакция с метиловым красным | Реакция Фогес-Проскауэра | Утилизация цитратов | Тип бактерий |
+ | + | - | - | Типичные Е. coli |
- | + | - | - | Атипичные Е. coli |
- | - | + | + | Типичные А. aerogenеs |
+ | - | + | + | Атипичные A. aerogenes |
+ | + | - | + | Типичные Citrobacter |
- | + | - | + | Атипичные Citrobacter |
При выделении из продукта грамотрицательных неспорообразующих палочек, продуцирующих газ из лактозы при (44±1) °С, образующих и не образующих индол, дающих положительную реакцию с метиловым красным, отрицательную Фогес-Проскауэра и не растущих на среде Симмонса (Козера) считают, что в 10 г продукта содержатся эшерихии коли. Продукт в данном случае бракуется.
При обнаружении в 10 г продукта бактерий родов Enterobacter и Citrobacter, но при отсутствии колиформных бактерий (БГКП) в 1 г, продукт браковке не подлежит. Однако микробиолог предприятия должен усилить контроль за соблюдением санитарно-гигиенических правил на предприятии и обратить внимание на необходимость дополнительного контроля технологических режимов при изготовлении продукта.
7.4. Определение сальмонелл
Сальмонеллы - обширный род семейства энтеробактерий, включающий более 2000 серотипов, большинство которых обладает патогенными свойствами. К сальмонеллам относятся аэробные и факультативно-анаэробные грамотрицательные подвижные палочки, хорошо растущие на обычных питательных средах и разнообразных пищевых субстратах.
7.4.1. Сущность метода
Метод основан на использовании сред обогащения для увеличения роста сальмонелл, их выделения на специальных агаровых средах, с последующим проведением серологической реакции.
7.4.2. Аппаратура, материалы, реактивы
Аппаратура, материалы, реактивы - согласно п.4.
7.4.3. Подготовка к анализу
7.4.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют, как указано в п.5.1 и 5.2. Посуду и материалы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.4.4. Проведение анализа
Для посева используют то количество продукта, в котором регламентируется отсутствие бактерий рода сальмонелла соответствующими пунктами таблиц 1-9.
Посев продуктов производится с предварительной инкубацией в фосфатном буферном растворе.
Компоненты детских сухих молочных продуктов засевают без предварительной инкубации непосредственно в колбы со средой для селективного обогащения. В случае выявления бактерий рода сальмонелла в готовых сухих молочных продуктах компоненты, входящие в их состав, повторно исследуются на наличие сальмонелл с предварительной инкубацией продукта по п.7.4.4.1.
7.4.4.1. Посев с предварительной инкубацией
Взвешивают в стерильных условиях в стакане продукт в количествах, предусмотренных в табл.NN 1-9, и затем для предварительного обогащения навеску асептически переносят в колбу с разбавленным фосфатным буфером (п.6.1.2). Соблюдают соотношение массы продукта и буферного раствора 1:10. Проверяют рН с помощью индикаторной бумаги и доводят активную кислотность смеси до (7,0±0,2) ед рН, 1Н раствором гидроокиси натрия.
7.4.4.2. Прямой посев в среды для селективного обогащения
Асептически взвешенные навески сухих компонентов, стерильно отмеренные объемы жидких компонентов в количествах, предусмотренных соответствующими графами табл.9, засевают в колбы с магниевой средой или средой Мюллера, соблюдая соотношение продукта и среды не менее 1:9.
Для жидких продуктов допускается использование среды с двойной концентрацией ингредиентов при соотношении продукта и среды 1:1.
Колбы с посевами помещают в термостат с температурой (37±1) °С от 18 до 24 ч.
7.4.4.3. После инкубации в термостате производят высев из колб и пробирок с магниевой средой или средой Мюллера на поверхность подсушенных чашек с дифференциально-диагностическими средами Плоскирева и висмут-сульфитного агара. Для получения отдельных колоний петлей берут минимальное количество посевного материала и производят посев штрихом. Чашки с посевами помещают в термостат с температурой (37±1) °С от 24 до 48 ч. Проверку посевов осуществляют дважды: через 24 и 48 ч после инкубации в термостате.
7.4.5. Обработка результатов
7.4.5.1. На среде Плоскирева колонии сальмонелл бесцветные, прозрачные, плоские, на висмут-сульфитном агаре - черные, с характерным металлическим блеском, зеленоватые с темным ободком, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией.
При отсутствии типичных колоний сальмонелл на каждой из сред конечный результат анализа записывают как "отрицательный", т.е. в исследуемой массе продукта сальмонеллы отсутствуют.
При наличии на любой из питательных сред на чашках Петри типичных или подозрительных колоний на сальмонеллы, производят их дальнейшее изучение.
7.4.5.2. Из каждой среды на чашке Петри, содержащей подозреваемую колонию сальмонелл*, выбирают хорошо изолированную колонию и высевают штрихом и уколом на трехсахарный агар с мочевиной (п.6.2.3.7) или среду Клиглера (п.6.2.3.10). Пробирки с посевами выдерживают в термостате при (37±1) °C в течение (24±1) ч. Производят идентификацию культур, высеянных на среду Клиглера или трехсахарный агар с мочевиной по ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы и расщеплению мочевины.
_______________
* При наличии смешанного роста необходимо сделать пересев на питательный агар для получения изолированных колоний.
Покраснение или пожелтение (в зависимости от добавленного индикатора) скошенной части столбика среды указывает на образование кислоты в результате ферментации лактозы, сахарозы или обоих сахаров. Покраснение самого столбика указывает на расщепление глюкозы. Восстановление цвета среды до исходного (бледно-розовый) свидетельствует о расщеплении мочевины.
Механизм действия среды Клиглера идентичен с трехсахарным агаром. Об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике. Если культуры сбраживают лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, они не принадлежат к бактериям рода сальмонелла.
Культуры, не ферментирующие лактозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием или без образования газа), подвергаются дальнейшему изучению.
Культуры, ферментирующие глюкозу без образования газа, подозрительны как брюшнотифозные или дизентерийные.
Культуры, ферментирующие глюкозу с образованием газа, дающие в среде пузырьки и продуцирующие сероводород, могут принадлежать к роду сальмонелла.
Если ни в одной из пробирок не обнаружено ни одной характерной для сальмонелл реакции, то результат считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в исследуемой массе продукта бактерий рода сальмонелл.
7.4.5.3. Определение образования ацетилметилкарбинола проводят по п.7.3.5.4. Бактерии рода Salmonella не образуют ацетилметилкарбинола (реакция Фогес-Проскауэра отрицательная).
7.4.5.4. Если обе пробирки покажут типичную для сальмонелл окраску сред, а выделенный штамм дает отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра, проводят серологическое исследование. Для этой цели берут петлей небольшое количество культуры из пробирок с трехсахарным агаром или средой Клиглера, эмульгируют в капле физиологического раствора на предметном стекле. Добавляют каплю сальмонеллезной 0-сыворотки (п.6.2.3.11) к раствору и осторожно покачивают предметное стекло, чтобы смешать жидкости.
Положительная реакция на сальмонеллы (агглютинация) наблюдается в течение 30-60 сек. Обязательна постановка отрицательной реакции (культура + физиологический раствор). Если при проведении серологического исследования агглютинации не обнаруживается, конечный результат записывают как "отрицательный".
Любая агглютинация, которая появляется на стекле, говорит о вероятности присутствия сальмонелл.
7.4.5.5. При выделении культур грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующих лактозу и сахарозу, образующих или не образующих сероводород, дающих отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра и обладающих четкой серологической характеристикой, считают, что в исследуемой навеске продукта присутствуют бактерии рода сальмонелла. Продукт к реализации не допускается. Проводится тщательная санитарная обработка всей технологической линии, а при необходимости - контроль всех исходных компонентов продукта.
7.5. Определение коагулазоположительных стафилококков (S. aureus)
S. aureus - аэробные грамположительные сферические пигментообразующие микроорганизмы, обладающие ферментом коагулазой, большая часть из которых способна продуцировать энтеротоксины.
7.5.1. Сущность метода
Метод основан на способности микроорганизмов из рода Staphylococcus расти на питательных средах с повышенным содержанием поваренной соли. Наибольшее санитарно-гигиеническое значение имеет Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), принадлежность к которому, в основном, определяется по способности коагулировать цитратную плазму крови человека или кролика.
7.5.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - согласно п.4.
7.5.3. Подготовка к анализу
7.5.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений осуществляют, как указано в п.п.5.1; 5.2.
Посуду и материалы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.5.4. Проведение анализа
При исследовании продуктов, употребляемых без предварительной термической обработки после восстановления (см. табл.1), навеска продукта должна составлять 10 г; для продуктов, употребляемых с предварительной термической обработкой и компонентов - 1 г (см. табл.1-9). Сухие молочные продукты типа "Детолакт", "Новолакт ММ", "Новолакт-1" и т.п., восстанавливаемые перед употреблением при (37±1) °С и (70±1) °С, подвергаются предварительной инкубации в фосфатном буферном растворе перед посевом.
Остальные продукты и компоненты, предусмотренные в табл.1-9, засевают без предварительной инкубации непосредственно в питательную среду.
В случае выявления S. aureus в готовых сухих молочных продуктах компоненты, входящие в их состав, исследуются на наличие S. aureus с предварительной инкубацией.
7.5.4.2. Через (24±1) ч производят пересев петлей из бульона для получения изолированных колоний на чашки Петри с подсушенными средами типа Байрд-Паркер (п.6.2.4.3) или ЖСА (желточно-солевой агар) (п.6.2.4.4). Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (37±1) °С от 18 до 48 ч.
S. aureus на среде Байрд-Паркера растут в виде черных, блестящих, выпуклых колоний в диаметре 1-1,5 мм, окруженных зоной просветления среды, шириной 1-3 мм. Около 90% S. aureus, выделенных из пищевых продуктов, и штаммы, образующие энтеротоксин, на агаре типа Байрд-Паркер дают зоны просветления через (24±1) ч инкубации при (37±1) °С. Эти колонии не требуют подтверждения в принадлежности к S. aureus и подлежат учету через (24±1) ч инкубации.
На ЖСА колонии стафилококков имеют форму выпуклых дисков диаметром 2-4 мм, белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуется радужное кольцо и зона помутнения среды.
Из характерных колоний, подозрительных на стафилококки, готовят мазки-препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют. Колонии грамположительных мелких кокков, расположенных в мазке гроздьевидно, отсеивают на сектора чашки Петри или в пробирки со скошенным мясо-пептонным агаром (п.6.1.12), посевы выдерживают в термостате при (37±1) °С от 18 до 24 ч. Из культур, выросших на МПА, после предварительной проверки мазка на чистоту под микроскопом ставят реакцию плазмокоагуляции.
7.5.4.3. Постановка реакции плазмокоагуляции.
Пробирки на свертывание плазмы следует просматривать осторожно, чтобы не разрушить начало образования сгустка.
При учете реакции плазмокоагуляции могут наблюдаться три степени активности фермента коагулазы:
+ + + + - сгусток плотный;
+ + + - сгусток, имеющий небольшой отсек;
+ + - сгусток в виде взвешенного мешочка.
Все три варианта являются положительным результатом.
7.5.5. Обработка результатов
Примечание.
При обнаружении значительного роста коагулазоотрицательных стафилококков в готовых детских сухих молочных смесях, микробиолог должен обратить внимание на санитарно-гигиеническое содержание предприятия, т.к. у детей грудного возраста некоторые варианты коагулазоотрицательных стафилококков (S. epidermidis) также способны вызывать острые стафилококковые энтериты.
7.6. Определение энтерококков
Определение энтерококков проводят в случае обнаружения в выработанной партии значительного превышения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в целях выяснения причин несоответствия изготовленного продукта этому нормативу.
7.6.1. Сущность метода
Метод основан на количественном подсчете колоний энтерококков, вырастающих на плотных питательных средах, в состав которых входят ингибиторы (кристаллический фиолетовый, трифенилтетразолий хлористый, антибиотики: пенициллин, стрептомицин, полимиксин), подавляющие развитие других бактерий.
7.6.2. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы
Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы - согласно п.4.
7.6.3. Подготовка к анализу
Подготовку проб и приготовление разведений проводят, как указано в п.5.1 и 5.2.
Посуду и материалы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.6.4. Проведение анализа
7.6.4.1. Посев.
7.6.4.2. Обработка результатов.
Идентификация культур.
Три-пять колоний отсеивают на скошенный мясо-пептонный агар для дальнейшей идентификации. На скошенном агаре посевы культивируют при (37±1) °С в течение (24±1) ч.
Из колоний, выросших на скошенном агаре, готовят мазки и окрашивают по Граму. Определяют каталазную активность культуры: на чистое обезжиренное стекло наносят каплю 1%-ного водного раствора перекиси водорода (п.6.2.9.2) и в ней растирают петлю культуры. Если пузырьки газа не выделяются, значит реакция отрицательная. Кроме того, изучаемые культуры засевают в бульоны, содержащие 40% желчи (п.6.2.9.3) и имеющие активную кислотность 9,6 ед рН (п.6.2.9.4). Инкубируют посевы при (37±1) °С от 18 до 24 ч. Рост изучаемых культур в указанных бульонных средах подтверждают микроскопией мазка, окрашенного по Граму.
Энтерококки - грамположительные кокки, в мазках из жидких сред располагаются в виде коротких или длинных цепочек, с плотных - в виде диплококков или скоплений кокков; растут в бульонах с 40% желчи и при активной кислотности (9,9±0,3) ед рН, не разлагают перекись водорода, так как не вырабатывают фермент каталазу.
Обнаружение значительного роста энтерококков при посеве исследуемого материала свидетельствует о необходимости контроля за термическим режимом технологического процесса или проведения санитарной обработки оборудования и технологических линий.
7.7. Определение В. cereus*
_______________
* Допускается использование рекомендуемых в ГОСТе 10444.8-88 "Продукты пищевые. Метод определения B. cereus" селективных сред и тестов идентификации.
В. cеrеus - аэробные спорообразующие грамположительные палочки, часть штаммов способна продуцировать энтеротоксин.
7.7.1. Сущность метода
Метод основан на количественном подсчете B.cerеus, относящихся к спорообразующим аэробным бациллам, при росте их на плотных питательных средах с антибиотиком и яичным желтком.
7.7.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - согласно п.4.
7.7.3. Проведение анализа
7.7.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений проводят, как указано в п.5.1 и 5.2.
Посуду, материалы и реактивы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.7.3.2. Посев
Посевы инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С от 24 до 96 ч.
7.7.3.3. Обработка результатов
При отсутствии роста на обеих чашках дают заключение о соответствии детской сухой молочной смеси нормативу на этот показатель. При обнаружении роста изучают морфологию колоний: штаммы В. cereus на солевом полимиксиновом агаре с 2,3,5-трифенилтетраводном хлористым образуют ярко-рубиновые колонии на фоне широкой зоны глубокого равномерного коагулята, колонии в первые часы округлые, выпуклые; в дальнейшем (через 24-48 ч) - распластанные по поверхности агара с изрезанными краями. На среде Донована штаммы B.cereus образуют крупные белые распластанные колонии со слегка изрезанными краями, окруженные широкой зоной глубокого белого равномерного матового коагулята или двойной зоной - коагулята и просветления (лецитиназная активность).
Из типичных колоний готовят мазки и окрашивают по Граму.
В. cеreus - грамположительные споровые палочки, в некоторых культурах - грамотрицательные.
7.7.3.4. Идентификация культур
Пересеивают 3-5 колоний на скошенный агар с последующей инкубацией при температуре (30±1) °С от 18 до 24 ч.
Проводят микроскопию висячей и раздавленной капли для установления подвижности и посев на среду с маннитом (п.6.2.5.5) и на кровяной агар (п.6.2.5.4). Инкубацию посевов проводят при (30±1) °С от 24 до 48 ч. Культуру также пересевают в пробирки со средой Кларка (п.6.2.2.5), которую инкубируют при температуре (30±1) °С в течение (48±1) ч, для последующей постановки реакции Фогес-Проскауэра.
Постановка реакции Фогес-Проскауэра описана в п.7.3.5.4.
Характерными признаками для В. cereus являются образование зон просветления на кровяном агаре (гемолитическая активность), положительные реакции на лецитиназу и Фогес-Проскауэра, подвижность и отсутствие способности сбраживать маннит.
7.7.3.6. В продуктах, выработанных с соблюдением технологических правил, при посеве 0,01 г рост В. cereus должен отсутствовать, что соответствует показателю на этот микроорганизм - "менее 100 клеток/г".
При обнаружении роста микробиолог в заключении указывает подсчитанное количество В. cereus в 1 г продукта.
При несоответствии нормативу только по В. cеreus в сухих молочных продуктах типа "Детолакт" (в отдельных случаях от 100 до 200 КОЕ/г), партия однократно не задерживается для реализации. В таких случаях микробиолог проводит исследования на наличие B. cereus в компонентах растительного и животного происхождения и в случае обнаружения в них значительных количеств В. cereus дает рекомендации о возможности и путях использования их в производстве.
Аналогично поступают при обнаружении от 200 до 400 КОЕ/г В. cereus в сухих молочных продуктах типа "Малыш", подвергающихся термической обработке перед употреблением.
7.8. Определение количества дрожжей и плесневых грибов
7.8.1. Сущность метода
Метод основан на количественном подсчете числа колоний дрожжей и плесневых грибов, вырастающих на плотных питательных средах с антибиотиками при температуре (24±1) °С в течение 5 суток при посеве исследуемых продуктов.
7.8.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - согласно п.4.
7.8.3. Проведение анализа
7.8.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений для посева проводят согласно п.5.1 и 5.2.
Посуду, материалы и реактивы стерилизуют, как указано в п.5.3.
7.8.3.2. Посев.
_______________
* К средам добавляются антибиотики согласно п.6.2.6.6.
Чашки с посевами выдерживают в термостате при температуре (24±1) °С в течение 120 ч (5 суток) с предварительным учетом через 3 суток.
Контроль стерильности питательных сред и воздуха проводят, как указано в п.6.2.10.2.
Количество колоний дрожжей и плесневых грибов подсчитывают раздельно на каждой чашке. Колонии дрожжей в указанных средах имеют беловато-желтый цвет, сметанообразную консистенцию, по мере роста и увеличения размеров приобретают перламутровый оттенок и куполообразное возвышение.
Если в посевах на агаризованных средах присутствуют мукоровые, очень быстро растущие грибы, то снятие предварительных результатов необходимо проводить очень осторожно, не допуская того, чтобы споры этих грибов осыпались и дали рост вторичных колоний. Через 5 суток проводят окончательный учет результатов термостатирования посевов. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.
Типичные колонии плесневых грибов с поверхности покрыты пушистым мицелием, часто напоминающим вату. Окраска варьирует.
Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем.
Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
При необходимости для разделения колоний дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из отдельных колоний готовят препараты методом раздавленной капли. На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды. Затем в эту каплю прокаленной иглой вносится часть колонии. Полученная суспензия покрывается покровным стеклом.
Результаты микроскопирования оценивают пользуясь характеристикой дрожжей и плесневых грибов, указанной в табл.12.
Таблица 12
Характеристика дрожжей и плесневых грибов
Группа микроорганизмов | Характеристика |
Дрожжи | Одноклеточные микроорганизмы, клетки круглой, овальной или продолговатой формы, длиной от 2,5 до 30 мкм и шириной от 2,5 до 10 мкм, часто почкующиеся |
Плесневые грибы | Состоят из нитей-гифов, без перегородок или септированных на клетки. Гифы образуют боковые выросты и разветвления, от вегетативных гифов поднимаются гифы, несущие плодовые тела |
7.8.3.3. Обработка результатов.
Если при испытании продукта на питательных средах обнаружен рост дрожжей и плесневых грибов и их присутствие подтверждено микроскопированием, то дают заключение о присутствии этих микроорганизмов в продукте.
Результаты обрабатывают и пересчитывают отдельно для дрожжей и плесневых грибов.
где
За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое, полученное по всем чашкам.
7.8.3.4. При обнаружении в 1 г исследуемого продукта количеств дрожжевых и плесневых грибов, превышающих установленные нормативы по этим показателям, партия готового продукта к реализации задерживается для повторного расширенного микробиологического контроля. Отбирают удвоенное количество образцов готовых детских сухих молочных смесей с проведением посева на все микробиологические показатели, указанные в табл.1 Методических указаний. Одновременно производят внеочередной контроль (на содержание дрожжевых и плесневых грибов) по ходу технологического процесса.
7.9. Определение ацидофильных бактерий
7.9.1. Сущность метода
Определение содержания ацидофильных бактерий в продукте проводят методом предельных разведений.
Метод основан на способности молочно-кислых палочек расти в молоке при температуре 37-38 °С и образовывать сгусток.
7.9.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - согласно п.4.
7.9.3. Подготовка к анализу
7.9.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений проводят, как указано в п.5.1 и 5.2.
Подготовку посуды и материалов производят, как указано в п.5.3.
7.9.4. Проведение исследований
7.9.4.1. Из первого разведения исследуемого продукта, приготовленного по п.4.2, готовят последующие - 1:100, 1:1000 и т.д., примерно до 10-го разведения с таким расчетом, чтобы последние из них не содержали ацидофильных палочек.
7.9.5. Инкубация
Посевы выдерживают в термостате при температуре (38±1) °С 3-5 дней. В течение этого времени во всех пробирках, в которых содержатся ацидофильные бактерии, молоко должно свернуться. Из трех последних разведений со свернувшимся обезжиренным молоком готовят микроскопические препараты.
Если при микроскопировании видны палочки, то делается вывод, что образование сгустка произошло за счет ацидофильных палочек, после чего учитывается результат.
7.9.6. Обработка результатов
Для подсчета количества ацидофильных бактерий пользуются табл.13.
Таблица 13
Числовая характеристика | Наиболее вероятное число микробов при заражении 2-х параллельных пробирок | Числовая характеристика | Наиболее вероятное число микробов при заражении 2-х параллельных пробирок |
1 | 2 | 3 | 4 |
001 | 0,5 | 120 | 2,0 |
002 | - | 121 | 3,0 |
010 | 0,5 | 122 | - |
011 | 0,9 | 200 | 2,5 |
012 | - | 201 | 5,0 |
020 | 0,9 | 202 | - |
021 | - | 210 | 6,0 |
022 | - | 211 | 13,0 |
101 | 1,2 | 212 | 20,0 |
102 | - | 220 | 25,0 |
110 | 1,3 | 221 | 70,0 |
111 | 2,0 | 222 | 110,0 |
112 | - |
|
|
Составляют числовую характеристику, состоящую из трех цифр, указывающих число пробирок со свернувшимся молоком в трех последних разведениях. Первая цифра числовой характеристики соответствует тому разведению, при котором во всех пробирках молоко свернулось. Следующие две цифры обозначают число пробирок со свернувшимся молоком из двух последующих разведений.
По числовой характеристике находят в таблице наиболее вероятное число микробов, которое умножают на то разведение, с которого начиналась первая цифра числовой характеристики.
7.9.7. Определение количества ацидофильных палочек на твердой питательной среде
7.9.7.2. На питательной среде колонии молочно-кислых палочек могут быть поверхностные и глубинные. При поверхностном росте колонии более крупные, локонообразные, светлые или зернистые с темным центром. Глубинные колонии - более темные, желтовато-бурые, в виде кусочков ваты ("паучки").
Из изолированных колоний, выросших в последнем разведении и характерных для молочно-кислых бактерий, делают препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Приготовление, окрашивание и микроскопирование препарата проводят по п.7.11.
Клетки молочно-кислых бактерий имеют палочковидную форму, одиночные, часто с выраженными зернами внутри; молодые клетки могут быть темноокрашенные, одиночные или иметь вид цепочек.
7.10. Определение количества бифидобактерий
7.10.1. Сущность метода
Метод основан на способности бифидобактерий расти в питательных средах, разлитых высоким столбиком в пробирках, при температуре (37±1) °С и образовывать в них через 24-72 часа гвоздикообразные характерные колонии.
7.10.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - согласно п.4.
7.10.3. Подготовка к анализу
7.10.3.1. Подготовку проб и приготовление разведений проводят, как указано в п.5.1 и 5.2 с условием обязательной предварительной регенерации (прогревание) буферного раствора, применяемого для разведения продукта, в кипящей водяной бане при 100 °С в течение 20 минут с последующим охлаждением до температуры (45±2) °С.
Подготовку посуды и материалов производят, как указано в п.5.3.
7.10.4. Проведение исследований
7.10.4.1. Из первого разведения исследуемого продукта, приготовленного по п.5.2, готовят последующие - 1:100, 1:1000 и т.д., примерно до 10-го разведения с таким расчетом, чтобы последние из них не содержали бифидобактерий.
Перемешивание продукта производят способом, исключающим попадание пузырьков воздуха. Перемешивание пипеткой путем вдувания и выдувания воздуха не допускается.
7.10.4.2. Перед употреблением кукурузно-лактозную или гидролизатно-молочную среды (п.п.6.2.7.3, 6.2.7.2) следует разогреть в кипящей водяной бане до полного расплавления агара и выдержать при этой температуре не менее 20 минут. Перед посевом среды тотчас следует остудить до температуры (45±2) °С погружением в холодную воду.
При определении бифидобактерий в смешанных с молочно-кислыми бактериями культурах перед расплавлением в среду вносят стерильный раствор неомицина (п.6.2.7.5).
7.10.5. Инкубация
Посевы выдерживают в термостате с температурой (38±1) °С в течение (72±1) ч. В случае определения бифидобактерий в смешанных с молочно-кислыми бактериями культурах - от 3 до 5 суток. Допускается предварительный учет через (48±1) ч с последующим окончательным учетом через (72±1) ч.
7.10.6. Обработка результатов
7.10.6.1. На питательных средах бифидобактерии в последних разведениях образуют изолированные светло-коричневые колонии в виде крупинок, гречишного зерна или дисков, иногда кометообразные, гвоздикообразные.
7.10.6.2. Из изолированных колоний, выросших в последнем разведении и характерных для бифидобактерий, делают препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют.
Приготовление, окрашивание и микроскопирование препарата проводят по п.7.11.
Клетки бифидобактерий представляют собой грамположительные, слегка изогнутые палочки с раздвоением или утолщением на одном-двух концах, располагаются в мазке группами или поодиночке, в виде китайских иероглифов, могут образовывать короткие цепочки.
Для определения истинного количества бифидобактерий в среде с неомицином результат следует удвоить.
7.11. Метод микроскопирования
7.11.1. Сущность метода
Метод основан на просмотре окрашенных препаратов под микроскопом для ориентировочной характеристики микрофлоры молочных продуктов.
7.11.2. Проведение анализа
7.11.3. Ориентировочный состав микрофлоры
Ориентировочный состав микрофлоры исследуемых продуктов представлен в табл.14.
Таблица 14
Наименование продуктов | Ориентировочный состав микрофлоры |
Смесь ацидофильная ’’Малютка". | Молочно-кислые палочки |
"Бифидомикс" | Бифидобактерии, молочно-кислые палочки и стрептококки |
"Биолакт" адаптированный | Молочно-кислые палочки |
"Биолакт" адаптиропанный с лизоцимом | Молочно-кислые палочки |
Смесь молочная "Крошечка" | Молочно-кислые палочки |
Продукт жидкий "Кисло-молочный" | Молочно-кислые палочки, бифидобактерии |
Продукт жидкий кисло-молочный "Ацидомил" | Молочно-кислые палочки и стрептококки |
Продукт жидкий кисло-молочный "Бифимил" | Бифидобактерии, молочно-кислые стрептококки |
Кефир детский | Молочно-кислые стрептококки и палочки, единичные дрожжи |
"Дюймовочка-1" | Молочно-кислые стрептококки |
"Дюймовочка-2" | Молочно-кислые палочки, бифидобактерии |
"Дюймовочка-3" | Молочно-кислые стрептококки, бифидобактерии |
Напиток "Детский" | Молочно-кислые стрептококки и палочки |
Пастолакт | Молочно-кислые палочки |
Творог "Детский" | Молочно-кислые стрептококки |
Творог ДМ | Молочно-кислые стрептококки |
7.12. Метод определения промышленной стерильности питьевых молока и сливок
7.12.1. Сущность метода
Метод основан на способности микроорганизмов, выдержавших стерилизацию, размножаться в стерилизованном молоке при оптимальных режимах термостатирования и вызывать в нем органолептические и физико-химические изменения.
7.12.2. Проведение анализа для питьевых стерилизованных молока и сливок
Отобранные упаковки со стерилизованным молоком выдерживают при температуре (37±1) °С в течение 3 суток, а сливками - в течение 5 суток.
Образцы молока, выработанного двухступенчатым способом, кроме того выдерживают при температуре (55±1) °С в течение 5 суток.
По истечении срока термостатной выдержки образцы с продуктом подвергают внешнему осмотру. При наличии вздутия упаковки или изменении внешнего вида молока в бутылках (наличия сгустка, отстоя сыворотки, наличия хлопьев молока и др.) упаковки считают не отвечающими требованиям промышленной стерильности и отмечают в книге анализов.
Упаковки без внешних дефектов вскрывают, стерилизованное молоко или сливки анализируют органолептически. Продукт отвечает требованиям промышленной стерильности, если не установлено изменений консистенции и вкуса продукта.
7.12.3. Обработка результатов
7.13. Определение сульфитредуцирующих клостридий
Определение сульфитредуцирующих клостридий проводят по ГОСТу 29185-91 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий".
8. Общие требования к проведению микробиологического контроля
8.1. В продуктах детского питания и компонентах нормируются общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, плесневые грибы, дрожжи и В. cerеus в 1 г продукта и их содержание выражается количеством колониеобразующих единиц - КОЕ/г. Другие группы микроорганизмов - бактерии группы кишечных палочек (колиформы), Е. coli, коагулазоположительные стафилококки (S.aureus), патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, не допускаются в определенной массе продукта (приложение).
Методы анализа для выявлений всех описываемых групп микроорганизмов усовершенствованы и приведены в соответствие с рекомендациями ФАО/ВОЗ, а также модифицированы с учетом возможностей их выполнения в бактериологических лабораториях Центров госсанэпиднадзора и производственных лабораториях.
Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) не определяют в продуктах, содержащих специфическую микрофлору, поскольку подсчет бактерий в таких случаях не может быть показательным. Контроль специфической микрофлоры кисло-молочных продуктов осуществляется в соответствии с методами, изложенными в п.п.7.9; 7.10; 7.11.
Анализ продуктов детского питания на промышленную стерильность проводят в соответствии с методом, изложенным в п.7.12. При анализе стерилизованных продуктов посев производят без разведений и учитывают все выросшие на чашке колонии.
При исследовании продуктов на зерновой основе на результатах анализов по выявлению бактерий группы кишечных палочек может отразиться присутствие в зерновых сапрофитных микроорганизмов, относящихся к роду Erwinia; поэтому в разделе 7.2 приведено описание способов их дифференциации от бактерий группы кишечных палочек.
8.2. В последние годы во всех развитых странах мира и в нашей стране созданы предприятия и цехи многопрофильного плана (типа АООТ "Лианозовский молочный комбинат"). На этих предприятиях молочной промышленности (цехах), оснащенных современным высокопроизводительным оборудованием и автоматизированными линиями, допускается изготовление продуктов питания для детей различных возрастных групп и взрослых: адаптированные смеси, продукты прикорма на молочной и безмолочной основах со злаковыми, овощными и фруктовыми наполнителями, различные виды каш, пудингов, десертов, соков, кисло-молочных и пастообразных продуктов и др.
Стерилизованные продукты, вырабатываемые многопрофильными комбинатами и цехами ("Бэби-Милк", "Молочко" и др.), должны соответствовать требованиям промышленной стерильности, а кисло-молочные продукты ("Бифидомикс", "Кисло-молочный" и др.) - иметь более длительные сроки хранения.
8.3. При инспекционном контроле готовых детских молочных продуктов лаборатории Центров санитарно-эпидемиологического надзора осуществляют исследования на все виды микроорганизмов в соответствии с табл.1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 (см. приложение). В том случае, если один или несколько показателей превышают нормы, приведенные в указанных таблицах, производится микробиологический контроль ингредиентов в соответствии с табл.9.
В производственных лабораториях комбинатов, производящих продукты, употребляемые без термической обработки ("Детолакт", "Новолакт-1", "Алеся"), а также комбинатов и цехов многопрофильного плана, выпускающих стерилизованные продукты ("Бэби-Милк", "Молочко", "Стерилизованное витаминизированное молоко", сливки и др.), контролируют каждую партию продукта по всем показателям, предусмотренным настоящими Методическими указаниями.
В производственных лабораториях комбинатов, изготавливающих продукты типа "Малютка", "Малыш", молочные каши, употребляемые после термической обработки, контролируют каждую партию готового продукта и компонентов на содержание мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, бактерий группы кишечных палочек, плесневых грибов и дрожжей. Контроль на содержание коагулазоположительных стафилококков и В. cereus в сухих готовых продуктах, их компонентах, жидких и пастообразных продуктах проводят периодически, не реже одного раза в месяц.
Контроль сырья, компонентов и готовой продукции на отсутствие патогенных микроорганизмов, в том числе сальмонелл, проводят в производственных или других, аккредитованных для проведения этих анализов лабораториях, а также в лабораториях Центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора.
При обнаружении повышенного содержания мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в детских молочных продуктах следует также определять количественное содержание энтерококков в данных продуктах.
Повышенное содержание мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий), эшерихий коли, коагулазоположительных стафилококков свидетельствует либо о несоблюдении температурного режима на производстве, либо о повышенной бактериальной обсемененности исходных компонентов, либо о неудовлетворительном санитарном состоянии оборудования.
Запрещается выпуск в реализацию готовой продукции, в которой обнаружены патогенные микроорганизмы в массе продукта, указанной в соответствующих таблицах приложения.
При наличии отклонений готовой продукции от установленных нормативов в сторону ухудшения, осуществляют контроль компонентов на все виды микроорганизмов, указанных в таблице 9, а также отбирают удвоенное количество упаковок от каждой исследуемой партии, производят анализ продуктов из каждой упаковки отдельно и полученные результаты распространяют на всю партию. Кроме того, в этом случае проводится контроль санитарно-гигиенического состояния производства по ходу технологического процесса с последующим назначением санитарных дней и др. санитарно-гигиенических мероприятий.
При несоответствии качества компонентов требованиям микробиологических нормативов (таблица 9) использование их в производстве запрещается.
8.4. Контроль поступающего сырья, компонентов, продуктов детского питания, а также контроль технологических процессов и санитарно-гигиенических условий производства должен осуществляться лабораториями предприятий в соответствии с настоящими Методическими указаниями и с действующими "Инструкцией по микробиологическому контролю на молочно-консервных комбинатах детских продуктов", утвержденной Госагропромом СССР 21.12.89 и "Инструкцией по микробиологическому контролю производства жидких и пастообразных продуктов детского питания", утвержденной Госагропромом СССР 26.12.92.
Анализ продуктов детского питания на промышленную стерильность проводят в соответствии с методом, изложенным в п.7.12, а также по "Инструкции о порядке санитарно-технического контроля консервов на производственных предприятиях, оптовых базах, в розничной торговле и на предприятиях общественного питания", утвержденной Госкомсанэпиднадзором России 21.07.92 N 01-19/9-11.
Инспекционный контроль за микробиологическим качеством продуктов детского и лечебного питания Центры госсанэпиднадзора осуществляют не реже одного раза в месяц по методам, изложенным в настоящих Методических указаниях. Контроль за санитарно-гигиеническим состоянием предприятий и цехов, вырабатывающих продукты детского и лечебного питания на соответствие требованиям действующих санитарных правил и норм, должен проводиться Центрами госсанэпиднадзора также не реже одного раза в месяц. Взятие смывов и определение отсутствия в них БГКП (колиформных бактерий), S.aureus и бактерий рода Salmonella (особенно в цехах, производящих жидкие и пастообразные продукты) следует проводить по "Инструкции по порядку и периодичности контроля за содержанием микробиологических и химических загрязнителей в молоке и молочных продуктах на предприятиях молочной промышленности", утвержденной Минсельхозпродом России 29.12.95.
Приложение
Микробиологические нормативы на сухие, жидкие и пастообразные продукты детского питания на молочной, молочно-зерновой и безмолочной основах и компоненты, входящие в их состав
Микробиологические нормативы на продукты детского питания, приведенные в таблицах 1-9, соответствуют "Гигиеническим требованиям к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов"*, утвержденным Госкомсанэпиднадзором России 24 октября 1996 г.
Настоящими микробиологическими нормативами предусмотрен широкий спектр контролируемых микроорганизмов как в готовых детских молочных продуктах на молочной, молочно-зерновой и безмолочной основах, так и в исходных компонентах этих продуктов.
Следует отметить, что к продуктам детского и лечебного питания предъявляются более высокие микробиологические требования, чем к продуктам массового потребления, соответственно, и к пищевому сырью и компонентам, используемым для изготовления продуктов детского питания, установлены повышенные микробиологические требования.
При этом учитываются, в первую очередь, 3 фактора: 1) состояние здоровья ребенка (рожденные преждевременно или в срок, больные или здоровые и т.п.); 2) возраст ребенка, с которого он получает тот или иной продукт (с первых дней жизни, с 2-3-х месяцев, после 5-6 месяцев и т.д.) и 3) способ термической обработки, применяемой при приготовлении смесей для кормления ребенка (растворение в воде при температуре 37-40 °С или при 70-85 °С, подогревание растворенной смеси до кипения, или кипячение в течение 5 мин).
Таблица 1
Микробиологические нормативы для сухих молочных продуктов
|
|
|
| Масса продукта (г), в которой не допускаются |
|
|
| |||
Наименование продукта | Возраст детей | Обра- ботка перед употреб- лением
| Коли- чество мезо- фильных аэробных и факуль- тативно- анаэро- бных микро- орга- низмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- форм- ные бакте- рии) | Е. coli | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aureus | B. cereus, КОЕ/г, не более
| Плес- невые грибы, KOЕ/г, не более
| Дрож- жи КОЕ/г, не более
|
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
1.1. Продукты сухие молочные
| ||||||||||
1.1.1. "Детолакт" | С первых дней жизни до 1 года | Восста- новле- ние при 37 °С | 2000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.2. "Детолакт, обогащенный препаратом железа" | -"- | -"- | 2000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.3. "Аистенок" | С первых дней жизни до 1 мес. | -"- | 3000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.4. "Алеся" | -"- | -"- | 3000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.5. "Солнышко" | С 2-х мес. | -"- | 2000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.6. "Новолакт-1" | С первых дней жизни до 3 мес. | -"- | 3000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.7. "Новолакт ММ" | Для недоно- шенных детей с первых дней жизни | Восста- новле- ние при 70 °С | 3000 | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
1.1.8. "Малютка" | С первых дней жизни до 2 мес. | Доводят до кипе- ния | 25000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
1.1.9. "Новолакт-2" | С 3-х мес. до 1 года | Восста- новле- ние при 80-90 °С | 15000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
1.1.10. "Малыш" с рисовой мукой | С 2-х мес. и старше | Доводят до кипе- ния | 25000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
1.1.11. "Малыш" с гречневой мукой | -"- | -"- | 25000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
1.1.12. "Малыш" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 25000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
1.1.13. Молоко сухое витаминизи-рованное детское | С 4-х мес. | -"- | 25000 | 1,0 | - | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | 50 |
Таблица 2
Микробиологические нормативы для сухих кисло-молочных продуктов
|
|
| Масса продукта (г), в которой не допускаются |
|
|
|
|
| |||
Наиме- нование продукта
| Возраст детей
| Обра- ботка перед употреб- лением
| ВГКП (коли- форм- ные бак- терии) | Е. coli | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aurеus | B. cereus, КОЕ/г, не более
| Плес- невые грибы, КОЕ/г, не более
| Дрож- жи, КОЕ/г, не более
| Ацидо- филь- ные бакте- рии, КОЕ/г, не менее
| Би- фидо- бакте- рии, КОЕ/г, не менее
|
2. Продукты сухие кисло-молочные
| |||||||||||
2.1. "Росток" | С первых дней жизни до 1 года | Восста- новле- ние при 45-50 °С | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 | 1 ·10  | - |
2.2. "Росток-1" | -"- | -"- | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 | 1 ·10 | - |
2.3. "Бифидолакт" | -"- | -"- | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 |
| 1 ·10 |
2.4. "Тонус" | -"- | -"- | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 | 1 ·10  | - |
2.5. "Тонус-1" | -"- | -"- | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 | 1 ·10 | 1 ·10 |
2.6. "Бифилак" | -"- | -"- | 1,0 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | 100 | 50 | 10 | - | - |
* Продукт не содержит молочно-кислых бактерий, но обладает бифидогенным действием; общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, КОЕ/г - 3000. | |||||||||||
Таблица 3
Микробиологические нормативы для жидких кисло-молочных и пастообразных продуктов детского питания
|
|
| Масса продукта, см (г), в которой не допускаются |
|
|
| |||||
Наименование продукта | Возраст детей | Количество мезо- фильных аэробных и факульта- тивноана- эробных микроор- ганизмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- форм- ные бакте- рии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aurеus | Ацидо- филь- ные бакте- рии, КОЕ/см , (г), не менее | Бифидо- бактрии, КОЕ/см , (г), не менее | Молочно- кислые бактерии, КОЕ/см , (г), не менее | |||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | |||
3.1. Продукты стерилизованные в стеклянных бутылках и пакетах | |||||||||||
3.1.1. Продукт жидкий стерилизованный "Молочко" | С первых дней жизни до 1 года
| 100 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.1.2. Смесь стерилизованная "Малютка" | -"- | 100 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.1.3. Продукт стерилизованный "Алеся" | -"- | 100 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.1.4. Смесь адаптированная стерилизованная "Новолакт-3" | С 1 месяца | 100 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.1.5. Молоко детское стерилизованное витаминизированное | С 8 месяцев | 100 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.1.6. Сливки стерилизованные "Детские" | С 2-х лет | 500 | 10,0 | 100,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.2. Продукты пастеризованные | |||||||||||
3.2.1. Напиток "Истринский-2" | С 6 месяцев | 3000 | 1,0 | 50,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.2.2. Напиток "Яблонька" | -"- | 3000 | 1,0 | 50,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.2.3. Напиток "Тотошка" | С 1 года | 10000 | 1,0 | 50,0 | 10,0 | - | - | - | |||
3.2.4. Молоко пастеризованное "Детское"* | С 6 месяцев | 50000 | 1,0 | 50,0 | - | - | - | - | |||
3.3. Продукты кисло-молочные | |||||||||||
3.3.1. Смесь ацидофильная "Малютка" | С первых дней жизни до 6 месяцев | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | - | - | |||
3.3.2. "Бифилин" | С первых дней жизни | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | - | 1 ·10  | - | |||
3.3.3. "Биолакт" адаптированный | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | - | - | 1 ·10  | |||
3.3.4. "Биолакт" адаптированный с лизоцимом | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | - | - | 1 ·10 | |||
3.3.5. Смесь молочная "Крошечка" | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | - | - | |||
3.3.6. Продукт жидкий "Кисло-молочный" | С 3 месяцев | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | 1 ·10 | - | |||
3.3.7. Продукт жидкий кисло-молочный "Ацидомил" | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | - | - | |||
3.3.8. Продукт жидкий кисло-молочный "Бифимил" | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | - | 1 ·10 | - | |||
3.3.9. Кефир детский | С 6 месяцев | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | Микроскопический препарат | |||||
3.3.10. "Биолакт" | С 1 года | - | 3,0 | 50,0 | 1,0 | - | - | 1 ·10 | |||
3.3.11. "Биолакт" обогащенный | -"- | - | 3,0 | 50,0 | 1,0 | - | - | 1 ·10 | |||
3.3.12. "Дюймовочка-1" | Для детей дошко- льного возраста | - | 1,0 | 50,0 | 1,0 | - | - | 1 ·10 | |||
3.3.13. "Дюймовочка-2" | -"- | - | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 1 ·10 | 1 ·10 | - | |||
3.3.14. "Дюймовочка-3" | -"- | - | 1,0 | 50,0 | 1,0 | - | 1 ·10 | 1 ·10 | |||
3.3.15. Напиток "Детский" | -"- | - | 0,3 | 50,0 | 1,0 | Микроскопический препарат | |||||
3.3.16. Продукт низкоэнергетический кисло-молочный с ароматизаторами (или без них) | С 2-х лет | - | 0,3 | 50,0 | 1,0 | Микроскопический препарат | |||||
3.4. Продукты пастообразные** | |||||||||||
3.4.1. "Пастолакт" | С первых дней жизни до 1 года | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | - | - | |||
3.4.2. Творог "Детский" | С 6 месяцев | - | 0,3 | 50,0 | 1,0 | Микроскопический препарат | |||||
3.4.3. Творог ДМ | -"- | - | 0,3 | 50,0 | 1,0 | Микроскопический препарат | |||||
3.5. Закваски*** |
| - | 10,0 | 100,0 | 1,0 | Микроскопический препарат | |||||
* При использовании в питании детей с 6 месяцев до 3-х лет предварительно довести до кипения.
** В данных продуктах дополнительно нормируется количество плесневых грибов, КОЕ/см (г), не более 100. *** В кефирной грибковой и производственной закваске БГКП (колиформные бактерии) должны отсутствовать в 3 см . | |||||||||||
Таблица 4
Микробиологические нормативы для жидких стерилизованных и кисло-молочных продуктов детского питания, вырабатываемых на предприятиях и цехах многопрофильного плана (типа АООТ "Лианозовский молочный комбинат")
|
|
| Масса продукта, см (г), в которой не допускаются |
|
|
| ||
Наименование продукта | Возраст детей | Количество мезо- фильных аэробных и факульта- тивноана- эробных микроор- ганизмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- форм- ные бакте- рии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aurеus | Ацидо- фильные бактерии, КОЕ/см , (г), не менее | Бифидо- бактрии, КОЕ/см , (г), не менее | Молочно- кислые бактерии, КОЕ/см , (г), не менее |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
4.1. Продукты стерилизованные (УВТ-обработка)* | ||||||||
4.1.1. "Бэби-Милк" | С первых дней жизни до 1 года | Продукт должен соответствовать требованиям промышленной стерильности | ||||||
4.1.2. Продукт жидкий стерилизованный "Молочко" | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- |
4.1.3. Молоко стерилизованное витаминизированное | С 8 месяцев до 1 года | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- |
4.1.4. Сливки стерилизованные "Детские" | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- | -"- |
4.2. Кисло-молочные продукты** | ||||||||
4.2.1. Продукт адаптированный "Бифидомикс" | С первых дней жизни до 1 года | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 -1 ·10 1 ·10 -1 ·10 | ||
4.2.2. "Бифилин" |
| - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | 1 ·10 | ||
4.2.3. Кефир детский | С 6 месяцев | - | 3,0 | 50,0 | 10,0 | Микроскопический препарат | ||
* Продукты, вырабатываемые с применением термизации сырья, ультравысокотемпературной обработки нормализованной смеси, асептического розлива и с длительными сроками хранения.
** Продукты, вырабатываемые с применением термизации сырья, сквашивания стерилизованной смеси и с удлиненными сроками хранения. | ||||||||
Таблица 5
Микробиологические нормативы для сухих молочных диетических продуктов
|
|
|
|
| Масса продукта (г), в которой не допускаются |
|
| |||||
Наименование продукта
| Назначение продукта
| Возраст детей
| Обра- ботка перед употреб- лением
| Коли- чество мезо- фильных аэробных и факуль- тативно- ана- эробных микроор- ганизмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- форм- ные бакте- рии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aurеus | Плес- невые грибы, КОЕ/г, не более
| Дрож- жи, КОЕ/г, не более | |||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |||
5.1. Продукты диетические | ||||||||||||
5.1.1. Диетический калорийный (энпит) | Ожоговые болезни, хирурги- ческие заболевания | Для детей раннего и старшего возраста | Доводят до кипения | 25000 | 0,3 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.2. Диетический белковый (энпит) | -"- | -"- | -"- | 25000 | 0,3 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.3. Диетический низкокалорийный (энпит) | Для детей с избыточным весом | -"- | -"- | 25000 | 0,3 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.4 Противоанеми- ческий (энпит) | Анемия | -"- | -"- | 25000 | 0,3 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.5. Энпит ацидофильный | Заболевания желудочно- кишечного тракта | С одного года и старше | Восста- новление при 40-45 °С | - | 0,3 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.6. Диамол | Диабет | Для детей и взрослых | Доводят до кипения | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 50 | 10 | |||
5.1.7. Белковит | Для детей, постра- давших от радиаци- онного воздействия | С 1 мес. | -"- | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.8. Продукт сухой молочный низкожировой | Для детей с избыточным весом | С одного года и старше | Доводят до кипения | 2000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 50 | 10 | |||
5.1.9. Лактанал** | Пищевая аллергия | С 1 мес. до года | Восста- новление при 37 °С | 2000 | 1,0 | 100,0 | 1,0 | 50 | 10 | |||
5.1.10. Фиталакт** | -"- | -"- | -"- | 25000 | 1,0 | 100,0 | 1,0 | 50 | 10 | |||
5.1.11. Низколактозная "Малютка" | Непере- носимость лактозы | С первых дней жизни до 2-х мес. | Доводят до кипения | 25000 | 1,0 | 100,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.12. Низколактозное молоко | -"- | С одного года и старше | -"- | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.13. Фенилакт | Патология амино- кислотного обмена, заболевания почек | С 1 мес. | -"- | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.14. Пектомил | Для постра- давших от радиаци- онного воздействия | С 6 мес. | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 1,0 | 200 | 100 | |||
5.1.15. Унипит ДЦ | Ожоговые болезни, хирурги- ческие заболевания, целиакия | Для детей и взрослых | -"- | 15000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.16. Унипит-1 | -"- | -"- | -"- | 15000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.1.17. Унипит-2 | -"- | -"- | -"- | 15000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
5.2. Продукты таблетированные | ||||||||||||
5.2.1. Продукт таблетированный "Mорковь"*** | Для лечебно- профилак- тического питания с целью обогащения рациона витаминами, расти- тельными волокнами и мине- ральными солями | Для детей старше 5 лет и взрослых | 3-5 таблеток в день | 5000 | 0,1 | 25,0 | - | 200 | 50 | |||
5.2.2. Продукт таблетированный "Шиповник"*** |
| -"- | -"- | 5000 | 0,1 | 25,0 | - | 200 | 50 | |||
5.2.3. Продукт таблетированный "Яблоко"*** |
| -"- | -"- | 3000 | 0,1 | 25,0 | - | 100 | 50 | |||
5.2.4. Продукт таблетированный "Арония"*** | -"- | -"- | -"- | 3000 | 0,1 | 25,0 | - | 200 | 50 | |||
5.3. Продукт "Вита" с плодово-ягодными наполнителями*** | -"- | Для детей с 3-х лет и старше | Восста- новление при 40-45 °С | 15000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 50 | |||
* Продукт содержит 1 ·10 ацидофильных бактерий в 1 г. ** Е. coli должны отсутствовать в 10 г продукта.
*** В продуктах нормируется содержание В. cеreus, КОЕ/г - не более 100 (для продуктов "Морковь", "Вита" - не более 200). Сульфитредуцирующие клостридии должны отсутствовать в 0,1 г продукта (кроме продукта "Вита"). | ||||||||||||
Таблица 6
Микробиологические нормативы для сухих молочных каш
|
|
|
| Масса продукта (г), в которой не допускаются |
|
| ||||
Наименование продукта | Возраст детей | Обработка перед употреб- лением | Количество мезо- фильных аэробных и факуль- тативно- анаэроб- ных микро- организмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (колиформ- ные бактерии) | Патоген. микро- организмы, в т.ч. сальмо- неллы | Плес- невые грибы, КОЕ/г, не более
| Дрож- жи, КОЕ/г, не более
| |||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |||
6.1. Каши молочные | ||||||||||
6.1.1. Каша "Малышка" с рисовой мукой | С 4 мес. до 1 года | Доводят до кипения | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.2. Каша "Малышка" с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.3. Каша "Малышка" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.4. Каша "Зернышко" с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.5. Каша "Зернышко" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.6. Каша "Зернышко", обогащенная железом, с толокном | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.7. Каша "Зернышко", обогащенная железом, с рисовой мукой | -"- |
| 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.8. Каша "Новинка" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.9. Каша "Новинка" с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.10. Каша "Новинка" с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.11. Каша "Колобок" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.12. Каша "Колобок" с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0.1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.13. Каша "Колобок" с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.14. Каша "Колосок" с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.15. Каша "Колосок" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.16 Каша "Ядрышко" с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.17. Каша "Ядрышко" с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.18. Каша "Ядрышко" с толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.1.19. Каша "Крупинка" с манной крупой | С 5 мес. | Кипячение 5 мин | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2. Каши "Детские" (с пектином) | ||||||||||
6.2.1. Каша "Детская" молочная с яблочным пектином и гречневой мукой | С 6 мес. до 1 года | Доводят до кипения | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2.2. Каша "Детская" молочная с яблочным пектином и рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2.3. Каша "Детская" молочная с яблочным пектином и толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2.4. Каша "Детская" молочная со свекловичным пектином и рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2.5. Каша "Детская" молочная со свекловичным пектином и гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.2.6. Каша "Детская" молочная со свекловичным пектином и толокном или овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3. Каши "Белорусские" | ||||||||||
6.3.1. Каша "Белорусская" аппетитная | С 5 мес. | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.2. Каша "Белорусская" яблочно-молочная | С 6 мес. | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.3. Каша "Белорусская" молочно-абрикосовая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.4. Каша "Белорусская" молочно-персиковая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.5. Каша "Белорусская" молочно-сливовая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.6. Каша "Белорусская" молочно-алычевая | С 8 мес. | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.7. Каша "Белорусская" диетическая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.3.8. Смесь злаковая "Особая" | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 50,0 | 200 | 100 | |||
6.4. Каши "Крестьянские" | ||||||||||
6.4.1. Каша "Крестьянская" | Для дошкольного и школьного возраста | Кипячение 5-10 мин | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.4.2. Каша "Крестьянская"рисовая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.4.3. Каша "Крестьянская" гречневая | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.4.4. Каша "Крестьянская" овсяная | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5. Каши сухие с использованием криопорошков из растительного сырья (свекла, морковь, черноплодная рябина) | ||||||||||
6.5.1. Каша "Нижегородская" с гречневой мукой | С 1 года и старше | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.2. Каша "Нижегородская" с овсяной мукой или толокном | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.3. Каша "Нижегородская" с рисовой мукой | -"- | "- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.4. Каша молочно-овощная с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.5. Каша молочно-овощная с гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.6. Каша молочно-овощная с овсяной мукой или толокном | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.7. Каша "Рябинка" с рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.8. Каша "Рябинка" с овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.5.9. Каша "Рябинка" с толокном | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6. Каши "Витаминизированные" | ||||||||||
6.6.1. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями с гречневой и пшеничной мукой | Для детей с 3-х лет, проживающих на территории, пострадавшей от радиационного воздействия | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6 2. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями с гречневой и рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6.3. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями и рисовой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6.4. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями и гречневой мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6.5. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями и толокном | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
6.6.6. Каша витаминизированная с пшеничными отрубями и овсяной мукой | -"- | -"- | 50000 | 0,1 | 25,0 | 200 | 100 | |||
Таблица 7
Микробиологические нормативы для сухих биологически активных добавок (БАД)
|
|
|
| Macca продукта (г), в которой не допускаются |
|
| ||
Наименование продукта | Возраст детей | Обработка перед употреб- лением
| Количество мезофильных аэробных и факуль- тативно- анаэробных микроорга- низмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- фор- мные бакте- рии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aureus | B. cereus, КОЕ/г, не более
| Бифи- добак-терии, КОЕ/г, не более
|
7. Добавки молочные биологически-активные, сухие | ||||||||
7.1. С лизоцимом (БАД-1Л) | С первых дней жизни до 1 года и старше | Без термической обработки | 500 | 1,0 | 5,0 | 1,0 | 50 | - |
7.2. С бифидобактериями (БАД-1Б) | -"- | -"- | - | 1,0 | 5,0 | 1,0 | 50 | 1 ·10 |
7.3. С лизоцимом и бифидобактериями (БАД-2) | -"- | -"- | - | 1,0 | 5,0 | 1,0 | 50 | 1 ·10 |
7.4. С иммуноглобулином (БАД-ИГЛ) | -"- | -"- | 500 | 1,0 | 5,0 | 1,0 | 50 | - |
Таблица 8
Микробиологические нормативы сухих молочных продуктов для коррекции питания беременных женщин
|
|
|
| Macca продукта (г), в которой не допускаются |
|
|
| ||
Наименование продукта
| Возраст детей
| Обра- ботка перед употреб- лением
| Количество мезо- фильных аэробных и факуль- тативно- анаэроб- ных микро- организ- мов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (коли- форм- ные бакте- рии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. саль- монеллы | S.aureus | B.cereus, КОЕ/г, не более
| Плес- невые грибы, КОЕ/г, не более
| Дрож- жи, КОЕ/г, не более
|
8. Продукты для беременных женщин и кормящих матерей | |||||||||
8.1. Галактон-1 | Для питания беременных женщин | Восста- новление при 45-50 °С | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | - | 100 | 50 |
8.2. Галактон-2 | Для беременных женщин, нуждающихся в дополнительном поступлении белка | -"- | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | - | 100 | 50 |
8.3. Галактон-3 | Для кормящих матерей | -"- | 25000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | - | 100 | 50 |
8.4. Галактон-4* | Для питания кормящих матерей, дети которых страдают пищевой аллергией | -"- | - | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 100 | 100 | 50 |
* Продукт содержит 1 ·10  ацидофильных бактерий в 1 г. | |||||||||
Таблица 9
Микробиологические нормативы для компонентов, используемых в производстве продуктов детского питания
|
| Масса продукта (г), в которой не допускаются |
|
| ||
Наименование продукта | Количество мезофильных аэробных и факультатив- ноанаэробных микроорга- низмов, КОЕ/см , (г), не более | ВГКП (колифор- мные бактерии) | Патоген. микро- орга- низмы, в т.ч. сальмо- неллы | S. aureus | Плес- невые грибы, КОЕ/г, не более
| Дрожжи, КОЕ/г, не более
|
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
9. Компоненты для производства продуктов детского питания | ||||||
9.1. Концентрат сывороточный белковый "Диалакт"* | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.2. Сыворотка деминерализованная, получаемая методом электродиализа (СД-ЭД)* | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.3. Концентрат сывороточный белковый, получаемый методом ультрафильтрации (КСБ-УФ)* | 10000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.4. Концентрат сывороточный белковый, получаемый методом ультрафильтрации и электродиализа (КСБ-УФ/ЭД)* | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.5. Углеводно-белковый концентрат (УБК-1, УБК-2)* | 10000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.6. Молочно-белковый концентрат (МБК)* | 10000 | 1,0 | 50,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.7. Сухой углеводно-белковый модуль из подсырной сыворотки | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.8. Сухие углеводно-белковые модули из творожной сыворотки | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.9. Концентрат параказеиновый** жидкий | - | 3,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 50 |
9.10. Концентрат параказеиновый** сухой | - | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 50 |
9.11. Казецит сухой | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.12. Изолированный соевый белок*** | 5000 | 0,1 | 25,0 | 0,1 | - | - |
9.13 Крупы: рисовая, гречневая, овсяная, пшеничная, ячменная необработанные | 25000 | 1,0 | 25,0 | - | 200 | 100 |
9.14. Мука рисовая, гречневая, овсяная, пшеничная, ржаная необработанная | 50000 | 0,1 | 25,0 | - | 100 | 100 |
9.15. Мука рисовая, гречневая, овсяная, пшеничная, ржаная обработанная | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 10 | 50 |
9.16. Крупа манная | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 50 |
9.17. Толокно овсяное | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 10 | 50 |
9.18. Патока кукурузная сухая, получаемая по импорту | 5000 | 1,0 | 100,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.19. Патока низкоосахаренная, порошкообразная | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 100 | 50 |
9.20. Углеводный компонент, полученный путем ферментативного гидролиза крахмала | 10000 | 1,0 | 25,0 | - | 100 | 50 |
9.21. Экстракт солодовый для детского питания | 10000 | 1,0 | 25,0 | - | 50 | 50 |
9.22. Крахмал кукурузный или картофельный высшего сорта | 10000 | 1,0 | 25,0 | - | 50 | 10 |
9.23. Сахар-песок рафинированный | 1000 | 1,0 | 25,0 | - | 10 | 10 |
9.24. Сахар молочный рафинированный | 1000 | 1,0 | 25,0 | - | 10 | 10 |
9.25. Лактоза пищевая распылительной сушки | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 100 | 50 |
9.26. Концентрат лактулозы | 5000 | 1,0 | 50,0 | - | 100 | 50 |
9.27. Масло кукурузное рафинированное дезодорированное | 100 | 1,0 | 25,0 | - | 20 | Не допускаются |
9.28. Масло подсолнечное рафинированное дезодорированное | 500 | 1,0 | 25,0 | - | 100 | Не допускаются |
9.29. Масло соевое | 100 | 1,0 | 25,0 | - | 20 | Не допускаются |
9.30. Жир молочный (топленый) | 100 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 100 | Не допускаются |
9.31. Витаминный премикс | 100 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 20 | Не допускаются |
9.32. Минеральный премикс | 10000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 50 |
9.33. Пектин | 10000 | 0,1 | 25,0 | - | 100 | 100 |
9.34. Кровь сухая | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | - | - |
9.35. Сухая молочная основа для смеси "Малютка" и "Малыш" | 15000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.36. Компоненты сухие молочные для детских продуктов | ||||||
9.36.1. Компонент сухой молочный нежирный для сухих детских продуктов | 15000 | 0,3 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.36.2. Компонент сухой молочный с солодовым экстрактом для жидких детских продуктов | 15000 | 0,3 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.36.3. Компонент сухой молочный с углеводно-белковым концентратом для жидких детских продуктов | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.36.4. Компонент сухой молочный нежирный без химической обработки для сухих детских продуктов | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.37. Молоко цельное сухое для детского питания**** | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
9.38. Молоко сухое обезжиренное**** | 25000 | 1,0 | 25,0 | 1,0 | 50 | 10 |
* При изготовлении продукта с внесением сывороточных белковых концентратов в сырье с последующей термической обработкой допускается 25000 КОЕ/г.
** В концентратах параказеиновых микроскопический препарат содержит молочно-кислые стрептококки или палочки.
*** Сульфитредуцирующих клостридий должно быть не более 10 КОЕ/г.
**** При изготовлении продукта путем сухого смешивания в смесителях молоко сухое цельное или обезжиренное должно содержать количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов не более 3000 КОЕ/г. | ||||||