ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков.
ГОСТ 32219-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммунологические методы определения наличия антибиотиков
Milk and milk products. Immunological methods for determination of antibiotics
МКС 67.100.10
Дата введения 2015-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук" (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по MК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по MК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1920-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32219-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.
5 Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 18330:2003* "Молоко и молочные продукты. Руководящие указания по стандартизованному описанию иммунологических или рецепторных анализов для определения антибактериальных остатков" ("Milk and milk products - Guidelines for the standardized description of immunoassays or receptor assays for the detection of antimicrobial residues", NEQ)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ИЗДАНИЕ (май 2019 г.) с Изменением N 1 (ИУС 3-2018).
Изменение N 1 принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 104-П от 12.12.2017)
За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, KG, RU, UZ, BY [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]
________________
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко и сыворотку, в т.ч. сухую, (далее - продукт) и устанавливает качественные иммунологические методы определения наличия антибиотиков:
- методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;
- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;
- метод одновременного определения наличия левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;
- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-2017 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 3145 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 19881 Анализаторы потенциометрические для контроля рН молока и молочных продуктов. Общие технические условия
ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
ГОСТ 27752 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 33957 Сыворотка молочная и напитки на ее основе. Правила приемки, отбор проб и методы контроля
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
Раздел 2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы
3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37°С до 66°С с допустимой погрешностью ±0,5°С.
3.2 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37°С до 66°С с отклонением от заданной температуры ±1°С.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.3 Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0°С до 12°С по ГОСТ 16317.
3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20±2)°С.
3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0°С до 100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.
3.8 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.9 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
3.10 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
________________
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.11 Буфер для восстановления сухой сыворотки Unisensor Dilution Buffer (Unisensor, Бельгия).
3.13 Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881 2-го класса точности диапазоном измерений от 5,5 до 8,0 ед. рН с погрешностью ±0,05 ед. рН.
3.14 Криостат, позволяющий поддерживать температуру (4±2)°С и (6±2)°С.
3.16 Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.
3.11-3.16 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
4 Отбор проб
Отбор проб продукта - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 33957 и нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.
Раздел 4. (Измененная редакция, Изм. N 1).
5 Методы определения наличия антибиотиков
5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа
5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.
5.1.1.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 1 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15°С до 30°С в течение 5 мин.
Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре от 0°С до 10°С.
Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.
5.1.1.2 Проведение определения
Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
В момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течение 30 мин.
5.1.1.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.1 (приложение А).
Если после проведения определения по 5.1.1.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.
5.1.2.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 2 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6±2)°С не более 9 мес. Перед началом работы необходимое количество флаконов извлекают из тест-набора, выдерживают при температуре от 15°С до 30°С, после чего открывают, удаляя фольгу.
Термостат или водяную баню нагревают до температуры (64±2)°С.
5.1.2.2 Проведение определения
Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (64±2)°С в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата (водяной бани), перемешивают круговыми движениями до растворения реактива и помещают обратно.
Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают в течение 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.
5.1.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.2 (приложение А).
Зона в верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.1.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.2 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы
5.2.1 Метод с использованием тест-набора N 3
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.
5.2.1.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 3 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество пеналов из тест-набора выдерживают при температуре от 15°С до 30°С.
Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40±3)°С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.
Восстановление контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard"
Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20°С - не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.
5.2.1.2 Проведение определения
Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.
Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40±3)°С в течение 3 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.2.1.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.3 (приложение А).
Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в продукте повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом продукте.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом продукте.
При проведении определений с применением контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов проводят, как указано выше.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.2.2 Метод с использованием тест-набора N 4
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зон определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.
5.2.2.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1 для тест-набора N 4 по 3.10.
5.2.2.2 Проведение определения в соответствии с 5.1.1.2.
5.2.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.4 (приложение А).
Если после проведения определения по 5.2.2.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.2.3 Метод с использованием тест-набора N 5
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.2.3.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 5 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15°С до 30°С в течение 10 мин.
Термостат или водяную баню нагревают до температуры (37,5±1,0)°С.
Флаконы с реагентом встряхивают для осаждения содержимого на дне.
5.2.3.2 Проведение определения
Для каждого флакона используют новый наконечник на пипетку.
Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (37,5±1,0)°С в течение 5 мин. Затем во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.
5.2.3.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.5 (приложение А).
Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы - под контрольной зоной.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.2.4 Метод с использованием тест-набора N 9
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.2.4.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 9 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6±2)°С не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.
5.2.4.2 Проведение определения
Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 5-10 с, затем извлекают и кладут на чистую сухую поверхность. По истечении 5-7 мин считывают результат.
5.2.4.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5.1 (приложение А).
Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.4.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной второй.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания, свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
5.3 Метод одновременного определения наличия левомицетина и стрептомицина с использованием тест-набора N 6
Метод основан на реакции комплексообразования левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.3.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 6 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15°С до 30°С в течение 10 мин.
Термостат или водяную баню нагревают до температуры (47,5±1,0)°С.
5.3.2 Проведение определения
Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5±1)°С в течение 5 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.
5.3.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.6 (приложение А).
Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения левомицетина на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной второй.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.4 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина
5.4.1 Метод с использованием тест-набора N 7
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.
5.4.1.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.2.1.1 для тест-набора N 7 по 3.10.
5.4.1.2 Проведение определения
Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.
Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40±3)°С в течение 5 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.4.1.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.7 (приложение А).
Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной четвертой.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
При проведении определений с применением контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов проводят как указано выше.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.4.2 Метод с использованием тест-набора N 8
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.4.2.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.3.1 для тест-набора N 8 по 3.10.
5.4.2.2 Проведение определения
Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5±1)°С в течение 10 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.4.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (приложение А).
Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной четвертой.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.4.3 Метод с использованием тест-набора N 10
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, стрептомицина и левомицетина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.4.3.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 10 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6±2)°С не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.
5.4.3.2 Проведение определения
Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 7-8 мин, затем извлекают, кладут на чистую сухую поверхность и считывают результат.
5.4.3.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.9 (приложение А).
Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной четвертой.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
6 Метрологические характеристики
Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах представлены в таблице 1.
Таблица 1
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Наименование антибиотика | Наименьший предел определения антибиотиков с использованием тест-наборов, мг/кг | |||||||||
| N 1 | N 2 | N 3 | N 4 | N 5 | N 6 | N 7 | N 8 | N 9 | N 10 |
Амоксициллин | 0,0035 | 0,004 | 0,003 | 0,003 | 0,002 | - | 0,002 | 0,002 | 0,003 | 0,003 |
Ампициллин | 0,0035 | 0,004 | 0,003 | 0,003 | 0,002 | - | 0,003 | 0,003 | 0,003 | 0,003 |
Бензициллин | 0,003 | - | 0,003 | - | - | - | 0,003 | - | - | - |
Гетациллин | 0,01 | - | 0,005 | - | - | - | 0,005 | - | - | - |
Дигидрострептомицин | - | - | - | - | - | - | 0,05 | - | - | 0,1 |
Диклоксациллин | 0,02 | 0,03 | 0,006 | 0,011 | 0,002 | - | 0,006 | 0,003 | 0,006 | 0,003 |
Доксициклин | - | - | 0,0025 | - | 0,002 | - | 0,002 | 0,002 | 0,006 | 0,006 |
Клоксациллин | 0,022 | 0,03 | 0,006 | 0,018 | 0,002 | - | 0,006 | 0,003 | 0,003 | 0,003 |
Левомицетин (хлорамфеникол) | - | - | - | - | - | 0,0003 | 0,0003 | 0,0003 | - | 0,0003 |
Нафциллин | 0,052 | - | 0,03 | 0,046 | 0,0075 | - | 0,03 | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
Оксациллин | 0,024 | 0,03 | 0,012 | 0,032 | 0,003 | - | 0,012 | 0,003 | 0,003 | 0,003 |
Окситетрациклин | - | - | 0,0075 | 0,01 | 0,01 | - | 0,007 | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
Пенициллин G | 0,002 | 0,004 | 0,003 | 0,001 | 0,002 | - | 0,003 | 0,003 | 0,002 | 0,0015 |
Пенициллин V | 0,003 | - | 0,003 | - | - | - | 0,003 | - | - | - |
Пиперациллин
| 0,006 | - | 0,005 | - | - | - | 0,005 | - | - | - |
Прокаин-пенициллин | 0,002 | - | 0,003 | - | - | - | 0,003 | - | - | - |
Стрептомицин | - | - | - | - | - | 0,2 | 0,15 | 0,2 | - | 0,1 |
Тетрациклин | - | - | 0,01 | 0,01 | 0,01 | - | 0,01 | 0,01 | 0,008 | 0,008 |
Тикарциллин | 0,04 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Хлортетрациклин | - | - | 0,006 | 0,026 | 0,006 | - | 0,005 | 0,006 | 0,004 | 0,004 |
Цефадроксил | 0,03 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефазолин | 0,013 | 0,05 | - | - | 0,015 | - | - | 0,02 | 0,005 | - |
Цефалексин | 0,025 | 0,1 | - | 0,01 | 0,4 | - | - | - | - | - |
Цефалоний | 0,04 | - | 0,003 | - | - | - | 0,003 | - | - | - |
Цефалониум | 0,04 | 0,02 | 0,003 | 0,04 | 0,003 | - | 0,003 | 0,003 | 0,004 | 0,004 |
Цефапирин | 0,011 | - | - | 0,008 | 0,004 | - | - | 0,004 | 0,004 | 0,004 |
Цефацетрил | 0,05 | - | - | 0,009 | - | - | - | - | - | - |
Цефкином | 0,02 | 0,02 | - | 0,01 | 0,006 | - | - | 0,006 | 0,005 | 0,005 |
Цефоксазол | 0,05 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефоперазон | 0,01 | 0,05 | 0,003 | 0,004 | 0,003 | - | 0,003 | 0,004 | 0,005 | 0,004 |
Цефотаксим | 0,01 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефрадин | 0,03 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефтиофур | 0,011 | 0,1 | - | 0,002 | 0,05 | - | 0,01 | 0,015 | 0,01 | 0,01 |
Цефуроксим | 0,01 | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
(Измененная редакция, Изм. N 1).
7 Требования, обеспечивающие безопасность
При выполнении работ необходимо, чтобы помещение лаборатории было оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.021 и содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не превышало норм, установленных ГОСТ 12.1.005.
Требования техники безопасности при работе с химическими реактивами - в соответствии с ГОСТ 12.1.007; требования техники безопасности при работе с электроустановками - в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и должно быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.
8 Требования к оператору
К проведению определения наличия антибиотиков допускаются лица, имеющие специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работы с оборудованием, освоившие выполнение предусмотренных методикой операций, ранее не принимавшие антибактериальные и противовирусные препараты в течение периода их полного выведения из организма в соответствии с инструкцией к конкретному препарату.
Разделы 7, 8 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
Приложение А
(справочное)
Примеры возможных результатов определения наличия антибиотиков в молоке
А.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 1 приведены на рисунке А.1.
|
 |
1, 2 - антибиотики отсутствуют; 3 - антибиотики присутствуют
Рисунок А.1
А.2 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 2 приведены на рисунке А.2.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2, 3, 4 - антибиотики присутствуют; 5 - недействительный результат
Рисунок А.2
А.3 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 3 приведены на рисунке А.3.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 - недействительный результат
Рисунок А.3
А.4 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 4 приведены на рисунке А.4.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 3 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 4 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы
Рисунок А.4
А.5 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 5 приведены на рисунке А.5.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 3 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 4 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 - недействительный результат
Рисунок А.5
А.5.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 9 приведены на рисунке А.5.1.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 - недействительный результат
Рисунок А.5.1
А.6 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 6 приведены на рисунке А.6.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствует стрептомицин; 3 - присутствует левомицетин; 4 - присутствуют левомицетин и стрептомицин; 5 - недействительный результат
Рисунок А.6
А.7 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 7 приведены на рисунке А.7.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 3 - присутствует левомицетин; 4 - присутствует стрептомицин; 5 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 6 - недействительный результат
Рисунок А.7
А.8 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 8 приведены на рисунке А.8.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 3 - присутствует левомицетин; 4 - присутствует стрептомицин; 5 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 6 - недействительный результат
Рисунок А.8
А.9 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 10 приведены на рисунке А.9.
|
 |
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 - присутствует стрептомицин; 5 - присутствует левомицетин; 6 - недействительный результат
Рисунок А.9
Приложение А (Измененная редакция, Изм. N 1).
|
|
|
УДК 637.12.04/.07:006.354 | МКС 67.100.10 | NEQ |
Ключевые слова: молоко и молочные продукты, иммуноферментные методы, методы определения антибиотиков бета-лактамного типа, методы одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, метод одновременного определения левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина, методы одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина | ||