ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков.

ГОСТ 32219-2013

 МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

 Иммунологические методы определения наличия антибиотиков

Milk and milk products. Immunological methods for determination of antibiotics

МКС 67.100.10

Дата введения 2015-07-01

 Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук" (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1920-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32219-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 18330:2003* "Молоко и молочные продукты. Руководящие указания по стандартизованному описанию иммунологических или рецепторных анализов для определения антибактериальных остатков" ("Milk and milk products - Guidelines for the standardized description of immunoassays or receptor assays for the detection of antimicrobial residues", NEQ)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ИЗДАНИЕ (май 2019 г.) с Изменением N 1 (ИУС 3-2018).

Изменение N 1 принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 104-П от 12.12.2017)

За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, KG, RU, UZ, BY [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]

Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации

________________

Дата введения в действие на территории Российской Федерации - 2018-07-01.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко и сыворотку, в т.ч. сухую, (далее - продукт) и устанавливает качественные иммунологические методы определения наличия антибиотиков:

- методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;

- метод одновременного определения наличия левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;

- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-2017 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 3145 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 19881 Анализаторы потенциометрические для контроля рН молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 26809.1 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 33957 Сыворотка молочная и напитки на ее основе. Правила приемки, отбор проб и методы контроля

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

     Раздел 2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

      3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37°С до 66°С с допустимой погрешностью ±0,5°С.

3.2 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37°С до 66°С с отклонением от заданной температуры ±1°С.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.3 Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0°С до 12°С по ГОСТ 16317.

3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20±2)°С.

3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0°С до 100°С ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

3.7 Пипетки вместимостью 0,5 и 1,0 см

по ГОСТ 29227.

3.8 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.9 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.10 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

- тест-набор N 1

для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий закрытые крышкой пробирки с 3,3’, 5,5’-тетраметилбензидином и специфическими рецепторами; пипетки вместимостью 0,45 см

; индикаторное устройство с диметилсульфоксидом;

________________     

       

Тест-набор "СНАП Бета-Лакта СТ" (IDEXX, США).

- тест-набор N 2

для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий флаконы с лиофилизатом, индикаторные полоски хроматографической бумаги, пипетки вместимостью 0,15 см

;

________________

Тест-набор "Delvotest BLF" (DSM Food Specialties B.V., Нидерланды).

- тест-набор N 3

для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0,2 см

с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пенициллина-G 0,004 мкг/г и окситетрациклина 0,01 мкг/г, красителя ("Positive Standard"); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя ("Negative Standard");

________________

Тест-набор "Twinsensor

" (Unisensor, Бельгия).

- тест-набор N 4

для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1;

________________

Тест-набор "СНАП Дуо Бета-Тетра СТ" (IDEXX, США).

- тест-набор N 5

для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий закрытые крышкой флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см

с наконечниками;

________________     

       

 Тест-набор "Betastar Combo" (Neogen Corporation, США).     

- тест-набор N 6

для одновременного определения левомицетина и стрептомицина, включающий флаконы; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетки вместимостью 0,2 см

или 0,3 см

;

________________     

Тест-набор "Reveal for CAP/STREP" (Neogen Corporation, США).

Сноски

с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению.

- тест-набор N 7

для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0,2 см

с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с концентрацией пенициллина-G 0,004 мг/кг; окситетрациклина 0,01 мг/кг, стрептомицина 0,2 мг/кг, хлорамфеникола 0,0003 мг/кг и красителя ("Positive Standard"); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя ("Negative Standard");

________________     

Тест-набор "4sensor

" (Unisensor, Бельгия).

- тест-набор N 8

для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 6;

________________

Тест-набор "Betastar 4D" (Neogen Corporation, США).

- тест-набор N 9

для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пластину микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см

с наконечниками (дополнительно);

________________

Тест-набор "PROQUI-TEST R 10 ppb" (Proquiga Biotech, SA, Испания).

- тест-набор N 10

для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см

с наконечниками (дополнительно).

________________     

Тест-набор "PROQUI-TEST 4" (Proquiga Biotech, SA, Испания).

Сноски

с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению.

Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.11 Буфер для восстановления сухой сыворотки Unisensor Dilution Buffer (Unisensor, Бельгия).

3.12 Раствор гидроксида натрия молярной концентрации

с

(NaOH)=1 моль/дм

.

3.13 Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881 2-го класса точности диапазоном измерений от 5,5 до 8,0 ед. рН с погрешностью ±0,05 ед. рН.

3.14 Криостат, позволяющий поддерживать температуру (4±2)°С и (6±2)°С.

3.15 Дозаторы автоматические или механические одноканальные или многоканальные переменной вместимости 0,01-0,1 и 0,1-1 см

, с допускаемым относительным СКО не более 8,0%.

3.16 Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.

3.11-3.16 (Введены дополнительно, Изм. N 1).

      4 Отбор проб

Отбор проб продукта - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 33957 и нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.

Для восстановления сухой сыворотки готовят раствор буфера: при температуре (40±2)°С буфер по 3.11 разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1 (

V/V

). 1,5 г сухой сыворотки добавляют к 8,5 см

раствора буфера и измеряют значение рН полученного раствора. Если значение менее 6 ед. рН, то кислотность раствора приводят к значению 6-7 ед. рН при помощи раствора гидроксида натрия по 3.12.

Раздел 4. (Измененная редакция, Изм. N 1).

      5 Методы определения наличия антибиотиков

5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 1 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15°С до 30°С в течение 5 мин.

Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре от 0°С до 10°С.

Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

5.1.1.2 Проведение определения

Снимают крышку с пробирки. Пипетку вместимостью 0,45 см

наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают крышкой и перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

В момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течение 30 мин.

5.1.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.1 (приложение А).

Если после проведения определения по 5.1.1.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1 Подготовка к определению