ГОСТ 31653-2012 Корма. Метод иммуноферментного определения микотоксинов.

ГОСТ 31653-2012

Группа С19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 КОРМА

 Метод иммуноферментного определения микотоксинов

 Feedstuffs. Method of immunoenzyme mycotoxin determination

МКС 65.120

Дата введения 2013-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии" Россельхозакадемии

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 50 от 20 июля 2012 г.)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 сентября 2012 г. N 336-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31653-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52471-2005

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты".

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты"

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает иммуноферментный метод определения содержания микотоксинов (афлатоксина В1, роридина А, охратоксина А, стеригматоцистина, Т-2 токсина, зеараленона, фумонизина В1) в кормах.

Настоящий стандарт распространяется на зерновые корма, зернобобовые кормовые культуры, искусственно высушенные и грубые корма, продукцию комбикормовой промышленности (комбикорма полнорационные, комбикорма-концентраты), сырье для производства кормов и кормовые добавки, за исключением кормовых добавок минерального происхождения и продукции органического синтеза.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 8.315-97 Государственная система обеспечения единства измерений. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Реактивы. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27262-87* Корма растительного происхождения. Методы отбора проб

ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб.

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины, определения, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2 основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.3 вспомогательный раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно из основного раствора и необходимый для приготовления других типов растворов.

3.1.4 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие сокращения:

ИФА - иммуноферментный анализ;

ОП - оптическая плотность;

АГ - антиген;

AT - антитела;

АНС - 8-анилин-1-нафталинсульфокислота;

ФДА - о-фенилендиамин;

ФК - антивидовой ферментный конъюгат;

МСО - межгосударственный стандартный образец;

БУФЕР-ОТ - солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20;

БУФЕР-Р1 - карбонат-бикарбонатный буферный раствор;

БУФЕР-Р2 - солевой фосфатный буферный раствор с добавлением твина 20 и бычьего сывороточного альбумина;

СУБСТРАТ - фосфат-цитратный буферный раствор с добавлением пероксида водорода

      4 Сущность иммуноферментного метода определения

Иммуноферментный метод основан на измерении содержания микотоксинов в пробах с помощью непрямого твердофазного конкурентного ИФА рабочих растворов экстрактов (рисунок 1).

Рисунок 1 - Основные этапы иммуноферментного метода определения

Непрямой ИФА основан на способности микотоксинов взаимодействовать со специфичными антителами в условиях конкуренции с белковым конъюгатом микотоксина, нанесенным на поверхность ячеек планшета, - твердофазным антигеном.

Аналитический сигнал (регистрируемое значение оптической плотности), измеряющий степень взаимодействия AT с АГ, обратно пропорционален массовой концентрации микотоксина в рабочем растворе.

      5 Прецизионность метода

Показатели прецизионности метода представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Показатели прецизионности иммуноферментного метода определения микотоксинов

Определяемый компонент	Содержание, мг/кг	Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	Относительное стандартное отклонение промежуточной прецизионности, %	Предел повторяемости , %	Предел промежуточной прецизионности , %
Афлатоксин В1	0,002-0,050	15	18	42	50
Роридин А   Охратоксин А   Стеригматоцистин	0,004-0,100	13	16	36	45
Т-2 токсин   Зеараленон	0,020-0,500	12	14	34	39
Фумонизин В1	0,050-5,000	12	14	34	39

Расхождение между результатами двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, может превышать предел повторяемости

не более одного раза из двадцати.

Расхождение двух результатов анализа, полученных в условиях промежуточной (внутрилабораторной) прецизионности (разное время, разные операторы, разное оборудование), может превышать значение предела промежуточной прецизионности

не более одного раза из двадцати.

      6 Требования к условиям выполнения измерений

Измерения проводят в лабораторных условиях при температуре окружающего воздуха (23±5) °С, атмосферном давлении (97±10) кПа, относительной влажности (65±15)%, частоте переменного тока (50±5) Гц, напряжении в сети (220±10) В.

      7 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

Фотометр вертикального типа фотометрирования, с диапазоном измерения оптической плотности от 0 до 2,5, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного измерения не более ±0,005 в комплекте с интерференционным светофильтром для длин волн от 490 до 492 нм.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104, высокого класса точности, с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,0002 г.

Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (130±5) °С.

Шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий среднюю температуру в холодильной камере не выше 10 °С.

Дистиллятор любого типа.

Калькулятор любого типа с логарифмической функцией.

Цилиндры 1-25(100, 1000) по ГОСТ 1770.

Колбы мерные 2-100 по ГОСТ 1770.

Дозаторы пипеточные для объемов доз 0,005-0,05; 0,02-0,2; 1-5 см

в комплектах со сменными одноразовыми наконечниками.

Микрошприц МШ-10 вместимостью 0,01 см

.

Микрошприцы вместимостью 0,1 см

(категории Z 10,895-2) и 0,5 см

(категории Z 10,897-9) фирмы "Алдрич".

Планшет 96-ячеечный полистироловый наборный.

Пробирки П1-10 по ГОСТ 1770.

Колба коническая Кн-2-100(500, 1000) по ГОСТ 25336.

Воронки В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

Флаконы вместимостью 2 см

фирмы "Сигма" (категории Z 11, 508-8).

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Бумага масштабно-координатная марки Н-1 по ГОСТ 334.

Допускается использование другого оборудования и средств измерений, позволяющих воспроизводить метрологические характеристики, указанные в настоящем стандарте. Могут быть использованы МСО по ГОСТ 8.315 состава растворов микотоксинов с аттестованными значениями массовых концентраций и предназначенные для выполнения ИФА.

Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204.

Натрий сернистокислый по нормативному документу.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Ацетонитрил, ч.д.а.

Препараты микотоксинов фирмы "Сигма":

- афлатоксина В1 (категории А 6636);

- роридина А (категории R 7502);

- охратоксина А (категории О 1877);

- стеригматоцистина (категории S 3255);

- Т-2 токсина (категории Т 4887);

- зеараленона (категории Z 2125);

- фумонизина В1 (категории А1147).

Тест-системы для непрямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации с реактивами AT, АГ, ФК, БУФЕР-ОТ, БУФЕР-Р1, БУФЕР-Р2, СУБСТРАТ, ФДА (приложение А), предназначенные для определения микотоксинов: