ГОСТ 32709-2014 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов.

ГОСТ 32709-2014

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

 Методы определения антоцианинов

 Juice products. Methods for determination of Anthocyanins

МКС 67.080, 67.050

Дата введения 2016-01-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии Федерального государственного бюджетного учреждения "Научно-исследовательский институт питания" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ питания" РАМН)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 июля 2014 г. N 777-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32709-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 В настоящем стандарте учтены отдельные положения метода IFUMA71 (1998)* "Anthocyanins by HPLC" International Federation of Fruit Juice Produces (ИФУ 71:1998 "Определение антоцианинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" Международной федерации производителей фруктовых соков) в части качественного определения антоцианинов

6 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53773-2010

7 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые соки и нектары, фруктовые концентрированные соки, фруктовые пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки из фруктов, имеющих красную, синюю и фиолетовую окраску, включая соковую продукцию обогащенную и для детского питания (далее - соковая продукция), и устанавливает следующие методы определения антоцианинов:

- метод высокоэффективной обращенно-фазовой жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для качественного определения антоцианинов в соковой продукции;

- метод рН-дифференциальной спектрофотометрии для определения массовой концентрации (массовой доли) суммы антоцианинов в соковой продукции.

Диапазон измерений массовой концентрации (массовой доли) суммы антоцианинов в пересчете на цианидин-3-глюкозид - от 5 мг/дм

(млн

) до 5000 мг/дм

(млн

).

Предел обнаружения метода - 1 мг/дм

(млн

).

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ ИСО 3696-2013 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 9245-79 Потенциометры постоянного тока измерительные. Общие технические условия

ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31643-2012 Продукция соковая. Определение аскорбиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 антоцианины: Водорастворимые растительные пигменты, обусловливающие красную, синюю и фиолетовую окраску фруктов, относящиеся к классу флавоноидов и представляющие собой окрашенные растительные гликозиды антоцианидинов.

Примечание - Структура основных антоцианидинов, входящих в состав природных антоцианинов, приведена на рисунке А.1 приложения А.

3.2 профиль антоцианинов (профиль): Набор основных специфических, индивидуальных антоцианинов и соотношение между их содержанием, характерные для конкретного вида фруктов.

      4 Отбор и подготовка проб

4.1 Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671, ГОСТ 31643 (раздел 6.2).

      5 Метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

5.1 Сущность метода

Метод основан на определении индивидуальных антоцианинов путем их разделения на твердом носителе

, привитом на высокочистую силикагелевую основу по обращенно-фазовому механизму с последующим фотометрическим детектированием при длине волны 518 нм.

Полученные хроматограммы сравнивают с профилями антоцианинов аутентичных фруктовых соков и данными, приведенными в таблице Б.2 приложения Б.

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

5.2.1 Хроматограф жидкостный высокоэффективный с насосом высокого давления и спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) с относительным среднеквадратическим отклонением выходных сигналов не более 5% (по площади и времени выхода пиков), снабженный программно-аппаратным комплексом для сбора и обработки данных.

5.2.2 Колонка для ВЭЖХ длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенной фазой - октадецилсиликагелем

, размером частиц 5 мкм*.

_______________

* Колонки марок Phenomenex Luna и Hypersil

обеспечивают требуемую эффективность. Данная информация не является рекламой указанных колонок и приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

5.2.3 Микрошприцы хроматографические вместимостью 10 мм

, ценой деления 0,1 мм

и вместимостью 20 мм

, ценой деления 0,2 мм

.

5.2.4 Весы лабораторные по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г со значением среднеквадратического отклонения (СКО), не превышающим 0,05 мг, и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,005 г.

5.2.5 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.

5.2.6 рН-метр по ГОСТ 9245 с диапазоном измерений от 2 до 14 ед. рН, погрешностью измерений не более 0,05 ед. рН, снабженный комбинированным стеклянным электродом.

5.2.7 Пипетки градуированные 1-2-1, 1-2-2, 1-2-5, 1-2-10 и 1-2-25 по ГОСТ 29227.

5.2.8 Колбы мерные 2-25-2 и 2-100-2 по ГОСТ 1770.

5.2.9 Емкости для жидких проб (виалы) вместимостью 2-10 см

.

5.2.10 Центрифуга лабораторная с фактором разделения не менее 1000 g.

5.2.11 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

- воронки лабораторные,

- стаканы В-1-50, В-1-100 и Н-1-1000.

5.2.12 Вода по ГОСТ ИСО 3696, 2-й степени чистоты.

5.2.13 Ацетонитрил для градиентной ВЭЖХ, массовой долей основного вещества не менее 99%.

5.2.14 Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, ч.д.а.

5.2.15 Пробирки полимерные центрифужные с завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см

.

5.2.16 Установка лабораторная для вакуумной фильтрации жидкостей с мини-насосом.

5.2.17 Соковыжималка бытовая, блендер бытовой или гомогенизатор любой конструкции.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также реактивов, посуды и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

5.3 Подготовка к проведению определений

5.3.1 Подготовка проб для измерений

Для качественного определения антоцианинов в концентрированных соках и пюре взвешивают 1 г пробы, подготовленной по разделу 4, с записью результата до третьего десятичного знака. Пробу разбавляют в 5 см

воды (пюре и соковую продукцию с высоким содержанием растворимых сухих веществ разбавляют водой в массовом соотношении от 1:2 до 1:5). Подготовленную пробу для удаления мутной взвеси центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.

Для качественного определения антоцианинов в другой соковой продукции, а также в соках прямого отжима 1 г пробы, подготовленной по разделу 4, без предварительного разбавления центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При суммарном содержании антоцианинов в соке менее 0,1% пробу, подготовленную по разделу 4, фильтруют через мембранный фильтр, не разбавляя.

Примечание - Подготовку проб сока из свежих и (или) сохраненных свежими фруктов проводят с применением вспомогательного оборудования (см. 5.2.17) и последующим центрифугированием.

5.3.2 Приготовление подвижной фазы

Готовят раствор ортофосфорной кислоты с кислотностью (2,0±0,1) ед. рН. Для этого в стакан с водой по каплям добавляют концентрированную ортофосфорную кислоту, регистрируя показания рН-метра.

Для приготовления подвижной фазы полученный раствор ортофосфорной кислоты смешивают с ацетонитрилом в соотношении 88:12 в процентах по объему. Подвижную фазу фильтруют под вакуумом через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора подвижной фазы в плотно укупоренной посуде в холодильнике при температуре не более 10°С при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ и помутнения - одна неделя.

5.3.3 Порядок проведения определений

5.3.3.1 Подготовка хроматографа к работе

Включение и подготовку прибора к работе, вывод его на режим и выключение по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.

Перед проведением определений хроматографическую систему кондиционируют подвижной фазой до установления стабильной базовой линии в условиях и порядке, рекомендованных производителем.

5.3.3.2 Условия проведения хроматографических измерений:

- температура термостата колонки, °С - 35±1;

- детектирование - фотометрический детектор с длиной волны 518 нм;

- объем вводимой пробы, мм

- 10-20;

- элюент - раствор ортофосфорной кислоты (см. 5.3.2);

- скорость подачи элюента, см

/мин - 1,0;

- режим элюирования - градиентный, в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 - Состав подвижной фазы

5.3.3.3 Проведение измерений

В инжектор хроматографа микрошприцем вводят по 10-20 мм

пробы, подготовленной по 5.3.1, и проводят измерения в условиях, указанных в 5.3.3.2.

Регистрируют на хроматограммах соответствующие пики. Порядок элюирования основных специфических, индивидуальных антоцианинов приведен в таблице Б.1 приложения Б.

5.4 Обработка и оформление результатов определений

Идентификацию пиков основных специфических, индивидуальных антоцианинов осуществляют по абсолютным временам удерживания путем сравнения полученных хроматограмм соковой продукции с профилями антоцианинов сока, полученного из одноименных фруктов, или с профилями антоцианинов, приведенных в приложении Б.