ГОСТ 32538-2013 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Определение биоконцентрации на рыбах в проточных аквариумах.
ГОСТ 32538-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Определение биоконцентрации на рыбах в проточных аквариумах
Testing of chemicals of environmental hazard. Determination of bioconcentration in flow-through fish test
МКС 71.040.50
Дата введения 2014-08-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены
ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и
ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ"); Техническим комитетом по стандартизации N 339 "Безопасность сырья, материалов и веществ" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
4
Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 771-ст межгосударственный стандарт
ГОСТ 32538-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, Test No. 305:1996* "Биоконцентрация: Определение биоконцентрации на рыбах в проточных аквариумах" ("Bioconcentration: Flow-through Fish Test", IDT).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с
ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2019 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
Введение
В подробной обзорной статье по биоконцентрации, подготовленной Японией (февраль 1990), было рекомендовано объединить пять существующих методов по определению биоконцентрации ОЭСР (305 А-Е) в единый метод. В то же время проводилась работа по актуализации Руководства 305 Е "Исследование на рыбах в проточных аквариумах", представляющего собой измененный метод межлабораторных исследований [1]. Было достигнуто соглашение, что актуализированная версия Руководства 305 Е станет основой для объединенного метода.
Международный документ ОЭСР Тест N 305 представляет собой консолидированный вариант метода на основе пяти предыдущих методов (305 А-Е) и заменяет их. Метод описывает процедуру для определения потенциала биоконцентрации веществ в рыбе в проточных аквариумах. Исследование рекомендуется проводить в проточных условиях, однако, при условии соответствия критериям применимости (см. параграф 5.2), допускается проведение исследования в полустатическом режиме.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает процедуру определения возможности биоконцентрации веществ в рыбе в проточных аквариумах.
2 Термины, обозначения и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
2.1 биоконцентрация/бионакопление (bioconcentration/bloaccumulation): Повышение концентрации исследуемого веществ в/на организме (определенных тканях) относительно концентрации исследуемого вещества в среде обитания.
2.6 фаза воздействия или поглощения (exposure/uptake phase): Время, в течение которого рыба подвергается воздействию исследуемого химического вещества.
2.7 фаза поствоздействия или очистки (потеря) [post-exposure or depuration (loss) phase]: Время, следующее за перемещением исследуемой рыбы из среды, содержащей исследуемое вещество в среду, свободную от исследуемого вещества, в течение которого изучается выведение (или чистая потеря) вещества из исследуемой рыбы (или ее определенных тканей).
3 Общие положения
3.2 Фаза поглощения длится 28 сут за исключением случаев, когда стационарное состояние достигается раньше. Стационарное состояние достигается при значении концентрации исследуемого вещества в рыбе в пробах, взятых с двухдневным интервалом и различающихся не более чем на 20%.
Прогнозирование длительности фазы поглощения и времени наступления стационарного состояния может основываться на уравнениях, приведенных в
приложении C .
_________________
приложение E ).
3.3 Если в течение 28 дней стадия стабильности не наступает, фаза поглощения продлевается до ее наступления или до 60 дней, в зависимости от того, что наступит раньше; после этого начинается фаза очистки.
3.4 Константа поглощения, константа очистки (потери) (или константы, для получения которых применяются более сложные модели), коэффициент биоконцентрации, а также, если возможно, предел достоверности для каждого из этих параметров рассчитываются при помощи моделей, наиболее соответствующих полученным данным по концентрации в рыбе и в воде.
4 Подготовка к испытанию
4.1 Подготовка исследуемого вещества
4.1.1 Перед проведением теста на биоконцентрацию необходимо собрать следующую информацию о веществе:
- растворимость в воде [3];
- гидролиз, в соответствии с [6];
- фотопревращение в воде, обусловленное воздействием естественного или искусственного солнечного света, и в условиях освещения, применяемого для проведения теста на биоконцентрацию [10];
- давление паров [8];
- полная биоразлагаемость (если применимо), в соответствии с [11].
4.1.3 Требуется наличие соответствующего аналитического метода с известной точностью и чувствительностью для количественного определения вещества в тестовых растворах и биологическом материале, а также подробности подготовки тестируемых образцов и их хранения.
4.2 Надежность теста
Тест считают надежным при соблюдении следующих условий:
- колебание температуры менее ±2°С;
- концентрация кислорода в растворе не ниже 60%;
- концентрация тестируемого вещества в резервуарах составляет ±20% от средних значений, полученных в фазе поглощения;
- количество летальных исходов или других негативных последствий/заболеваний, как в контрольной, так и в тестируемой группах рыб составляет к концу теста не более 10%; в случае если время проведения теста было увеличено на несколько недель или месяцев, летальные исходы и прочие негативные последствия в обеих группах рыб должны составлять менее 5% в месяц и не превышать 30% за весь период тестирования.
4.3 Контрольные препараты
Применение контрольных препаратов с известной потенциальной возможностью биоконцентрации может быть уместным в экспериментальной методике, если в ней есть необходимость.
4.4 Оборудование
Следует избегать использования материалов для всех частей оборудования, которые могут раствориться, выступить в качестве сорбента или выделиться в раствор, и, тем самым оказать негативное воздействие на рыбу.
Могут применяться стандартные прямоугольные или цилиндрические резервуары, изготовленные из химически неактивного материала и подходящие по емкости с учетом предполагаемой загрузки.
4.5 Вода
4.5.1 Воду для тестов получают из чистых и одинаковых по качеству воды источников. Качество воды для раствора должно быть таким, чтобы обеспечить выживание выбранных для тестирования видов рыб на время адаптации и самого тестирования без появления анормальных признаков во внешнем виде и поведении особей. В воде особи должны быть способны к жизни, росту и размножению (например, в качестве лабораторных культур или в исследовании на токсичность на протяжении всего жизненного цикла). Должны быть известны следующие показатели воды:
- уровень рН;
- жесткость;
- общее количество нерастворимых примесей;
- содержание общего органического углерода и, при необходимости, аммония, нитрита, щелочные свойства;
- соленость (для морских видов).
В
приложении А даны рекомендуемые максимальные показатели ряда характеристик для пресной и морской воды, применяемой в тестах.
4.5.2 Качество воды должно быть одинаковым в ходе всего теста.
Уровень рН должен находиться в пределах от 6,0 до 8,5 рН. В ходе теста он может колебаться в пределах ±0,5.
Во избежание нежелательного влияния воды в растворе на результаты теста (например, комплексообразования тестируемого вещества) или негативного воздействия на тестируемые виды рыб, пробы воды должны регулярно браться на анализ.
4.5.3 Природное содержание частиц, так же как и общее содержание органического углерода (ТОС) в воде, должно быть как можно ниже во избежание адсорбции тестируемого вещества на органическом веществе, что может привести к снижению его биологической доступности. Максимально допустимое значение составляет 5 мг/л для твердых частиц (сухого вещества, не проходящего 0,45 мкм фильтр) и 2 мг/л для общего органического углерода (
приложение А ). При необходимости, воду перед употреблением следует отфильтровать. Увеличение содержания органического углерода в воде из-за попадания в нее продуктов жизнедеятельности рыб и остатков корма должно быть насколько возможно минимальным. В течение всего теста концентрация органического углерода в испытательных резервуарах не должна превышать концентрацию органического углерода, выделяющегося из исследуемого вещества и, если он используется, растворяющего агента, более чем на 10 мг/л (±20%).
4.6 Растворы для тестирования
4.6.1 Исходный раствор исследуемого вещества готовится соответствующей концентрации. Предпочтительно, чтобы исходный раствор был подготовлен путем простого смешивания или взбалтывания тестируемого вещества в воде. Не рекомендуется использовать растворители или диспергирующие (растворяющие) реагенты; тем не менее их применение допускается для достижения необходимой концентрации исходного раствора. В качестве растворителей могут выступать этанол, метанол, этиленгликоль монометиловый эфир, диметиловый эфир этиленгликоля, диметилформамид и триэтиленгликоль. Из диспергирующих реагентов применяются Кремофор RH40 (Cremophor RH40). Твин 80 (Tween 80), метилцеллюлоза 0,01% и НСО-40. Следует с осторожностью применять реагенты, легко поддающиеся биологическому разложению, так как они могут вызвать проблемы роста бактерий при тестировании в проточных аквариумах. Тестируемое вещество может нести радиоактивную метку и должно иметь максимальную чистоту (предпочтительно >98%).
4.6.2 При проведении тестирования в проточных аквариумах, система, непрерывно вводящая и разбавляющая исходный раствор тестируемого вещества (например, дозирующий насос, пропорциональный растворитель, система сатурации), должна вводить в резервуары тестируемое вещество в соответствующей концентрации.
Предпочтительно, чтобы в течение дня раствор в резервуарах полностью сменялся пять раз. Проточная модель является наиболее предпочтительной, когда ее применение невозможно (например, когда тестируемые организмы подвергаются негативному воздействию), возможно использование полунепрерывного метода, при условии соблюдения критериев надежности теста. Скорость потока исходного раствора и воды должна замеряться за 48 часов до начала тестирования и хотя бы раз в день в ходе тестирования. Рекомендуется включать в эту проверку определение скорости течения потока через каждую опытную камеру, поскольку скорости потоков, как между камерами, так и в них, не должны отличаться более чем на 20%.
4.7 Выбор видов организмов для тестирования
Важными критериями при выборе видов являются их доступность, размер и возможность удовлетворительно содержать их в лаборатории. Остальными критериями при выборе видов рыб являются возобновление вида, коммерческие, экологические соображения, а также восприимчивость вида, успешный опыт прошлого и т.п. Рекомендуемые виды для исследований даны в
приложении В . Использоваться могут и другие виды, но это потребует адаптации процедуры испытания, дабы обеспечить подходящие условия испытания. В этом случае в отчет включают обоснование выбора вида и метода, какие были применены для испытания.
4.7.1 При выборе видов для тестирования оценивают:
- доступность;
- возможность получения экземпляров удобного для проведения исследования размера и создания удовлетворительных условий их жизни в лабораторных условиях;
- рекреационную ценность видов;
- коммерческую ценность видов;
- экологическую ценность видов;
- сравнительную чувствительность;
- успешное использование в прошлом и т.д.
Список рекомендуемых для тестирования видов приведен в
приложении B . Прочие виды также могут подвергаться тестированию, в этом случае может потребоваться изменение процедуры тестирования для создания оптимальных тестовых условий.
В этом случае должно быть подготовлено обоснование выбора конкретного вида и экспериментального метода тестирования.
4.8 Содержание рыбы
4.8.1 Адаптация к новой среде, выбранной для теста группы рыб, длится по меньше мере две недели. Особи должны содержаться в воде той же температуры и получать тот же рацион, что и в ходе предстоящего исследования.
4.8.2 Через 48 часов адаптации подсчитывают количество летальных исходов и производится оценка в соответствии со следующими критериями.
- при летальных исходах выше 10% популяции за семь дней бракуется вся партия;
- при летальных исходах от 5% до 10% популяции за семь дней продление периода адаптации еще на семь дней;
- при летальных исходах менее 5% популяции за семь дней результат принимается. Если в последующие семь дней количество летальных исходов превышает 5%, вся партия бракуется.
4.8.3 Особи, участвовавшие в тестировании, не должны иметь видимых признаков заболеваний или аномальных признаков. Больная рыба должна быть умерщвлена. Особи не должны получать какого-либо лечения в течение двух недель, предшествующих тесту, или в ходе самого исследования.
5 Проведение исследования
5.1 Предварительное исследование
Проведение предварительного тестирования может быть полезно для определения оптимальных условий исследования для конкретного теста, например, выбора концентрации(й) исследуемого вещества, длительности фаз воздействия и очистки.
5.2 Условия воздействия
5.2.1 Длительность фазы воздействия
5.2.1.1 Оценка длительности фазы воздействия может быть получена с помощью имеющегося практического опыта (например, из предшествующих исследований или накопленных данных о веществе с родственной структурой), или из эмпирических соотношений, использующих данные о растворимости в воде, либо коэффициенте разделения октанол/вода исследуемого вещества (
приложение C ).
5.2.1.2 Фаза воздействия длится в течение 28 сут, если только не возникают признаки того, что стационарное состояние было достигнуто раньше. Если в течение 28 сут стационарное состояние не наступило, фазу воздействия продлевают и измерения продолжают до его наступления или до истечения 60 дней, в зависимости от того, что произойдет раньше.
5.2.2 Длительность фазы очистки
Половины фазы очистки достаточно для соответствующего (например, 90%) снижения дозовой нагрузки вещества (
приложение C ). Если время, требующееся для достижения 95% очистки, оказывается слишком длительным, превышая, например, по длительности двойной срок фазы воздействия (т.е. более 56 дней), оно может быть уменьшено (например, до наступления момента, когда стабильная концентрация исследуемого вещества будет составлять менее 10%).
Для веществ с более сложным принципом воздействия и очистки, чем однокамерная модель с использованием рыб, и превышающих кинетику первого порядка, более длительные фазы очистки допускаются, с тем чтобы определить константу скорости вывода вещества. Этот срок варьируется в зависимости от того, в течение какого времени концентрация исследуемого вещества в рыбе остается выше уровня обнаружения.
5.2.3 Количество исследуемых рыб
5.2.3.1 Количество рыб должно определяться таким образом, чтобы при каждом выборочном обследовании была возможность взять по четыре особи из каждого образца концентрации исследуемого вещества. В случае, если требуется большая статистическая мощность, количество особей на каждый образец должно быть увеличено.
5.2.3.2 Если для исследования используются взрослые особи, необходимо указать их пол (мужской/женский или и тот, и другой одновременно). Если в тестировании участвуют и те, и другие, необходимо указать разницу в липидном содержании у обоих полов, чтобы она была несущественной перед началом исследования; может потребоваться совместное содержание всех мужских и женских особей.
5.2.4 Внесение рыб
5.2.4.2 При выборе условий внесения рыбы должны быть приняты во внимание естественные условия обитания выбранного вида рыб.
Пример - Для донной рыбы может понадобиться аквариум с большим размером дна, чем для морской рыбы, при одинаковом объёме аквариума.
5.2.5 Кормление
5.2.5.1 В течение периодов адаптации и проведения испытаний необходимо обеспечить надлежащий режим питания рыб известными жирами и общим содержанием белка в достаточном количестве для поддержания их в здоровом состоянии и удержания живого веса. Необходимо обеспечить ежедневное кормление в течение периодов адаптации и проведения испытаний на уровне приблизительно от 1% до 2% живого веса; при этом концентрация жиров у большинства видов рыб будет оставаться на сравнительно постоянном уровне в течение проведения испытаний. Количество подаваемой пищи необходимо пересчитывать, например, раз в неделю, для поддержания постоянного веса и содержания жиров. Для этого, вес рыбы в каждой испытательной камере можно оценить по уровню веса рыбы, образцы которой наиболее часто находятся в этой камере. Рыбу, находящуюся в камере, не взвешивают.
5.2.5.2 Ежедневно следует откачивать несъеденную пищу и экскременты из испытательных камер вскоре после кормления (от 30 мин до 1 ч). По возможности обеспечивают чистоту камер в ходе проведения испытаний для поддержания концентрации органических веществ на низком уровне, поскольку наличие органического углерода может ограничить способность к бионакоплению исследуемого вещества.
5.2.5.3 Пищу необходимо проанализировать на наличие исследуемого вещества. Также рекомендуется исследовать пищу на наличие пестицидов и тяжелых металлов.
5.2.6 Свет и температура
Длина светового дня должна составлять от 12 до 16 час, температура (±2°С) должна соответствовать исследуемым видам рыб (см.
приложение B ). Вид и характеристики освещения должны соблюдаться. Необходимо помнить о возможном фотопревращении исследуемого вещества под воздействием излучения. Необходимо использовать надлежащее освещение, чтобы рыба не подвергалась воздействию неестественных фотопродуктов. В некоторых случаях, имеет смысл использовать фильтр для защиты от ультразвукового излучения длины волны менее 290 нм.
5.2.7 Исследуемые концентрации
5.2.7.2 Если используется растворяющий агент, его концентрация не должна превышать 0,1 мл/л и должна быть одинаковой во всех резервуарах для исследований. Необходимо знать его долю (вместе с исследуемым веществом) в общем содержании органического углерода в исследуемой воде. Следует избегать применения таких материалов.
5.2.8 Контрольный раствор
Контрольный раствор, содержащий воду, используемую для разбавления или, если применимо, контрольный раствор, содержащий растворяющий агент, необходимо исследовать в дополнение к серии испытаний при условии, что агент не будет воздействовать на рыбу. Если это условие не выполняется, тогда необходимо проводить исследование двух контрольных образцов.
5.2.9 Частота измерения качества воды
В ходе испытания необходимо измерять растворенный кислород, общий органический углерод, рН и температуру во всех резервуарах. Общую жесткость и минерализацию (если применимо) необходимо измерять в контрольном растворе (растворах) и одном резервуаре при высокой (самой высокой) концентрации. Растворенный кислород и минерализацию (если применимо) необходимо измерять как минимум, три раза: в начале, примерно в середине и в конце периода поглощения, и один раз в неделю в течение фазы очистки. Общий органический кислород необходимо измерять в начале испытаний (24 ч и 48 ч до начала испытаний фазы поглощения) перед добавлением рыбы и, по крайней мере, один раз в неделю, в течение обоих фаз поглощения и очистки. Температуру необходимо измерять ежедневно, рН - в начале и в конце каждого периода, а жесткость - один раз при каждом испытании. Температуру необходимо контролировать постоянно, по крайней мере, в одном сосуде.
5.3 Отбор проб и анализ рыбы и воды
5.3.1 График взятия проб рыбы и воды
5.3.1.1 Пробу воды берут в испытательных камерах для определения концентрации исследуемого вещества перед добавлением рыбы в течение обеих фаз поглощения и очистки. Следует взять пробу воды в то же время, что и пробу рыбы, а также перед кормлением. В течение периода поглощения определяются концентрации исследуемого вещества для проверки соответствия критерию надежности.
5.3.1.3 Пример приемлемого графика отбора проб приведен в
5.3.1.4 Отбор проб продолжают в течение фазы поглощения в течение 28 сут, если только до истечения этого периода не будет достигнуто стационарное состояние. Если стационарное состояние не будет достигнуто в течение 28 сут, продолжают отбор до момента его достижения или в течение 60 сут, в зависимости от того, какой период окажется короче. Перед началом фазы очистки перемещают рыбу в чистые резервуары.
5.3.2 Отбор проб и подготовка проб
5.3.2.2 Отбирают нужное количество рыбы (обычно минимум четыре) из испытательных камер во время отбора каждой пробы. Быстро ополаскивают отобранную рыбу водой, промокают, сразу же убивают, используя наиболее подходящий гуманный метод, и взвешивают.
5.3.2.3 Желательно проанализировать рыбу и воду немедленно после взятия проб для того, чтобы предотвратить деградацию или другие потери и рассчитать приблизительные значения величин поглощения и очищения пока испытание продолжается. Незамедлительное проведение анализа также предотвращает задержку в определении фазы плато.
5.3.2.4 Если анализ не был проведен немедленно, обеспечивают хранение пробы подходящим способом. Перед началом анализа необходимо найти информацию о подходящем способе хранения для определенного исследуемого вещества - например, глубокая заморозка, хранение при 4°С, продолжительность хранения, отбор и т.д.
5.3.3 Качество аналитического метода
5.3.4 Анализ проб рыб
5.3.4.1 Если в испытании используют меченые радиоактивным изотопом соединения, можно проанализировать общее число радиоактивных изотопов (т.е. исходных веществ и их метаболитов), или можно очистить пробы для проведения отдельного анализа исходного соединения. Также можно охарактеризовать основные метаболиты в стационарном состоянии или в конце периода поглощения в зависимости от того, что наступит ранее.
5.3.4.2 Для каждой отдельно взвешенной рыбы обычно требуется определять концентрацию исследуемого вещества. Если это невозможно, следует выполнить объединение проб при каждом их отборе, однако данное объединение будет ограничивать возможности статистической обработки данных. Если использование определенной методики статической обработки данных и статистическая мощность являются важными параметрами, тогда для выполнения объединения проб, обеспечения применимости статистической обработки и требуемой статистической мощности в испытании необходимо использовать соответствующее количество рыб.
6 Данные и отчетность
6.1 Обработка результатов
6.2 Интерпретация результатов
6.2.1 Если измеренные значения концентраций исследуемых растворов находятся на уровнях, близко расположенных к пределу чувствительности аналитического метода, результаты должны толковаться с осторожностью.
6.3 Отчет об испытаниях
6.3.1 Отчет об испытаниях должен включать в себя следующую информацию:
- Исследуемое вещество:
- физические свойства и, если применимо, физико-химические свойства;
- данные по идентификации химического вещества (включая содержание органического углерода, если применимо);
- если применялась радиоактивная метка, точное положение меченого(ых) атома(ов) и процентное соотношение радиоактивности вследствие загрязнения.
- Образцы при проведении испытаний:
- научное название, источник, любая предварительная обработка, акклиматизация, возраст, размерный ряд и т.д.
- Условия проведения испытаний:
- используемая процедура испытаний (например, проточная или полустатическая);
- тип и характеристики используемого освещения и длина(ы) светового дня;
- план испытаний (например, количество и размер испытательных камер, частота замены воды, количество повторений, количество рыб при повторении, количество исследуемых концентраций, длина фаз поглощения и очистки, частота отбора проб рыбы и воды);
- метод подготовки исходных растворов и частота их обновления (необходимо предоставить данные о растворяющем агенте, его концентрации и его доле в содержании органического углерода исследуемой воды, при использовании);
- номинальные пробные концентрации, значения измеряемых величин и их стандартные отклонения в испытательных резервуарах и метод, согласно которому они были получены;
- источник воды, использованной для разведения, описание какой-либо предварительной обработки, результаты какого-либо показа способности исследуемой рыбы жить в воде и водные характеристики: рН, жесткость, температура, концентрация растворенного кислорода, уровни остаточного хлора (при наличии данных), общий органический углерод, взвешенные твердые частицы, минерализация исследуемой среды (если применимо) и любые другие проведенные измерения;
- качество воды в испытательных сосудах, рН, жесткость, общий органический углерод, температура и концентрация растворенного кислорода;
- подробная информация о кормлении [например, тип пищи, источник, состав (по крайней мере), содержание жиров и белков (при наличии данных) предоставленное количество и частота];
- информация об обработке проб рыбы и воды, включая подробности о подготовке, хранении, отборе и аналитических процедурах (и воспроизводимости) для исследуемого вещества и содержании жиров (если оно было измерено).
Результатами являются:
- результаты любых выполненных предварительных исследований;
- смертность рыбы в контрольных исследованиях и рыбы в каждой испытательной камере и любое наблюдаемое аномальное поведение;
- содержание жиров в рыбе (при определении в случае испытаний);
- кривые (включая все измеряемые данные), показывающие поглощение и выведение исследуемого химического вещества в рыбе, время достижения стабильного состояния;
- использованные вещества с радиоактивной меткой и, если необходимо, накопление любых обнаруженных метаболитов;
- что-либо необычное в испытании, любое отклонение от методик и любая другая сопутствующая информация.
6.3.2 Минимизируют количество результатов из-за "необнаружения на пределе чувствительности" предварительной проработкой методов и экспериментального планирования, т.к. такие результаты не могут использоваться для расчета констант скорости реакции.
Приложение A
(справочное)
Некоторые химические характеристики приемлемой воды для разведения
Таблица A.1
|
|
Вещество | Предельная концентрация |
Твердые примеси | 5 мг/л |
Общий органический углерод | 2 мг/л |
Неионизированный аммиак | 1 г/л |
Остаточный хлор | 10 г/л |
Всего фосфороорганических пестицидов | 50 нг/л |
Всего хлорорганических пестицидов плюс полихлорированных бифенилов | 50 нг/л |
Общий органический хлор | 25 нг/л |
Алюминий | 1 г/л |
Мышьяк | 1 г/л |
Хром | 1 г/л |
Кобальт | 1 г/л |
Медь | 1 г/л |
Железо | 1 г/л |
Свинец | 1 г/л |
Никель | 1 г/л |
Цинк | 1 г/л |
Кадмий | 1 г/л |
Ртуть | 100 нг/л |
Серебро | 100 нг/л |
Приложение B
(рекомендуемое)
Виды рыб, рекомендуемые для испытаний
Таблица B.1
|
|
|
Рекомендованные виды | Рекомендованный интервал температур для испытаний, °С | Рекомендованная общая длина исследуемой особи, см |
Danio rerio (Teleostei, Cyprinidae) (Гамильтог-Бучанан) Полосатая перцина | 20-25 | 3,0±0,5 |
Pimephales promelas (Teleostei, Cyprinidae) (Рафинеске) Толстоголовый гольян | 20-25 | 5,0±2,0 |
Cyprinus carpio (Teleostei, Cyprinidae) (Линнаес) Карп | 20-25 | 5,0±3,0 |
Oryzias latipes (Teleostei, Poecilliidae) (Темминк и Шлегель) Японская оризия или медак | 20-25 | 4,0±1,0 |
Poecilia reticulata (Teleostei, Poeciliidae) (Питерс) Гуппи | 20-25 | 3,0±1,0 |
Lepomis macrochirus (Teleostei Centrarchidae) (Рафинеске) Синежаберный солнечник | 20-25 | 5,0±2,0 |
Oncorhynchus mykiss (Teleostei Salmonidae (Валбаум) Радужная форель | 13-17 | 8,0±4,0 |
Gasterosteus aculeatus (Teleostei, (Gasterosteidae) (Линнаес) Обыкновенная трехиглая корюшка* | 18-20 | 3,0±1,0 |
Примеры разные эстуарных и морских видов рыб, которые использовались в различных странах, например:
|
|
Спот
| (Leiostomus xanthurus) |
Изменчивый карпозубик
| (Cyprinodon variegatus) |
Атеринка
| (Menidia beryllina) |
Шайнер
| (Cymatogaster agregate) |
Морской язык
| (Parophrys vetulus) |
Шлемоносец
| (Leptocottus armatus) |
Обыкновенная трехиглая колюшка
| (Gasterosteus aculeatus) |
Морской окунь
| (Dicentracus labrax) |
Уклейка | (Alburnus alburnus) |
Коллекция
Пресноводную рыбу, перечисленные виды которой приведены выше, легко разводить и/или легко находить в течение всего года, тогда как доступность морских и эстуарных видов частично ограничена соответствующими странами. Их можно разводить и выращивать в рыбном хозяйстве или в лаборатории, при условии соблюдения санитарных мер безопасности (отсутствие заболеваний и паразитов) для того, чтобы исследуемые особи были здоровы, а их происхождение было известно. Такие рыбы доступны во многих странах мира.
Приложение C
(рекомендуемое)
Прогноз длительности фаз поглощения и очистки
C.1 Прогноз длительности фазы поглощения
Другие соотношения приведены в [13].
или
Уравнение (C.3) может быть преобразовано следующим образом:
или
Время для достижения 80% "стационарного состояния" вычисляется по уравнению (C.4)
или
Аналогично 95% "стационарного состояния" равняются:
up (80%)=1,6/0,652, т.е. 2,45 дней (59 час),
up (95%)=3,0/0,652, т.е. 4,60 дней (110 час).
up (80%)=1,6/0,246, т.е. 6,5 дней (156 час),
up (95%)=3,0/0,246, т.е. 12,2 дней (293 час).
В качестве альтернативы, уравнение:
может быть использовано при расчете времени для достижения фактического стационарного состояния, см. [14].
C.2 Прогноз продолжительности фазы очистки
Прогноз времени, требуемого для уменьшения концентрации веществ в организме к некоторому процентному соотношению исходной концентрации также может быть получен из общего уравнения, описывающего поглощение и выведение (уравнение скорости реакции первого порядка), см. [13] и [20].
или
или
Аналогично 95% очистки будет достигнуто при:
Необходимо отметить, что расчеты основаны на предположении, что модели поглощения и очистки будут соответствовать кинетике первого порядка. Если кинетика первого порядка очевидно не соблюдается, необходимо использовать более сложные модели.
Приложение D
(справочное)
Таблица D.1
|
|
|
|
|
Отбор проб рыб | График отбора проб | |||
| Минимально требуемая частота (дни) | Дополнительный отбор проб (дни) | N пробы воды | N рыбы в пробе |
Фаза поглощения | -1 |
| 2 |
|
| 0 |
| 2 | Добавление 45-80 рыб |
1 | 0,3 |
| 2 | 4 |
|
| 0,4 | (2) | (4) |
2 | 0,6 |
| 2 | 4 |
|
| 0,9 | (2) | (4) |
3 | 1,2 |
| 2 | 4 |
|
| 1,7 | (2) | (4) |
4 | 2,4 |
| 2 | 4 |
|
| 3,3 | (2) | (4) |
5 | 4,7 |
| 2 | 6 |
Фаза очистки |
|
|
| Перенос рыбы в воду, не содержащую химическое вещество |
6 | 5,0 |
|
| 4 |
|
| 5,3 |
| (4) |
7 | 5,9 |
|
| 4 |
|
| 7,0 |
| (4) |
8 | 9,3 |
|
| 4 |
|
| 11,2 |
| (4) |
9 | 14,0 |
|
| 6 |
|
| 17,5 |
| (4) |
Проба воды после минимум трех "камер" была выполнена. Величины в скобках - число проб (воды, рыбы), которое необходимо взять, если выполняется дополнительный отбор проб. Примечание - Расчет до испытаний для 4,0 равно 0,652 дней . Общая продолжительность эксперимента установлена как 3·up=3·4,6 дней, т.е. 14 дней.
Расчет поглощения (up) см. в приложении C .
|
Приложение E
(рекомендуемое)
Двухкомпонентная модель
E.1 Различие моделей
Считается, что большинство данных по биоконцентрации "обоснованно" хорошо описываются простой двухкомпонентной/двухпараметрической моделью, что отражается прямолинейным участком кривой, проходящей через точки, соответствующие концентрациям вещества в рыбе в течение фазы выведения, при их нанесении на полулогарифмическую бумагу.
|
Отклонения от прямой линии могут означать более сложную модель выведения, чем кинетика первого порядка.
Графический метод можно применять для растворяющих методов выведения, отклоняющихся от кинетики первого порядка.
E.4 Компьютерный метод расчета констант скорости поглощения и очистки (потери)
Библиография
|
|
[1] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 305 B bioconcentration: Flow-through Fish Test, 1996 |
[2] | CEC, Bioaccumulation of chemical substances in fish: the flow-through method - Ring Test Programme, 1984-1985 Final report, March 1987. Authors: P. Kristensen and N. Nyholm |
[3] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 105: Water Solubility, July 1995 |
[4] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 107: Partition Coefficient (n-octanol/water): Shake Flask Method, July 1995 |
[5] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 117: Partition Coefficient (n-octanol/water), HPLC Method, Nov 2004 |
[6] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 111: Hydrolysis as a Function of pH. Nov 2004 |
[7] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 115: Surface Tension of Aqueous Solutions. July 1995 |
[8] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 104: Vapour Pressure, July 2006 |
[9] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 123: Partition Coefficient (1-Octanol/Water): Slow-Stirring Method, July 2006 |
[10] | Direct Phototransformation of chemicals in water. Environmental Health and Safety Guidance Document Series on Testing and Assessment of Chemicals No. 3 |
[11] | OECD guidelines for testing of chemicals. Test No. 301: Ready Biodegradability, July 1992 |
[12] | ASTM E-1022-84 (Reapproved 1988). Standard Practice for conducting Bioconcentration Tests with Fishes and Saltwater Bivalve Molluscs |
[13] | Spacie A. and Hamelink J.L. (1982). Alternative models for describing the bioconcentration of organics in fish. Env. Toxicol. and Chemist. Vol. 1 |
[14] | Kristensen P. (1991). Bioconcentration in fish: comparison of bioconcentration factors derived from OECD and ASTM testing methods; influence of particulate organic matter to the bioavailability of chemicals. Water Quality Institute, Denmark |
[15] | Chiou C.T. and Schmedding D.W. (1982). Partitioning of organic compounds in octanolwater systems. Environ. Sci. Technol. Vol. 16 (1) |
[16] | Hawker D.W. and Connell D.W. (1988). Influence of partition coefficient of lipophilic compounds on bioconcentration kinetics with fish. Wat. Res. 22 (6) |
[17] | Branson D.R., Blau G.E., Alexander H.C. and Neely W.B. (1975). Transactions of the American Fisheries Society, 104 (4) |
[18] | Ernst W. (1985). Accumulation in Aquatic Organisms. In: Appraisal of tests to predict the environmental behaviour of chemicals. 1985 SCOPE, John Wiley & Sons Ltd., New York. |
[19] | Reilly P.M., Bajramovic R., Blau G.E., Branson D.R. and Sauerhoff M.W. (1977). Guidelines for the optimal design of experiments to estimate parameters in first order kinetic models, Can. J. Chem. Eng. |
[20] | H. and Van Leeuwen K. (1980). Toxicokinetics in Fish: Accumulation and Elimination of Six Chlorobenzenes by Guppies. Chemosphere |
[21] | US Food and Drug Administration. Revision. Pesticide analytical manual. Vol. 1. 5600 Fisher’s Lane, Rockville, MD 20852, July 1975 |
[22] | US EPA (1974). Section 5, A(1) Analysis of Human or Animal Adipose Tissue, in Analysis of Pesticide Residues in Human and Environmental Samples, Thompson J.F. (ed), Research Triangle Park, N.C; 27711 |
[23] | Compaan H. (1980) in The determination of the possible effects of chemicals and wastes on the aquatic environment: degradation, toxicity, bioaccumulation. Ch. 2.3 in Part II. Government Publishing Office, The Hague, The Netherlands |
[24] | Gardner et al. (1995). Limnol. & Oceanogr., 30:1099-1105 |
[25] | Randall R.C., Lee H., Ozretich R.J., Lake J.L. and Pruell R.J. (1991). Evaluation of selected lipid methods for normalizing pollutant bioaccumulation. Environ. Toxicol. Chem. Vol. 10, p.1431-1436 |
|
|
УДК 658.382.3:006.354 | МКС 71.040.50 |
| |
Ключевые слова: химическая продукция, воздействие на окружающую среду, окружающая среда, острая токсичность, рыбы |