ГОСТ 23454-79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ (с Изменениями N 1, 2, 3, 4).
ГОСТ 23454-79
Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО
Методы определения ингибирующих веществ
Milk. Methods for determination of the inhibitors
МКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 1980-01-01
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 30 января 1979 г. N 334 дата введения установлена с 01.01.80
Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
Изменение N 4 принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 11 от 25.04.97)
Зарегистрировано Техническим секретариатом МГС N 2499
За принятие изменения проголосовали:
Наименование государства | Наименование национального органа по стандартизации |
Азербайджанская Республика | Азгосстандарт |
Республика Армения | Армгосстандарт |
Республика Беларусь | Госстандарт Республики Беларусь |
Кыргызская Республика | Кыргызстандарт |
Республика Молдова | Молдовастандарт |
Российская Федерация | Госстандарт России |
Туркменистан | Главгосинспекция "Туркменстандартлары" |
Республика Узбекистан | Узгосстандарт |
Украина | Госстандарт Украины |
ИЗДАНИЕ (август 2009 г.) с Изменениями N 1, 2, 3, 4, утвержденными в январе 1985 г., сентябре 1987 г., декабре 1991 г., августе 1997 г. (ИУС 4-85, 1-88, 4-92, 11-97).
Настоящий стандарт распространяется на молоко и устанавливает методы определения ингибирующих веществ, к которым относятся: антибиотики, формалин, перекись водорода и другие моющие, дезинфицирующие и консервирующие вещества.
1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
1.1. Методы отбора проб молока и подготовки их к анализу - по ГОСТ 9225-84.
До проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре (6±2) °С не более суток.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ С ИНДИКАТОРОМ РЕЗАЗУРИНОМ
2.1. Сущность метода
Метод основан на восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизма вида Streptococcus thermophilus.
(Измененная редакция, Изм. N 2, 3).
2.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89* или стерилизаторы аналогичного типа.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285-96).
Редуктазник по нормативному документу или баня водяная, обеспечивающая регулирование температуры от 30 до 50 °С, или баня водяная без терморегуляции, помещаемая в термостат.
Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 50 °С с отклонением от заданной ±1 °С.
Холодильник бытовой по ГОСТ 16217-83.
Термометры стеклянные жидкостные (нертутные) типа Б, диапазон измерения температуры от 0 до 100 °С по ГОСТ 28498-90.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88*.
________________
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001.
Пробирки стеклянные типов П1 и П2, высотой (150±5) мм и диаметром (16±1) мм по ГОСТ 25336-82.
Пипетки 1-1-1; 4-1-1; 2-1-10 по ГОСТ 29169-91.
Штатив для пробирок.
Петля бактериологическая.
Пробки резиновые конусные по нормативному документу.
Резазурино-натриевая соль по нормативному документу, основной раствор.
Препарат сухой для контроля определения ингибирующих веществ в молоке (СКИВ) по нормативному документу.
Тест-культура для определения ингибирующих веществ (Streptococcus thermophilus штамм 2 КС) по нормативному документу.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
Молоко обезжиренное кислотностью не более 19 °Т, получаемое из коровьего молока не ниже 2-го сорта по ГОСТ 13264-88* или молоко сухое обезжиренное по ГОСТ 10970-87**, предварительно восстановленное и проверенное на отсутствие ингибирующих веществ.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52054-2003.
** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 52791-2007.
Препарат бактериальный молочнокислого термофильного стрептококка для определения ингибирующих веществ в молоке "Интест" - по нормативному документу.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3, 4).
2.3. Подготовка к анализу
2.3.1а. Приготовление стерильного обезжиренного молока
(Введен дополнительно, Изм. N 3).
(Измененная редакция, Изм. N 2).
2.3.2. Приготовление коллекционной тест-культуры
Термостатируют при температуре (41±1) °С в течение 12-18 ч до образования плотного сгустка, затем охлаждают до температуры (6±2) °С и используют для приготовления коллекционной тест-культуры.
Коллекционную культуру хранят при температуре (6±2) °С и перевивают через 10-14 сут.
Через 3-4 пересадки ее снова готовят из сухой.
Допускается использовать культуру дольше, если она не утратила своей активности и по микроскопическому препарату соответствует предъявленным требованиям (продолжительность сквашивания при перевивке 16-18 ч, сгусток плотный; консистенция однородная, допускается мягкая крупитчатость или вязкая; в поле зрения микроскопа в препарате тест-культуры - диплококки одиночные или собранные в цепочки).
2.3.3. Приготовление рабочей тест-культуры
2.3.3.1. Рабочую тест-культуру готовят из коллекционной в пробирках или бутылочках в зависимости от необходимого количества или из сухого бактериального препарата термофильного молочнокислого стрептококка для определения ингибирующих веществ.
Полученную рабочую тест-культуру используют для проведения анализа.
В случае необходимости культуру помещают в холодильник при температуре (6±2) °С и используют в течение суток.
Непосредственно перед применением рабочую культуру перемешивают путем интенсивного встряхивания.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3).
Культуру используют для проведения анализа.
Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата, предназначена для анализа 30 проб исследуемого молока. При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) °С и используют в течение не более 8 ч.
Полученную бактериальную суспензию используют для проведения анализов спустя 30 мин с целью полного растворения и активизации препарата.
Одна порция (флакон) культуры, приготовленной из препарата "Интест" предназначена для анализа 30 проб исследуемого молока.
При необходимости культуру хранят при температуре (6±2) °С и используют для проведения анализов в течение не более 72 ч.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3, 4).
2.3.4. Подготовка посуды и резиновых пробок
Новую посуду кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты с массовой долей соляной кислоты от 1 до 2%) в течение 15 мин.
В один конец пипетки, предназначенной для внесения тест-культуры, вкладывают кусочек ваты.
Посуду, предназначенную для приготовления и внесения тест-культуры, стерилизуют по ГОСТ 9225-84.
Резиновые пробки помещают в стеклянную посуду с дистиллированной водой и стерилизуют в автоклаве при 0,1 МПа в течение 20 мин. При отсутствии автоклава резиновые пробки кипятят непосредственно перед испытанием в дистиллированной воде или конденсате в течение 30 мин.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
2.4. Проведение анализа
При наличии большого количества проб исследуемого молока анализ проводят сериями. Количество пробирок с исследуемым молоком в каждой серии не более 20.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
Содержимое пробирок тщательно перемешивают трехкратным перевертыванием. Затем пробирки выдерживают в течение 1 ч 15 мин при температуре (46±1) °С в редуктазнике или водяной бане.
(Измененная редакция, Изм. N 3).
(Измененная редакция, Изм. N 2).
2.4.5. Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане с терморегулятором или водяной бане, помещенной в термостат при (46±1) °С в течение 10 мин.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2, 3).
2.5. Обработка результатов
2.5.1. При отсутствии в исследуемом молоке ингибирующих веществ (и в контрольной пробе) содержимое пробирок будет иметь розовый или белый цвет.
При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь окраску, характерную для молока 1 класса по цветовой шкале для определения класса по редуктазной пробе с резазурином по ГОСТ 9225-84.
(Измененная редакция, Изм. N 3).
3. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ С ИНДИКАТОРОМ МЕТИЛЕНОВЫМ ГОЛУБЫМ
3.1. Сущность метода
Метод основан на восстановлении метиленового голубого при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизмов вида Streptococcus thermophilus.
3.2. Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура - по п.2.2.1.
Пенициллин (бензилпенициллина калиевая или натриевая соль) по ГФ СССР-X.
Молоко обезжиренное стерильное, приготовленное по ГОСТ 9225-84.
Тест-культура коллекционная (штамм Streptococcus thermophilus).
Вода питьевая по ГОСТ 2874-82*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51232-98.
Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88.
3.1, 3.2. (Измененная редакция, Изм. N 2).
3.3. Подготовка к анализу
3.3.1. Приготовление коллекционной и рабочей тест-культуры проводят в соответствии с пп.2.3.2 и 2.3.3.
3.3.2. Приготовление водного раствора пептона
3.3.3. Приготовление водного раствора метиленового голубого
3.3.4. Приготовление смеси для анализа
3.3.2, 3.3.3, 3.3.4 (Измененная редакция, Изм. N 2).
3.4. Проведение анализа
(Измененная редакция, Изм. N 2, 3).
3.5. Обработка результатов
3.5.1. При отсутствии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь белый цвет.
При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь голубой цвет. Голубое кольцо, образующееся в пробирке на поверхности молока высотой 1 см, не учитывают.