ГОСТ 34049-2017 Молоко и кисломолочные продукты. Определение содержания афлатоксина М(1) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием.

    ГОСТ 34049-2017

 МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 МОЛОКО И КИСЛОМОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

 Определение содержания афлатоксина

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием

 Milk and milk products. Determination of aflatoxin

by high-performance liquid chromatography with fluorimetric (spectrofluorometric) detection

МКС 17.020

Дата введения 2020-07-01

 Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены

ГОСТ 1.0  "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и

ГОСТ 1.2  "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ТОО "КазВод-Консалтинг"

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства по инвестициям и развитию Республики Казахстан

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 января 2017 г. N 95-П)

За принятие проголосовали:

4

Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 декабря 2019 г. N 1441-ст  межгосударственный стандарт ГОСТ 34049-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2020 г.

5 Настоящий стандарт соответствует требованиям международного стандарта ISO 5725-6:1994* "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

Настоящий стандарт подготовлен путем переоформления национального стандарта Республики Казахстан СТ РК 2388-2013 "Молоко и кисломолочные продукты. Определение содержания афлатоксина

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием"

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация также будет опубликована в сети Интернет на сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методику выполнения измерений массовой доли афлатоксина

в молоке и кисломолочных продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с использованием жидкостного хроматографа с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектированием.

Допустимый уровень содержания афлатоксина

в молоке и кисломолочных продуктах составляет не более 0,0005 мг/кг в сырье, предназначенном для производства детского питания, и в готовых продуктах детского и диетического питания - менее 0,00002 мг/кг.

Диапазон измеряемых значений массовой доли афлатоксина

(масса навески пробы от 5 до 25 г в зависимости от вида продукции) составляет от 0,00002 до 0,0005 мг/кг.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 8.010  Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений. Основные положения

ГОСТ 8.513 * Государственная система обеспечения единства измерений. Поверка средств измерений. Организация и порядок проведения

_______________

* Утратил силу на территории Российской Федерации с 01.12.2001 г.

ГОСТ 12.0.004  Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004  Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005  Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007  Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019  Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009  Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 908  Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия

ГОСТ 1770  Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603  Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3622  Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 4201  Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4328  Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5644  Сульфит натрия безводный

ГОСТ ИСО 5725-6-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

_______________

* На территории Российской Федерации действует

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002  "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

ГОСТ 9656  Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 20015  Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 22967  Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 24104 ** Весы лабораторные. Общие технические требования

_______________

** На территории Российской Федерации действует

ГОСТ OIML R 76-1-2011  "Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

ГОСТ 25336  Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809.1  Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752  Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28311  Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 2922* (ИСО 386-77) Посуда лабораторная стеклянная. Термометры жидкостные стеклянные лабораторные. Принципы устройства, конструирования и применения

ГОСТ 29227  (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ПМГ 06-2001  Правила по межгосударственной стандартизации. Порядок признания результатов испытаний и утверждения типа, поверки, метрологической аттестации средств измерений

РМГ 29-2013  Рекомендации по межгосударственной стандартизации. Государственная система обеспечения единства измерений. Метрология. Основные термины и определения

РМГ 61-2010  Рекомендации по межгосударственной стандартизации. Государственная система обеспечения единства измерений. Показатели точности, правильности, прецизионности методик количественного химического анализа. Методы оценки

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по

ГОСТ 8.010 , ГОСТ ИСО 5725-6,

РМГ 29 ,

ПМГ 06 .

      4 Приписанные характеристики погрешности измерений

4.1 Стандарт обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблице 1.

Таблица 1

Диапазон измерений*, мг/кг	Относительное среднее квадратическое отклонение (СКО)		Показатель точности** (доверительные границы
	Показатель повторяемости , %	Показатель воспроизводимости , %	относительной погрешности для Р =0,95) , %
От 0,00002 до 0,0005 включ.	8	16	32
* 1 мг/кг соответствует 1 млн .   ** Соответствует расширенной неопределенности результатов анализа при коэффициенте охвата k=2 при Р=0,95.

4.2 Значения показателей точности методики используют при:

- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;

- оценке качества проведения измерений (испытаний) в лаборатории;

- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики в конкретной лаборатории.

      5 Средства измерений и вспомогательные устройства, материалы и реактивы

5.1 Средства измерений и вспомогательные устройства

5.1.1 Жидкостный хроматограф с флуориметрическим (спектрофлуориметрическим) детектором, обеспечивающим возбуждение флуоресценции в диапазоне длин волн (360±20) нм и регистрацию интенсивности флуоресценции в диапазоне длин волн от (430±20) нм. Применяемый детектор должен обеспечивать предел обнаружения афлатоксина

в подвижной фазе не менее 1 нг/см

.

5.1.2 Весы лабораторные общего назначения высокого или среднего класса точности с наибольшим пределом взвешивания 220 г и ценой деления 0,01 г по

ГОСТ 24104 .

5.1.3 Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2 по

ГОСТ 1770 .

5.1.4 Пипетки, градуированные 2-го класса точности вместимостью 1; 2; 5; 10 см

по

ГОСТ 29227 .

5.1.5 Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25; 50; 100; 1000 см

по

ГОСТ 1770 .

5.1.6 Государственный стандартный образец (далее - ГСО) состава раствора афлатоксина

в ацетонитриле или смеси бензол-ацетонитрил 98:2 (массовая концентрация 1 мкг/см

погрешность ±10%), например ГСО 7935-2001.

Применяемые средства измерений должны быть внесены в реестр государственной системы обеспечения единства измерений государств, принявших настоящий стандарт, по результатам испытаний с целью утверждения типа в установленном в государствах порядке или метрологической аттестации в соответствии с

ПМГ 06  и поверены в соответствии с

ГОСТ 8.513 .

Допускается использование других средств измерений и стандартных образцов с аналогичными или более высокими метрологическими характеристиками.

Для внесения добавок и приготовления растворов в небольших объемах рекомендуется использовать одноканальные пипеточные дозаторы вместимостью от 200 до 1000 мм

с погрешностью дозирования не более ±2%.

5.2 Средства вывода информации

5.2.1 Сбор, обработка данных и вывод результатов анализа осуществляются с помощью персонального компьютера, на котором установлена программа сбора и обработки хроматографических данных.

5.3 Вспомогательное оборудование и материалы

5.3.1 Хроматографическая колонка, заполненная обращенно-фазовым сорбентом С18, с предколонкой, заполненной тем же сорбентом, обеспечивающая число теоретических тарелок для пика афлатоксина

не менее 2000, например хроматографическая колонка длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом Кромасил С18 с зернением 5 мкм. Допускается использование колонок иных типоразмеров, заполненных аналогичными сорбентами, при условии, что они обеспечивают указанное выше число теоретических тарелок.

5.3.2 Устройство для измельчения пробы (микроизмельчитель тканей любого типа, лабораторная мельница или кофемолка).

5.3.3 Перемешивающее устройство с подогревом или водяная баня любого типа с регулятором температуры по действующим в государствах, принявших настоящий стандарт, нормативным документам.

5.3.4 Дозаторы пипеточные любой марки переменного тока вместимостью от 100 до 1000 мм

с метрологическими характеристиками по

ГОСТ 28311 .

5.3.5 Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 25; 50; 100; 500 см

по

ГОСТ 1770 .

5.3.6 Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10; 50; 500 см

по

ГОСТ 1770 .

5.3.7 Пробирка для микропроб однократного применения, вместимость 1,5 см

.

5.3.8 Насос лабораторный вакуумный, мембранный или водоструйный по

ГОСТ 25336 , обеспечивающий разрежение от 20 мм рт.ст. до 75 мм рт.ст.

5.3.9 Центрифуга лабораторная любого типа, частота вращения не менее 5000 об/мин.

5.3.10 Пробирки для центрифугирования пластиковые вместимостью 30 см

.

5.3.11 Воронки делительные вместимостью 250 см

по

ГОСТ 25336 .

5.3.12 Воронки химические диаметром 60 мм по

ГОСТ 25336 .

5.3.13 Колбы плоскодонные вместимостью 250 см

по

ГОСТ 25336 .

5.3.14 Колбы остродонные для упаривания вместимостью 30 см

по

ГОСТ 25336 .

5.3.15 Баня водяная с диапазоном от 30°С до 90°С, предел допускаемой погрешности не более ±1°С, погрешность стабилизации температуры в рабочей камере не более ±1°С.

5.3.16 Фильтры бумажные "красная лента", средняя скорость фильтрации 450 с (время по Херцбергу), пределы задержания от 2 мкм до 4 мкм, содержание золы 0,004% по действующим в государствах, принявших настоящий стандарт, нормативным документам.

5.3.17 Концентрирующие патроны для подготовки проб методом твердофазной экстракции (далее - ТФЭ), с содержанием силикагеля 1 см

или 3 см

по нормативным документам, действующим в государствах, принявших настоящий стандарт.

5.3.18 Шприцы медицинские вместимостью 20 см

по

ГОСТ 22967 .

5.3.19 Часы по

ГОСТ 27752 .

5.3.20 Термометр по

ГОСТ 29224 .

5.4 Реактивы

5.4.1 Реактивы для приготовления деконтаминационного раствора - раствора для разрушения афлатоксина

после анализа (требования безопасности) - приведены в приложении А.

5.4.2 Хлорамин, х.ч., массовая доля активного хлора 25%.

5.4.3 Гидроокись натрия, х.ч., по

ГОСТ 4328 .

5.4.4 Борная кислота, х.ч., по

ГОСТ 9656 .

5.4.5 Натрий углекислый кислый, ч.д.а., по

ГОСТ 4201 .

5.4.6 Натрий хлористый по

ГОСТ 4328 .

5.4.7 Хлороформ по

ГОСТ 20015 .

5.4.8 Лимонная кислота по

ГОСТ 908 ;

5.4.9 Трифторуксусная кислота по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.

5.4.10 Ацетон по

ГОСТ 2603 .

5.4.11 Ацетонитрил чистый для анализа по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.

5.4.12 Изопропонол чистый по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.

5.4.13 Натрий безводный по

ГОСТ 5644 .

Допускается использование реактивов аналогичной или более высокой квалификации, изготовленных по другим нормативным документам.

      6 Метод измерения

6.1 Метод определения массовой доли афлатоксина

в молоке и кисломолочных продуктах основан на последовательном проведении следующих операций:

- экстракция афлатоксина

из образца;

- очистка экстракта методом ТФЭ с использованием концентрирующего патрона для подготовки проб методом ТФЭ;

- перевода афлатоксина

в интенсивно флуоресцирующее соединение обработкой трифторуксусной кислотой и определение массовой доли афлатоксина

в форме его производного методом обращенно-фазовой хроматографии с флуориметрическим детектированием.

      7 Требования безопасности

7.1 При выполнении измерений массовой доли афлатоксина

необходимо соблюдать требования техники безопасности:

- техники безопасности при работе с химическими реактивами по

ГОСТ 12.1.007 ;

- электробезопасности при работе с электроустановками по

ГОСТ 12.1.019 ;

7.2 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по

ГОСТ 12.1.004  и иметь средства пожаротушения по

ГОСТ 12.4.009 .

7.3 Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по

ГОСТ 12.1.005 .

7.4 Организацию обучения работающих безопасным методам труда проводят по

ГОСТ 12.0.004 .

7.5 При работе с афлатоксином

следует соблюдать особую осторожность из-за его высокой токсичности. Основные условия и правила работы приведены в приложении А.

      8 Требования к квалификации оператора

8.1 К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное образование и опыт работы в химической лаборатории, прошедшего соответствующий инструктаж, освоившего метод анализа в процессе обучения и получившего удовлетворительные результаты при оперативном контроле процедуры измерений.

      9 Условия выполнения измерений

9.1 При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

- температура воздуха - (20±5)°С;

- атмосферное давление - от 84,0 до 106,7 кПа (от 630 до 800 мм рт.ст.);

- влажность воздуха - не более 80% при температуре 25°С;

- напряжение в сети - (220±22) В;

- частота переменного тока - 50 гц.

      10 Подготовка к выполнению измерений

10.1 Перед выполнением измерений должны быть проведены следующие работы: отбор проб по

ГОСТ 3622  и

ГОСТ 26809.1 , подготовка стеклянной посуды, приготовление растворов, проверка и градуировка хроматографа, контроль чистоты растворителей, подготовка пробы к анализу.

10.2 Отбор проб

10.2.1 Отбор проб проводится в соответствии с нормативными документами на данный вид продукции по

ГОСТ 3622  и

ГОСТ 26809.1 .

Анализ необходимо провести в течение 3 суток с момента отбора при условии хранения проб при температуре, предусмотренной для хранения данного вида продукции.

Отобранную пробу при необходимости измельчают. Количество пробы, отбираемой для анализа, составляет не менее 100 г.

10.3 Подготовка стеклянной посуды

10.3.1 Посуду для приготовления и хранения подвижной фазы моют только серной кислотой (без применения других моющих средств) и ополаскивают дистиллированной водой и ацетонитрилом по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших настоящий стандарт.

10.3.2 Остальную стеклянную посуду моют горячей водой с моющим средством, тщательно ополаскивают дистиллированной водой и сушат при температуре 105°С. Посуда, находившаяся в контакте с афлатоксином

, подлежит обработке в соответствии с приложением А.

      11 Приготовление растворов

11.1 При приготовлении и хранении растворов недопустимо использование резиновых и корковых пробок. Приготовленные растворы должны храниться в условиях, исключающих испарение компонентов смеси.

11.2 Смешанный раствор хлористого натрия (массовая доля 20%) и лимонной кислоты (массовая доля 2,4%).

11.2.1 В плоскодонную колбу вместимостью 250 см

помещают 40 г хлористого натрия, 4,8 г лимонной кислоты и растворяют в 155 см

дистиллированной воды. Срок хранения - 3 мес.

11.3 Смесь ацетонитрил-изопропанол-вода в объемном соотношении 6:9:85 (подвижная фаза, далее - ПФ).

11.3.1 В мерный цилиндр вместимостью 500 см

помещают 30 см

ацетонитрила и 45 см

изопропанола. Доводят объем смеси до 500 см

дистиллированной водой. Раствор переливают в заранее подготовленную стеклянную плотно закрывающуюся емкость для постоянного хранения и тщательно в ней перемешивают. Срок хранения - 2 мес.

11.4 Смесь хлороформ-ацетон, объемное соотношение 4:1.

11.4.1 В плоскодонную колбу вместимостью 250 см

помещают 40 см

ацетона, 160 см

хлороформа и 5 г безводного натрия сернокислого. Закрывают стеклянной пришлифованной пробкой и тщательно перемешивают. Срок хранения - 3 мес.

11.5 Растворы афлатоксина

11.5.1 Растворы афлатоксина

должны храниться в темноте при температуре не выше 6°С в герметичной посуде, исключающей возможность испарения растворителя и контакт раствора с иными материалами, чем стекло и фторопласт. Растворы каждой концентрации готовят по потребности.

11.5.1.1 Приготовление раствора афлатоксина

номинального значения массовой концентрации 0,02 мкг/см

.

11.5.1.1.1 В мерную колбу вместимостью 25 см

помещают 0,5 см

стандартного образца состава раствора афлатоксина

массовой концентрации 1 мкг/см

и доводят до метки ацетонитрилом.

11.5.1.1.2 Если действительное значение массовой концентрации афлатоксина

(приведено в паспорте на стандартный образец) отличается от номинального значения (1 мкг/см), то массовую концентрацию афлатоксина

в приготовленном растворе

, мкг/см

, вычисляют по формуле

,                                                        (1)

где

- действительное значение массовой концентрации афлатоксина

в стандартном образце, мкг/см

;

- объем стандартного образца, взятый для приготовления раствора, см

;

- объем приготовленного раствора, см

.

Срок хранения - 6 мес в холодильнике.

11.5.1.2 Приготовление раствора афлатоксина

номинального значения массовой концентрации 0,006 мкг/см

.

11.5.1.2.1 В мерную колбу вместимостью 50 см

помещают 0,3 см

стандартного образца (далее - СО) состава раствора афлатоксина

массовой концентрации 1 мкг/см

и доводят до метки ацетонитрилом.

Срок хранения - 6 мес в холодильнике.

11.5.1.3 Приготовление градуировочных растворов афлатоксина

в подвижной фазе номинального значения массовой концентрации 50; 10; 2 нг/см

.