ГОСТ ISO 21149-2013 Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Подсчет и обнаружение мезофильных аэробных микроорганизмов.
ГОСТ ISO 21149-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Продукция парфюмерно-косметическая
МИКРОБИОЛОГИЯ
Подсчет и обнаружение мезофильных аэробных микроорганизмов
Perfumery and cosmetic products. Microbiology. Enumeration and detection of aerobic mesophilic microorganisms
МКС 07.100.99; 71.100.70
Дата введения 2017-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 7 июня 2013 г. N 43)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ISO 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения
| AM
| Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
(Поправка. ИУС N 6-2019).
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 июня 2016 г. N 613-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 21149-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 21149:2006* "Косметика. Микробиология. Подсчет и обнаружение мезофильных аэробных бактерий" ("Cosmetics - Microbiology - Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria", IDT).
Международный стандарт ISO 21149:2006 разработан Техническим комитетом ISO/ТС 217 "Косметика" Международной организации по стандартизации (ISO).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2019 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 6, 2019 год с учетом уточнения, опубликованного в ИУС 11-2019
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает общие требования к методу обнаружения и подсчету мезофильных аэробных микроорганизмов, присутствующих в парфюмерно-косметической продукции, путем подсчета колоний на агаризованной среде после инкубации в аэробных условиях или путем проверки отсутствия бактериального роста после обогащения.
Из-за большого разнообразия парфюмерно-косметической продукции в рассматриваемой области применения отдельные детали данного метода могут быть непригодными для некоторых видов продукции (например, для нерастворимой в воде продукции). Другие методы (например, автоматизированные) могут заменить метод, представленный в настоящем стандарте, при условии, что продемонстрирована их равнозначность или что альтернативный метод валидирован иным образом.
Если необходимо, подсчитанные и обнаруженные микроорганизмы могут быть идентифицированы с помощью соответствующих идентификационных методов, описанных в стандартах, приведенных в библиографии.
Чтобы обеспечить качество и безопасность продукции для потребителя, рекомендуется проводить соответствующий анализ микробиологического риска с целью определения типов парфюмерно-косметической продукции, к которой применим настоящий стандарт. К продукции с низкой степенью микробиологического риска относится продукция с низкой водной активностью, продукция на спиртовой основе, продукция с крайними значениями рН и т.д.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты*. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения):
________________
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 мезофильные аэробные микроорганизмы (aerobic mesophilic bacteria): Мезофильные микроорганизмы, способные к росту в аэробных условиях, установленных в настоящем стандарте.
Примечание - В указанных условиях могут быть обнаружены другие типы микроорганизмов (например, дрожжи, плесень).
3.2 продукция (product): Часть идентифицированной парфюмерно-косметической продукции, полученная лабораторией для испытания (анализа).
3.4 исходная суспензия (initial suspension): Суспензия (или раствор) пробы в определенном объеме соответствующей жидкости (разбавитель, нейтрализатор, бульон или их сочетания).
3.5 разведение пробы (sample dilution): Разведение исходной суспензии.
4 Сущность метода
4.1 Общие положения
Данный метод касается подсчета колоний на неселективной агаризованной среде или определения наличия или отсутствия бактериального роста после обогащения. Вероятное ингибирование микробного роста пробой должно быть нейтрализовано, чтобы можно было обнаружить все жизнеспособные микроорганизмы [1]. Во всех случаях и независимо от применяемой методики нейтрализация антимикробных свойств продукции должна быть проверена и валидирована [2]-[4].
4.2 Подсчет микроорганизмов чашечным методом
Подсчет микроорганизмов чашечным методом состоит из следующих стадий:
- подготовка чашек Петри для культивирования определенного объема исходной суспензии или разведений пробы в соответствующей питательной среде;
- инкубация чашек Петри в аэробных условиях при температуре (32,5±2,5)°С в течение (72±6) ч;
- подсчет числа колониеобразующих единиц (colony forming units) (КОЕ) и расчет количества мезофильных аэробных микроорганизмов на кубический сантиметр или грамм продукции.
4.3 Мембранная фильтрация
Мембранная фильтрация состоит из следующих стадий:
- внесение соответствующего количества пробы, установленного путем валидации, в фильтровальный аппарат, смоченный небольшим количеством соответствующего стерильного разбавителя, немедленное фильтрование и промывка в соответствии с валидированной методикой (см. 13.3.4). Затем мембранный фильтр переносится на поверхность определенной агаризованной среды согласно ISO 21148;
- инкубация мембранных фильтров в аэробных условиях при температуре (32,5±2,5)°С в течение (72±6) ч;
- подсчет числа колониеобразующих единиц (КОЕ) и расчет количества мезофильных аэробных микроорганизмов на кубический сантиметр или грамм продукции.
4.4 Обнаружение бактерий с предварительным обогащением
Обнаружение бактерий с предварительным обогащением состоит из следующих стадий:
- инкубация при температуре (32,5±2,5)°С в течение не менее 20 ч определенного количества исходной суспензии в неселективной жидкой среде, содержащей соответствующие нейтрализаторы и/или диспергирующие агенты;
- перенос определенного количества обогащенной суспензии на неселективную агаризованную среду;
- инкубация в аэробных условиях при температуре (32,5±2,5)°С в течение 48-72 ч;
5 Разбавители, нейтрализаторы и питательные среды
5.1 Общие положения
Общие требования приведены в ISO 21148. Если в настоящем стандарте упоминается вода, то это означает, что применяют дистиллированную или очищенную воду, как установлено в ISO 21148.
Следующие разбавители, нейтрализаторы и питательные среды пригодны для обнаружения и подсчета мезофильных аэробных микроорганизмов. Допускается использовать другие разбавители, нейтрализаторы и питательные среды, если была продемонстрирована их пригодность.
5.2 Разбавители и нейтрализующие разбавители
5.2.1 Общие положения
Разбавитель используется для диспергирования пробы. Он может содержать нейтрализаторы, если тестируемая проба обладает антимикробными свойствами. Эффективность нейтрализации должна быть доказана перед подсчетом количества микроорганизмов (см. раздел 13). Информация относительно применяемых нейтрализаторов приведена в приложении D.
5.2.2 Нейтрализующие разбавители
5.2.2.1 Жидкая среда с гидролизатом казеина, соевым лецитином и полисорбатом 20 (SCDLP 20 бульон)
5.2.2.1.1 Состав
- панкреатический гидролизат казеина - 20,0 г;
- соевый летицин - 5,0 г;
5.2.2.1.2 Приготовление
5.2.2.2 Прочие нейтрализирующие агенты
При необходимости могут использоваться другие нейтрализующие агенты (см. приложения А и D).
5.2.3 Разбавитель
5.2.3.1 Жидкость А
5.2.3.1.1 Состав
- пептический гидролизат животной ткани - 1,0 г;
5.2.3.1.2 Приготовление
5.2.3.2 Другие разбавители
Могут использоваться другие подходящие нейтрализаторы (см. приложение В).
5.3 Разбавитель для бактериальной суспензии (раствор хлорида натрия с триптоном)
5.3.1 Состав
- триптон, панкреатический гидролизат казеина - 1,0 г;
- хлорид натрия - 8,5 г;
5.3.2 Приготовление
Растворяют компоненты в воде, помешивая при нагревании. Разливают в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121°С в течение 15 мин. После стерилизации рН раствора должен быть равен 7,0±0,2 ед. рН при измерении при комнатной температуре.
5.4 Питательные среды
5.4.1 Общие положения
Питательные среды могут быть приготовлены способом, описанным ниже, или из готовых сухих питательных сред согласно инструкциям изготовителя. Готовые к использованию среды могут применяться, если их состав и/или ростовые свойства соответствуют требованиям настоящего стандарта.
5.4.2 Питательные среды для подсчета микроорганизмов
5.4.2.1 Состав
- панкреатический гидролизат казеина - 15,0 г;
- папаический гидролизат соевой муки - 5,0 г;
- хлорид натрия - 5,0 г;
- агар - 15,0 г;
5.4.2.1.1 Приготовление
Растворяют компоненты или готовую сухую питательную среду в воде, помешивая при нагревании. Разливают в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121°С в течение 15 мин. После стерилизации и охлаждения рН среды должен быть равен 7,3±0,2 ед. рН при измерении при комнатной температуре.
5.4.2.2 Другие среды для подсчета микроорганизмов
Могут использоваться другие подходящие среды (см. приложение С).
5.4.3 Питательные среды для обнаружения микроорганизмов
5.4.3.1 Общие положения
Для обнаружения микроорганизмов могут быть использованы агаризованная среда или бульон для обогащения.
Бульон для обогащения используется для диспергирования пробы и увеличения исходной концентрации микроорганизмов. Он может содержать нейтрализаторы, если проба, подлежащая испытанию, обладает антимикробными свойствами.
5.4.3.2 Бульон для обогащения: бульон Eugon LT 100
5.4.3.2.1 Общие положения
Данная среда содержит ингредиенты: лецитин и полисорбат 80, которые нейтрализуют ингибиторы, присутствующие в пробе, а также диспергирующий агент - октоксинол 9.
5.4.3.2.2 Состав
- панкреатический гидролизат казеина - 15,0 г;
- папаический гидролизат соевой муки - 5,0 г;
- L-цистин - 0,7 г;
- хлорид натрия - 4,0 г;
- сульфит натрия - 0,2 г;
- глюкоза - 5,5 г;
- яичный лецитин - 1,0 г;
- полисорбат 80 - 5,0 г;
- октоксинол 9 - 1,0 г;
5.4.3.2.3 Приготовление
Растворяют последовательно полисорбат 80, октоксинол 9 и яичный лецитин в кипящей воде до их полного растворения. Растворяют остальные компоненты в воде, перемешивания их при нагревании. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121°С в течение 15 мин. После стерилизации рН среды должен быть равен 7,0±0,2 ед. рН при измерении при комнатной температуре.
5.4.3.3 Агаризованная среда для обнаружения микроорганизмов
5.4.3.3.1 Агаризованная среда Eugon LT 100
5.4.3.3.1.1 Состав
- панкреатический гидролизат казеина - 15,0 г;
- папаический гидролизат соевой муки - 5,0 г;
- L-цистин - 0,7 г;
- хлорид натрия - 4,0 г;
- сульфит натрия - 0,2 г;
- глюкоза - 5,5 г;
- яичный лецитин - 1,0 г;
- полисорбат 80 - 5,0 г;
- октоксинол 9 - 1,0 г;
- агар - 15,0 г;
5.4.3.3.1.2 Приготовление
Растворяют последовательно полисорбат 80, октоксинол 9 и яичный лецитин в кипящей воде до полного их растворения. Растворяют остальные компоненты, перемешивая их при нагревании. Перемешивают осторожно во избежание пенообразования. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121°С в течение 15 мин. После стерилизации и охлаждения рН среды должен быть равен 7,0±0,2 ед. рН при измерении при комнатной температуре.
5.4.3.3.2 Прочие агаризованные среды для обнаружения микроорганизмов
Могут использоваться другие подходящие среды (см. приложение С).
5.4.4 Агаризованная среда для культивирования эталонных штаммов
Используют агаризованную среду с соево-казеиновым гидролизатом (SCDA) или триптон-соевый агар (TSA) (5.4.2.1).
6 Инструменты и стеклянная лабораторная посуда
Лабораторное оборудование, инструменты и стеклянная посуда должны соответствовать ISO 21148.
7 Штаммы микроорганизмов
Для определения эффективности нейтрализаторов используют штаммы типичных представителей грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов [2], [5]:
- Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (эквивалентный штамм: CIP 82.118, или NCIMB 8626, или NBRC 13275, или КСТС 2513, или другой эквивалентный штамм из национальной коллекции);
_______________
В качестве альтернативного грамотрицательного штамма могут использоваться: Escherichia coli АТСС 8739 (эквивалентный штамм: CIP 53.126, или NCIMB 8545, или NBRC 3972, или КСТС 2571, или другой эквивалентный штамм из национальной коллекции).
Культура должна быть восстановлена согласно методикам, предусмотренным поставщиком штаммов.
Штаммы могут храниться в лаборатории в соответствии с [13].
8 Обращение с парфюмерно-косметической продукцией и лабораторными пробами
При необходимости продукцию, подлежащую испытаниям, хранят при комнатной температуре. Не следует выдерживать в термостате, охлаждать и замораживать продукцию (3.2) и пробы (3.3) ни до, ни после анализа.
Отбор проб парфюмерно-косметической продукции, подлежащей анализу, должен осуществляться согласно методике, приведенной в ISO 21148. Анализируют пробы в соответствии с ISO 21148 и нижеследующей методикой.
9 Методика
9.1 Общие рекомендации
Для подготовки пробы, приготовления исходной суспензии и разведений используют стерильные материалы, оборудование и асептические методы. В случае приготовления исходной суспензии в подходящем разбавителе время между окончанием приготовления суспензии и моментом ее внесения в бульон для обогащения не должно превышать 45 мин, если иное не оговорено в соответствующих протоколах или документах.
9.2 Приготовление исходной суспензии
9.2.1 Общие положения
Исходная суспензия обычно представляет собой разведение 1:10. Могут потребоваться большие объемы разбавителя или бульона для обогащения, если предполагают высокие уровни контаминации продукции и/или антимикробные свойства все еще присутствуют в разведении 1:10.
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.