ГОСТ 23681-79 Сперма жеребцов неразбавленная свежеполученная. Технические условия.

ГОСТ 23681-79

Группа Р31

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

 СПЕРМА ЖЕРЕБЦОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ СВЕЖЕПОЛУЧЕННАЯ

 Технические условия

 Fresh non-diluted sperm of stallions. Specification

ОКП 989510

Cрок действия с 01.07.1980

до 01.07.1985*

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

Н.Г.Балашов, Г.А.Голикова, М.В.Косенко, А.И.Науменков, В.Н.Родина, Н.К.Романькова, Е.Л.Фомина, Н.Ф.Чуклов

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член Коллегии А.Д.Третьяков

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 4 июня 1979 г. N 1997

Настоящий стандарт распространяется на свежеполученную неразбавленную сперму, взятую в искусственную вагину от жеребцов в возрасте 3 лет и старше и предназначенную для искусственного осеменения.

 1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Свежеполученная неразбавленная сперма жеребцов должна быть сохранена не более 30 мин и соответствовать требованиям настоящего стандарта.

1.2. Сперму получают от здоровых жеребцов с оплодотворяющей способностью спермы не менее 55%.

Примечание. Допускается с разрешения Министерства сельского хозяйства СССР или министерства сельского хозяйства союзной республики получать сперму от высококлассных жеребцов или жеребцов с ценными в генетическом отношении признаками с оплодотворяющей способностью спермы менее 55%.

1.3. Свежеполученная неразбавленная сперма жеребцов по органолептическим, физическим, биологическим и морфологическим показателям должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

Наименование показателя	Характеристика и норма
Внешний вид	Однородная жидкость светло-серого цвета, без хлопьев, крови и гноя
Концентрация спермиев, млн/мл, не менее	150
Подвижность спермиев, баллы, не менее	5,0
Выживаемость спермиев при 2-5 °С при разбавлении спермы 1:3 лактозо-хелато-цитратно-желточной средой:
показатель абсолютной выживаемости ( ), не менее	450
выживаемость, ч, не менее	150
Количество спермиев с анормальной морфологией, %, не более	20

1.4. Сперма, предназначенная для замораживания, должна иметь резистентность к холодовому шоку не ниже 0,1; коэффициент осмотической (физиологической) резистентности спермиев должен быть не ниже 1.

Резистентность к холодовому шоку и коэффициент осмотической (физиологической) резистентности спермиев определяют периодически не реже одного раза в квартал.

1.5. Сперма по ветеринарно-санитарному состоянию должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.2.

Таблица 2

Общее количество бактерий, коли-титр, патогенные и условно патогенные бактерии, концентрацию водородных ионов (рН) определяют предприятия искусственного осеменения периодически не реже одного раза в квартал в лабораториях государственной ветеринарной службы.

 2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

2.1. Метод отбора проб

2.1.1. Отбор проб - по ГОСТ 20909.1-75.

2.2. Внешний вид, цвет, наличие или отсутствие хлопьев, крови, гноя определяют, осматривая сперму в мензурке в проходящем свете при периодическом встряхивании мензурки.

2.3. Концентрацию спермиев определяют в счетной камере по ГОСТ 20909.5-75 со следующим изменением: сперму разбавляют в 10 или 20 раз, набирая ее до отметки 0,5 или 1,0 и заполняя 3%-ным раствором хлористого натрия до отметки 11.

2.4. Определение подвижности спермиев - по ГОСТ 20909.4-75 со следующим изменением: раствор лимоннокислого натрия к капле спермы не добавляют.

2.5. Определение показателя абсолютной выживаемости (

) и выживаемости спермиев в часах - по ГОСТ 20909.4-75 со следующим изменением: сперму жеребцов разбавляют 1:3 лактозо-хелато-цитратно-желточной средой следующего состава:

вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72 - 100 мл;

лактоза - 11 г;

хелатон - 0,1 г;

натрия бикарбонат 4,2%-ный раствор - 0,2 мл;

натрия цитрат 35,7%-ный раствор - 0,25 мл;

желток куриного яйца - 1,6 г;

спермосан-3 по ГОСТ 22636-77 - 30000 ЕД.

2.6. Определение количества спермиев с анормальной морфологией - по ГОСТ 20909.3-75.

2.7. Определение резистентности спермиев к холодовому шоку

Сущность метода заключается в определении выживаемости спермиев после быстрого их охлаждения до температуры 1-3 °С.

2.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284-67;

термостат ТМ-1 для микроскопа;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75;

стекла покровные размером 18х18 мм по ГОСТ 6672-75;

палочки стеклянные или пипетки пастеровские;

пробирки стеклянные вместимостью 1,5 мл и более;

штатив для пробирок;

глюкозу по ГОСТ 6038-74*, 7%-ный раствор.

2.7.2. Подготовка к испытанию

Перед испытанием готовят на прокипяченной дистиллированной воде 7%-ный раствор глюкозы.

В чистые флаконы, подогретые до 30 °С, разливают по 1 мл спермы и добавляют по 3 мл 7%-ного раствора глюкозы, подогретого до 30 °С. Все перемешивают.

Готовят ванну со льдом с температурой 1-2 °С.

2.7.3. Проведение испытания

В пипетку набирают 0,5 мл спермы, разбавленной 7%-ным раствором глюкозы, и помещают в тонкостенные 1,5-миллилитровые стеклянные пробирки, из расчета на каждую пробу спермы не менее четырех пробирок.

Пробирки со спермой помещают в водяную баню при температуре 37 °С на 5 мин. Затем две пробирки с исследуемой спермой переносят в ванну с тающим льдом (температура 1-2 °С) и выдерживают 20 мин. Оставшиеся две пробирки выдерживают 20 мин при комнатной температуре.

Подвижность спермиев определяют под микроскопом по ГОСТ 20909.4-75 с изменением, указанным в п.2.4.

2.7.4. Обработка результатов

Резистентность спермиев к холодовому шоку (

) вычисляют по формуле

,

где

- подвижность спермиев после холодового шока;

       

- подвижность спермиев в пробирках, выдержанных 5 мин при 37 °С и 20 мин при комнатной температуре.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемое расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать ±10%.

Пример. Подвижность спермиев в пробирках, выдержанных 5 мин при 37 °С и 20 мин при комнатной температуре, - 6,0 баллов, а спермиев в пробирках, подвергнутых холодовому шоку, - 1,0 балл.

Следовательно, резистентность к холодовому шоку равна

.

2.8. Определение коэффициента осмотической (физиологической) резистентности спермиев

Для определения коэффициента осмотической (физиологической) резистентности спермиев устанавливают осмотическую (физиологическую) резистентность, а затем вычисляют коэффициент осмотической (физиологической) резистентности.

2.8.1. Определение осмотической (физиологической) резистентности спермиев

Сущность метода заключается в определении устойчивости спермиев к действию гипотонического раствора глюкозы.

2.8.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

микроскоп биологический марки МБИ или МБР по ГОСТ 8284-67;

термостат ТМ-1 для микроскопа;

флаконы вместимостью 10-15 мл;

микропипетки стеклянные;

колбы стеклянные вместимостью 100 мл по ГОСТ 1770-74;

стекла предметные по ГОСТ 9284-75;

стекла покровные по ГОСТ 6672-75;

глюкозу по ГОСТ 6038-74, 3, 4, 5 и 6%-ный растворы;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

2.8.1.2. Подготовка к испытанию

При определении осмотической резистентности свежеполученной неразбавленной спермы должны строго соблюдаться правила, предупреждающие холодовый шок спермиев. Растворы и лабораторная посуда, применяемые для проведения испытания, должны быть чистыми и подогретыми до 30-35 °С.

Берут по два пенициллиновых флакона с раствором глюкозы каждой из концентрации глюкозы. Глюкозу разливают по 2 мл в каждый флакон. Флаконы закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при температуре 30-35 °С на 10-15 мин.

2.8.1.3. Проведение испытания

В каждый флакон с раствором глюкозы вносят по 0,2 мл испытуемой спермы. Получают разбавление 1:10. Пробирки с разбавленной спермой выдерживают 20 мин при комнатной температуре 18-22 °С.

Подвижность спермиев в разбавленной капле определяют по ГОСТ 20909.4-75 с изменением, указанным в п.2.4.

2.8.1.4. Обработка результатов

Осмотическую резистентность спермиев (

) выражают значением концентрации раствора глюкозы, при которой подвижность спермиев составляет не менее 0,5 балла. Чем ниже концентрация раствора глюкозы, в которой спермин остаются живыми, тем выше осмотическая резистентность спермиев.

Пример. В пробирке 4 (3%-ный раствор глюкозы) определена единичная подвижность спермиев, а в пробирке 3 (4%-ный раствор глюкозы) подвижность спермиев 0,5 балла. Следовательно, значение осмотической резистентности спермиев равно 4. Или, если в пробирке 4 мертвые спермии, в пробирке 3 - единичная подвижность спермиев, а в пробирке 2 (5%-ный раствор глюкозы) - подвижность 0,5 балла, то осмотическая резистентность спермиев равна 5,0.

2.8.2. Коэффициент осмотической (физиологической) резистентности (

) вычисляют по формуле

,

где

- постоянный коэффициент;

- осмотическая резистентность (концентрация раствора глюкозы, %).

2.9. Определение общего количества бактерий - по ГОСТ 20909.2-75.

2.10. Определение коли-титра спермы - по ГОСТ 20909.2-75.

2.11. Патогенные и условно патогенные микроорганизмы устанавливают по гемолитическим свойствам, плазмокоагуляции и способности убивать белых мышей при подкожном или внутрибрюшинном введении культуры. При проявлении одного из указанных признаков микроорганизмы считают патогенными.

2.12. Определение концентрации водородных ионов (рН) спермы - по ГОСТ 20909.5-75.