ГОСТ Р 59507-2021 Молоко и молочное сырье. Определение наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ иммунологическими методами.

ГОСТ Р 59507-2021

 НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 МОЛОКО И МОЛОЧНОЕ СЫРЬЕ

 Определение наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ иммунологическими методами

 Milk and milk raw material. Determination of residual content of antibiotics and drugs by immunological methods

ОКС 67.100.10

Дата введения 2021-08-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным автономным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГАНУ "ВНИМИ")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 470 "Молоко и продукты переработки молока"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ

Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 20 мая 2021 г. N 401-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в

статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации" . Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое молоко, молочное сырье* (далее - продукт) и устанавливает:

________________

* В настоящем стандарте к молочному сырью относят: пастеризованное молоко, восстановленное молоко, обезжиренное молоко, молочную сыворотку.

- иммунофлуоресцентный метод определения наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ с применением иммунохимического биоанализатора;

- определение наличия остаточного содержания антибиотиков с применением конкурентного иммуноферментного метода в диапазоне измерений массовой концентрации антибиотиков 2,0-100,0 мкг/дм

;

- иммунохроматографический метод определения наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ.

Методы, предусмотренные настоящим стандартом, не являются контрольными. В качестве контрольного метода применяют метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004  Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005  Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007  Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019  Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009  Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021  Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770  Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4328  Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6709  Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026  Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13928  Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу

ГОСТ 25336  Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25794.1  Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования

ГОСТ 26809.1  Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752  Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498  Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169  Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227  Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 32892  Молоко и молочная продукция. Метод измерения активной кислотности

ГОСТ OIML R 76-1  Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р ИСО 707  Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002  Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по

[1]  и

[2] , а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 иммунологические методы: Лабораторные методы, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител.

3.1.1 иммунофлуоресцентный метод: Иммунологический метод анализа, основанный на использовании в иммунологической реакции антител, меченных флуоресцентной меткой.

3.1.2 иммуноферментный метод: Иммунохимический метод определения низкомолекулярных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция "антиген-антитело". Для выявления образовавшегося комплекса в качестве метки для регистрации сигнала применяют специфический для каждой реакции фермент или ферментзависимое вещество.

3.1.3 иммунохроматографический метод: Иммунохимический метод анализа, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах. Проводится с помощью специальных тест-полосок, панелей или тест-кассет.

3.2 тест-набор (тест-система): Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и составных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных лекарственных веществ или групп лекарственных веществ.

      4 Отбор проб

Отбор и подготовку проб проводят по

ГОСТ Р ИСО 707 ,

ГОСТ 13928 ,

ГОСТ 26809.1 .

Если измерение не может быть проведено сразу после отбора проб продукта, то срок хранения проб продукта в холодильнике при температуре (4±2)°C не более 36 ч.

Титруемая кислотность анализируемого сырого молока не должна превышать 21,0°Т.

      5 Условия проведения измерений

При выполнении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:

      6 Иммунофлуоресцентный метод определения наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ с применением иммунохимического биоанализатора

Иммунофлуоресцентный метод распространяется на сырое молоко и устанавливает одновременное определение наличия остаточного содержания следующих антибиотиков и/или лекарственных веществ с применением иммунохимического биоанализатора:

- аминогликозиды;

- бета-лактамы-пенициллины;

- бета-лактамы-цефалоспорины;

- линкозамиды;

- макролиды;

- полимиксины;

- производные пиримидина;

- сульфаниламиды;

- тетрациклины;

- фениколы;

- хинолоны.

6.1 Сущность метода

Флуоресцентно-меченные специфические рецепторы и антитела, находящиеся во флаконе с реагентами, аффинно связываются с анализируемым продуктом в пробе. При погружении биополоски в анализируемый продукт он мигрирует вдоль биополоски по принципу тонкослойной хроматографии.

При отсутствии анализируемого продукта в пробе конъюгат рецептор/антитело-метка связывается с конъюгатом антиген: белок-носитель, иммобилизованным в тестовой зоне. Несвязавшийся конъюгат антитело-метка попадает в контрольную зону и связывается там с антивидовыми антителами.

Для регистрации флуоресценции метки в тестовой зоне биополоски применяют специальные считывающие устройства (ридеры).

6.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

6.2.1 Биоанализатор иммунохимический с флуоресцентной детекцией, включающий:

6.2.1.1 Тест-набор для проведения иммунохимического анализа, включающий:

6.2.1.1 а) биополоски;

6.2.1.1 б) биореагент иммунохимический, состоящий из лиофилизированной смеси рецепторов/антител.

6.2.1.2 Устройство считывающее, оснащенное программным обеспечением для управления и обработки результатов измерений.

6.2.1.3 Термостат-инкубатор, обеспечивающий поддержание температуры точностью ±1°C.

6.2.1.4 Набор калибровочный, включающий:

6.2.1.4 а) тест-полоску флуоресцентную контрольную;

6.2.1.4 б) тест-полоску калибровочную.

6.2.1.5 Пробы для положительного контроля, состоящие из лиофилизированной смеси антибиотиков.

6.2.2 Термометр жидкостной (не ртутный) диапазоном измерения температуры от 0°C до 100°C, ценой деления шкалы 1°C по

ГОСТ 28498 .

6.2.3 Часы по

ГОСТ 27752  2-го класса точности.

6.2.4 Баня водяная термостатируемая, обеспечивающая поддержание температуры с точностью ±2°C.

6.2.5 Дозаторы пипеточные (пипет-дозаторы) переменного объема дозирования в диапазоне 0,2-1,0 см

, 1,0-5,0 см

с наконечниками.

6.2.6 Виалы из темного стекла с крышкой вместимостью 2 см

.

Допускается применение других средств измерений, испытательного и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерений, а также допускается применение реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

Примеры оборудования и тест-систем для проведения иммунофлуоресцентного метода представлены в приложении А.

6.3 Подготовка к проведению измерений

6.3.1 Приготовление восстановленного раствора пробы продукта для положительного контроля

Во флакон с пробой продукта для положительного контроля (6.2.1.5) добавляют 2 см

сырого молока, не содержащего антибиотики и/или лекарственные вещества, и закрывают пробкой. Содержимое флакона аккуратно перемешивают, не допуская образования пены.

Срок хранения восстановленного раствора пробы продукта при температуре от 2°C до 8°C - не более 24 ч.

6.3.2 Подготовка биоанализатора

6.3.2.1 Подготовка термостата-инкубатора

Подготовку термостата-инкубатора проводят в соответствии с инструкцией к прибору.

Термостат-инкубатор прогревают до постоянной температуры (35±1)°C.

6.3.2.2 Подготовка считывающего устройства (6.2.1.2).

Подготовку считывающего устройства проводят в соответствии с инструкцией к прибору.

6.3.2.2 а) Проверка считывающего устройства

Проверку считывающего устройства проводят с применением флуоресцентной контрольной тест-полоски по 6.2.1.4 а).

Флуоресцентную контрольную тест-полоску по 6.2.1.4 а) помещают в выдвижной приемник считывающего устройства и проводят контрольное измерение в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.

Если считывающее устройство работает правильно, на мониторе появляется значение ОК.

При появлении на мониторе значения NOT OK необходимо убедиться в правильном положении и целостности флуоресцентной контрольной тест-полоски и повторить контрольное измерение.

При повторном появлении значения NOT OK необходимо провести калибровку считывающего устройства по 6.3.2.2 б).

Контрольное измерение проводят периодически, не реже одного раза в неделю. При более интенсивном использовании считывающего устройства контрольное измерение проводят через каждые 1000 измерений, а также после проведения калибровки и/или очистки оптического окна.

6.3.2.2 б) Калибровка считывающего устройства

Калибровку считывающего устройства проводят с применением калибровочной тест-полоски по 6.2.1.4 б).

Флуоресцентную калибровочную тест-полоску по 6.2.1.4 б) помещают в выдвижной приемник считывающего устройства и проводят калибровку в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.

Калибровку считывающего устройства с применением флуоресцентной калибровочной тест-полоски по 6.2.1.4 б) проводят при частом появлении недействительных результатов измерений (INVALID), при повторном появлении значения NOT OK в результате проведения проверки считывающего устройства по 6.3.2.2 а), а также после очистки оптического окна считывающего устройства.

6.3.2.2 в) Дельта-калибровка считывающего устройства

Чистую пустую (без тест-полоски) выдвижную каретку устанавливают (задвигают) в считывающее устройство. Необходимо убедиться, что каретка находится в правильном положении внутри устройства. Только после этого проводят дельта-калибровку согласно инструкции, прилагаемой к прибору.

Дельта-калибровку необходимо проводить при частом появлении недействительных результатов (INVALID) и/или результатов контрольных проверок с отклонением от нормы (NOT OK), а также после очистки оптического окна считывающего устройства.

6.3.3 Подготовка проб

Пробу продукта перемешивают, переворачивая не менее трех раз, не допуская нагревания. Температура продукта должна составлять (6±2)°C.

6.3.4 Подготовка тест-набора к проведению измерений

6.3.4.1 Тест-набор (6.2.1.1) перед применением достают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин, избегая воздействия влаги и света.

6.3.4.2 На всех этапах проведения измерений необходимо избегать воздействия прямого солнечного света.

6.4 Проведение измерений

Пробу продукта анализируют в условиях повторяемости в соответствии с требованиями

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002  (пункт 3.14).

6.4.1 В каждый из флаконов, содержащих биореагент, состоящий из смеси рецепторов/антител по 6.2.1.1 б), добавляют по 0,250 см

пробы продукта, подготовленной по 6.3.3.

6.4.2 Анализируемую пробу продукта, подготовленную по 6.4.1, смешивают с биореагентами, осторожно вращая флакон на рабочей поверхности в течение 10 с. Не допускается переворачивать или встряхивать флакон.

6.4.3 Флакон с пробой продукта по 6.4.2 помещают в термостат-инкубатор (6.2.1.3), подготовленный по 6.3.2.1, и выдерживают при температуре (35±1)°C в течение 3 мин, активируя таймер термостата-инкубатора.

6.4.4 Не вынимая флакон с анализируемой пробой продукта по 6.4.3 из термостата-инкубатора, в него помещают биополоску по 6.2.1.1 а) и продолжают инкубирование при температуре (35±1)°C в течение 10 мин (после чего биополоска подготовлена к считыванию результата).

6.4.5 По истечении 10 мин биополоску вынимают из флакона с биореагентом и помещают в выдвижной приемник считывающего устройства (ридера), подготовленного по 6.3.2.2.

Считывание результатов проводят не позднее чем через 3 мин после окончания инкубации.

6.4.6 Проведение повторного измерения

Повторное измерение проводят в случае, если анализируемая проба продукта определена как положительная.

6.4.6.1 Анализируемую пробу продукта измеряют параллельно вместе с раствором пробы продукта для положительного контроля, приготовленным по 6.3.1, предварительно изменив конфигурацию анализа и выбрав только те каналы, которые показали положительный результат.

6.4.6.2 Во флакон, содержащий биореагент, состоящий из смеси рецепторов/антител по 6.2.1.1 б), добавляют 0,250 см

пробы продукта, подготовленной по 6.3.3.

6.4.6.3 Затем измерения проводят по 6.4.2-6.4.5.

6.5 Обработка результатов измерений

6.5.1 Для обработки и регистрации результатов измерений анализируемой пробы продукта применяют считывающее устройство (6.2.1.2), оснащенное программным обеспечением для управления и обработки результатов измерений и подготовленное к работе по 6.3.2.2.

Визуальная интерпретация биополоски невозможна, т.к. окрашивание отсутствует.

6.5.2 Обработку результатов проводят в течение 3 мин после окончания проведения второго инкубирования, при этом не допускается снимать с биополоски фильтрующую прокладку для анализируемой пробы продукта.

6.5.3 Результаты измерений отражаются на дисплее считывающего устройства и сохраняются в памяти прибора.

Если анализируемая проба продукта определена как отрицательная, то на экране отобразится результат теста "Отрицательный". Это означает отсутствие наличия остаточного содержания антибиотиков и/или лекарственных веществ в анализируемой пробе продукта или их массовая концентрация менее предела обнаружения.

Если анализируемая проба продукта определена как положительная, то на экране отобразится результат теста "Положительный". Это означает, что массовая концентрация определяемых антибиотиков и/или лекарственных веществ в анализируемой пробе продукта более или равна пределу обнаружения. В этом случае проводят повторное измерение по 6.4.6.

6.5.4 Если результаты измерений, полученные при повторном анализе, проведенном по 6.4.6, вновь положительные, то анализируемая проба продукта считается положительной.

6.6 Метрологические характеристики

Пределы обнаружения наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ в сыром молоке представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Пределы обнаружения наличия остаточного содержания антибиотиков и лекарственных веществ в сыром молоке

      7 Определение наличия остаточного содержания антибиотиков с применением конкурентного иммуноферментного метода

Остаточное содержание антибиотиков тетрациклина, пенициллина, стрептомицина и хлорамфеникола в сыром молоке и молочном сырье определяют конкурентным иммуноферментным методом с применением тест-наборов.

7.1 Сущность метода

Метод основан на конкуренции антибиотиков, адсорбированных на дискретных участках лунок микропланшета, и антибиотиков, присутствующих в градуировочных растворах или растворах проб продукта, за активные центры связывания антител. Свободные и иммобилизованные на планшете молекулы антибиотика конкурируют за связывание с антителами. В ходе иммуноспецифической реакции образуются комплексы "антитела - антибиотики", которые при добавлении ферментного субстрата окрашиваются в голубой цвет. При внесении стоп-раствора ферментная реакция прекращается, цвет комплекса меняется на желтый, интенсивность которого определяют фотометрически при длине волны 450 нм.

Массовая концентрация определяемого антибиотика обратно пропорциональна интенсивности окрашивания. Массовую концентрацию антибиотика в анализируемом продукте определяют на основании измеренного отношения оптической плотности раствора анализируемой пробы продукта к оптической плотности нулевого градуировочного раствора и установленной градуировочной зависимости с учетом фактора разведения.

7.2 Определение наличия остаточного содержания тетрациклина

Диапазон измерения массовой концентрации тетрациклина в анализируемом продукте 2,0-100,0 мкг/дм

.

7.2.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы

7.2.1.1 Тест-набор для определения наличия остаточного содержания тетрациклина (см. приложение Б, пункт Б.1), включающий:

7.2.1.1 а) микропланшет с лунками, покрытыми антителами к тетрациклину;

7.2.1.1 б) концентраты градуировочных растворов тетрациклина для приготовления растворов массовой концентрации 0; 0,04; 0,1; 0,4; 1,0 и 4,0 мкг/дм

;

7.2.1.1 в) конъюгат (тетрациклин-пероксидаза) лиофилизированный;

7.2.1.1 г) раствор субстрата;

7.2.1.1 д) стоп-раствор - раствор серной кислоты молярной концентрации 0,5 моль/дм

;

7.2.1.1 е) раствор буфера для разведения и экстракции концентрированный;

7.2.1.1 ж) раствор для промывания концентрированный;

7.2.1.2 Фотометр (спектрофотометр), позволяющий проводить измерение оптической плотности растворов заполненного микропланшета (двухволновой режим) в диапазоне длин волн от 400 до 750 нм, в оптическом диапазоне от 0,001 до 4,000 ед. оптической плотности с точностью не более 2%.

7.2.1.3 Термометр жидкостной стеклянный диапазоном измерения температуры от 0°C до 100°C, ценой деления шкалы 1°C по

ГОСТ 28498 .

7.2.1.4 Часы по

ГОСТ 27752 , 2-го класса точности

7.2.1.5 Вортекс лабораторный, обеспечивающий скорость вращения не менее 1800 об/мин.

7.2.1.6 Термостат лабораторный, обеспечивающий поддержание температуры (37±1)°C.

7.2.1.7 Центрифуга лабораторная, обеспечивающая относительное центробежное ускорение не менее 3000 g.

7.2.1.8 Дозатор пипеточный (пипет-дозатор) одноканальный переменного объема дозирования в диапазоне 10-100 мм

, 100-1000 мм

, 1-10 см

с наконечниками.

7.2.1.9 Дозатор пипеточный (пипет-дозатор) многоканальный переменного объема дозирования в диапазоне 30-300 мм

с наконечниками.

7.2.1.10 Пипетки 1-2-1, 1-2-5 по

ГОСТ 29169 .

7.2.1.11 Пипетки 1-2-2-5(10) по

ГОСТ 29227 .

7.2.1.12 Цилиндры 1(3)-25(50, 100)-2 по

ГОСТ 1770 .

7.2.1.13 Колбы конические Кн-1(2)-100 по

ГОСТ 25336 .

7.2.1.14 Пробирки П-2-15-14/23 ХС по

ГОСТ 1770  или пластиковые.

7.2.1.15 Пробирки микроцентрифужные стерильные типа Эппендорф из полипропилена вместимостью 2,5 см

.

7.2.1.16 Стаканы В(Н)-1-150 по

ГОСТ 25336 .

7.2.1.17 Бутыль пластиковая вместимостью 250 см

с крышкой.

7.2.1.18 Бумага фильтровальная лабораторная по

ГОСТ 12026 .

7.2.1.19 Штатив для пробирок.

7.2.1.20 Кювета (ванночка) реагентная для многоканального дозатора.

7.2.1.21 Вода дистиллированная по

ГОСТ 6709 .

Комплектация тест-наборов для определения остаточных количеств антибиотиков с применением конкурентного иммуноферментного метода представлена в приложении Б.

Допускается применение других средств измерений, испытательного и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерений, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

7.2.2 Подготовка к проведению измерений

7.2.2.1 Приготовление реактивов и реагентов

Перед началом измерений тест-набор достают из холодильника и выдерживают при температуре от 18°C до 25°C в течение 30 мин.

При работе не допускается попадание прямых солнечных лучей на реагенты тест-набора.

Перед использованием жидкие реагенты перемешивают, осторожно вращая или переворачивая флаконы, не допуская образования пены. Отбирают только необходимое количество реагента. Не допускается возвращать реагент в оригинальный флакон.

7.2.2.1 а) Приготовление раствора конъюгата тетрациклин-пероксидаза

Во флакон с конъюгатом тетрациклин-пероксидаза по 7.2.1.1 в) добавляют 2,5 см

дистиллированной воды по

ГОСТ 6709  и перемешивают, энергично встряхивая на вортексе в течение 5 мин.

Срок хранения раствора коньюгата при температуре (минус 20±2)°C - не более 1 мес. Не допускается повторное замораживание раствора конъюгата.

7.2.2.1 б) Приготовление рабочего раствора буфера для разведения и экстракции

В пластиковую бутыль вместимостью 250 см

вносят 25 см

раствора буфера для разведения и экстракции по 7.2.1.1 е), добавляют 225 см

дистиллированной воды и тщательно перемешивают, встряхивая бутыль.

Срок хранения рабочего раствора буфера при температуре (4±2)°C - не более 7 сут.

Примечание - При образовании в процессе хранения в буфере кристаллов, его выдерживают при температуре (37±1)°C в течение 15 мин и затем тщательно перемешивают, встряхивая до полного растворения кристаллов.

7.2.2.1 в) Приготовление рабочего раствора для промывания

В пластиковую бутыль вместимостью 250 см

вносят 25 см

концентрированного раствора для промывания по 7.2.1.1 ж), добавляют 225 см

дистиллированной воды и тщательно перемешивают, встряхивая бутыль.

Срок хранения рабочего раствора при температуре от 2°C до 8°C - не более 14 сут.

Примечание - При образовании в процессе хранения в растворе для промывания кристаллов, его выдерживают при температуре (37±1)°C в течение 15 мин и тщательно перемешивают, встряхивая до полного растворения кристаллов.

7.2.2.1 г) Приготовление градуировочных растворов тетрациклина

Готовят градуировочные растворы массовой концентрации тетрациклина 0,00; 0,04; 0,10; 0,40; 1,00 и 4,00 мкг/дм

.

В микроцентрифужные пробирки типа Эппендорф вместимостью 2,5 см

помещают по 20 мм

концентратов градуировочных растворов тетрациклина по 7.2.1.1 б), добавляют по 1980 мм

рабочего раствора буфера для разведения и экстракции, приготовленного по 7.2.2.1 б), и аккуратно перемешивают.