ГОСТ Р 59582-2021 Нанотехнологии. Наночастицы серебра антибактериальные. Характеристики и методы измерений.

        ГОСТ Р 59582-2021

(ISO/TS 20660:2019)

 НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 Нанотехнологии

 НАНОЧАСТИЦЫ СЕРЕБРА АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ

 Характеристики и методы измерений

 Nanotechnologies. Antibacterial silver nanoparticles. Characteristics and measurement methods

ОКС 07.120

Дата введения 2022-03-01

 Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Российский научно-технический центр информации по стандартизации, метрологии и оценке соответствия" (ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 441 "Нанотехнологии"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 июня 2021 г. N 605-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу ISO/TS 20660:2019* "Нанотехнологии. Антибактериальные наночастицы серебра. Спецификация характеристик и методы измерений" (ISO/TS 20660:2019 Nanotechnologies - Antibacterial silver nanoparticles - Specification of characteristics and measurement methods, MOD) путем изменения ссылок, исключения отдельных положений, которые дублируются по тексту стандарта, исключения из библиографии информации о документах, ссылки на которые не использованы при изложении настоящего стандарта, дополнения обозначений и сокращений, терминологических статей, которые выделены в тексте курсивом**.

Внесение указанных технических отклонений направлено на учет целесообразности использования ссылочных национальных стандартов вместо ссылочных международных стандартов.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2012 (пункт 3.5).

Сведения о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном документе, приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации"***. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на наночастицы серебра (НЧС) в форме порошка (нанопорошок) или суспензии (наносуспензия), предназначенные для применения в качестве антибактериальных средств, и устанавливает перечень характеристик НЧС с указанием соответствующих методов измерений для их определения.

В настоящем стандарте установлен перечень характеристик антибактериальных НЧС, значения которых должны быть представлены изготовителем при поставке потребителю и учтены при изготовлении конечной продукции.

Настоящий стандарт не устанавливает значения характеристик антибактериальных НЧС и требования безопасности, не рассматривает воздействие НЧС на окружающую среду и здоровье человека при их изготовлении и применении.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ ISO 13099-2 Государственная система обеспечения единства измерений. Методы определения дзета-потенциала. Часть 2. Оптические методы

ГОСТ ISO/TS 80004-1** Нанотехнологии. Часть 1. Основные термины и определения

ГОСТ ISO/TS 80004-2** Нанотехнологии. Часть 2. Нанообъекты. Термины и определения

ГОСТ Р 8.774 Государственная система обеспечения единства измерений. Дисперсный состав жидких сред. Определение размеров частиц по динамическому рассеянию света

ГОСТ Р 8.961-2019 Государственная система обеспечения единства измерений. Дисперсные характеристики аэрозолей и взвесей. Термины и определения

ГОСТ Р 55723/ISO/TS 12805:2011 Нанотехнологии. Руководство по определению характеристик промышленных нанообъектов

ГОСТ Р 56219 (ИСО 17294-2:2003) Вода. Определение содержания 62 элементов методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой

ГОСТ Р 57165 (ИСО 11885:2007) Вода. Определение содержания элементов методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ ISO/TS 80004-1, ГОСТ ISO/TS 80004-2, ГОСТ Р 8.961, [1], а также следующие термины с соответствующими определениями.

ИСО и МЭК ведут терминологические базы данных для использования в стандартизации по следующим адресам:

- Электропедия МЭК: доступна на http://www.electropedia.org/;

- платформа онлайн-просмотра ИСО: доступна на http://www.iso.org/obp.

3.1

3.2

3.3

3.4

3.5

3.6 антибактериальная активность (antibacterial activity): Свойство веществ или явлений, уничтожающее (бактерицидное свойство) или замедляющее (бактериостатическое свойство) рост бактерий.

3.7

3.8

      4 Сокращения

В настоящем стандарте применены следующие сокращения:

ААС - атомно-абсорбционная спектрометрия;

АТДЧ - анализ траекторий движения частиц;

ДРС - динамическое рассеяние света;

ИСП-МС - масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой;

ИСП-ОЭС - оптико-эмиссионная спектрометрия с индуктивно связанной плазмой;

метод БЭТ - метод Брунауэра, Эммета и Теллера;

МРР - малоугловое рентгеновское рассеяние;

НЧС - наночастица серебра;

очИСП-МС - масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой в режиме анализа одиночных частиц;

ПЭМ - просвечивающая электронная микроскопия;

РЭМ - растровая электронная микроскопия;

ЭДРС - энергодисперсионная рентгеновская спектрометрия;

ЭФРС - электрофоретическое рассеяние света.

      5 Характеристики антибактериальных наночастиц серебра и методы измерений

      5.1 Общие положения

В настоящем стандарте приведены основные (см. таблицу 1) и дополнительные (см. таблицу 2) характеристики антибактериальных НЧС и методы измерений, применяемые для их определения. Значения характеристик устанавливают в технических требованиях (спецификации) на антибактериальные НЧС конкретной марки. В таблицах 1 и 2 указаны рекомендуемые методы измерений. Допускается применять другие методы, обеспечивающие достоверность результатов и заданную точность измерений. Каждый конкретный метод, применяемый для определения характеристики НЧС, должен быть согласован между изготовителем и потребителем. Результаты определения значений характеристик НЧС должны быть выражены в единицах, указанных в таблицах 1 и 2. В приложении А приведены сведения о методах измерений, применяемых для определения конкретных характеристик антибактериальных НЧС, указанных в таблицах 1 и 2. В приложении В приведены сведения о зависимости антибактериальных свойств НЧС от их характеристик. В приложении С приведены сведения о методах измерений, применяемых для определения антибактериальных свойств НЧС.

Следует учитывать, что значения характеристик, определенных одним методом, не допускается сопоставлять со значениями, полученными с использованием другого метода. Результаты, полученные одним методом измерений, могут быть недостоверными и отличаться от результатов, полученных другими методами.

Таблица 1 - Основные характеристики антибактериальных НЧС и соответствующие методы измерений

Характеристика	Единица измерения	Метод измерения	Форма изготовления НЧС	Документы, содержащие методы измерений
1) Средний размер и распределение	м	РЭМ	Нанопорошок или наносуспензия	[2]
по размерам первичных частиц		ПЭМ	Нанопорошок или наносуспензия	[3]
2) Дзета-потенциал	В	ЭФРС	Наносуспензия	ГОСТ ISO 13099-2
3) Удельная площадь поверхности	м /кг	БЭТ	Нанопорошок	[4], [5]
4) Общее содержание серебра	кг/кг или моль/моль	ИСП-МС	Нанопорошок или наносуспензия	[6], ГОСТ Р 56219
		ИСП-ОЭС	Нанопорошок или наносуспензия	ГОСТ Р 57165
		ААС	Нанопорошок или суспензия	[7]
Для выполнения измерений НЧС в форме порошка предварительно диспергируют в растворителе. НЧС в форме суспензии подвергают измерениям без изменений.

Таблица 2 - Дополнительные характеристики антибактериальных НЧС и соответствующие методы измерений

Характеристика	Единица измерения	Метод измерения	Форма изготовления НЧС	Документы, содержащие методы измерений
1) Гидродинамический	м	ДРС	Наносуспензия	ГОСТ Р 8.774
диаметр		АТДЧ	Наносуспензия	[8]
2) Счетная концентрация	НЧС/л	очИСП-МС	Нанопорошок или наносуспензия	[9]
		МРР	Нанопорошок или наносуспензия	[10]
Для выполнения измерений НЧС в форме порошка предварительно диспергируют в растворителе. НЧС в форме суспензии подвергают измерениям без изменений.

      5.2 Средний размер и распределение по размерам первичных частиц

Методы ПЭМ или РЭМ применяют для определения среднего размера первичных частиц. Для определения размера НЧС и распределения по размерам НЧС допускается применять методы измерений, приведенные в документах, распространяющихся на другие материалы (см. [2], [3]). Средний размер и распределение по размерам НЧС определяют по анализу полученных изображений. По результатам анализа изображений ПЭМ и РЭМ размер НЧС определяют как эквивалентный диаметр сферической частицы или как один или группу диаметров Ферета первичных частиц. Средний размер НЧС и стандартное отклонение рассчитывают по результатам определения распределения первичных частиц по диаметрам.

      5.3 Дзета-потенциал

Поверхностный заряд является одной из основных характеристик наносуспензии, определяющей ее стабильность. Поверхностный заряд является функцией показателя водородных ионов (рН) и ионной силы наносуспензии [11], [12]. Для расчета дзета-потенциала в зависимости от ионной силы следует выполнить несколько измерений. Для определения дзета-потенциала рекомендуется выполнять измерения на наносуспензиях, представляющих собой монодисперсные системы с достаточно высокой концентрацией НЧС и удельной электрической проводимостью менее 1 мСм/см. Поверхностный заряд определяют методом ЭФРС, в протоколе регистрируют результаты вычисления дзета-потенциала и значения рН наносуспензии. Для определения дзета-потенциала наносуспензии допускается применять метод по ГОСТ ISO 13099-2.

      5.4 Удельная площадь поверхности

Удельную площадь поверхности определяют методом БЭТ по адсорбции газа, то есть удельную площадь поверхности адсорбента по изотермам адсорбции-десорбции инертного газа при заданных значениях температуры и давления. Для определения удельной площади поверхности нанопорошка допускается применять методы, приведенные в документах, распространяющихся на другие материалы, например метод БЭТ для определения общей удельной внешней и внутренней поверхностей дисперсных или пористых твердых частиц (диаметром более 2 нм) путем измерения количества адсорбированного газа (см. [4]) или метод БЭТ для определения удельной площади поверхности конкретных материалов (см. [5]). Для выполнения измерений применяют оборудование, аттестованное в установленном порядке. Следует обеспечить метрологическую прослеживаемость результатов измерений.

      5.5 Общее содержание серебра

Содержание серебра определяют как отношение массы общего серебра к массе НЧС. Для определения общего содержания серебра в наносуспензии или нанопорошке применяют стандартизованные ИСП-МС, ИСП-ОЭС или ААС. Методами ИСП-МС, ИСП-ОЭС и ААС получают количественные результаты анализа химического состава благодаря эффектам ионизации, возникающим в материалах, содержащих высокие концентрации химических элементов. Для определения общего содержания серебра в наносуспензии или нанопорошке допускается применять методы измерений, приведенные в документах, распространяющихся на другие материалы, например ГОСТ Р 56219, ГОСТ Р 57165, см. также [6], [7]. При выполнении измерений для разложения НЧС допускается применять, при необходимости, другие типы кислот в требуемых количествах, а также другие условия микроволнового разложения.

      5.6 Гидродинамический диаметр

Гидродинамический диаметр - характеристика НЧС в форме наносуспензии. Следует учитывать, что гидродинамический диаметр в целом больше диаметра частицы, так как гидродинамический диаметр частицы включает в себя гидратные и полимерные оболочки или другие возможные оболочки, образованные стабилизаторами суспензии. Значение среднего гидродинамического диаметра первичных частиц, как правило, больше значения их среднего диаметра, определяемого методом ПЭМ, за счет наличия на частицах покрывающих оболочек. Гидродинамический диаметр НЧС определяют методами ДРС или АТДЧ. Для определения гидродинамического диаметра НЧС в наносуспензии допускается применять методы ДРС и АТДЧ, приведенные в документах, распространяющихся на другие материалы, например ГОСТ Р 8.774 и [8] соответственно. С целью получения достоверных результатов измерений мономерных неагломерированных НЧС рекомендуется применять метод ДРС.

      5.7 Счетная концентрация

Методом очИСП-МС определяют счетную и массовую концентрацию НЧС по распределению их по размерам. Руководство по применению метода очИСП-МС для определения концентраций наночастиц приведено в [9]. Для определения счетной концентрации НЧС допускается применять метод МРР (см. [10]).

      6 Отбор проб

Отбор и подготовку репрезентативной пробы выполняют в соответствии с установленными требованиями и с учетом формы изготовления НЧС. Отбор проб и диспергирование нанопорошка в растворителе допускается выполнять в соответствии с требованиями, установленными в документах, распространяющихся на другие материалы, см. [13] и [14] соответственно.

Следует учитывать, что многие нанообъекты являются реактивными и их физические и химические свойства могут зависеть от условий места отбора и хранения проб. Для обеспечения сопоставимости результатов измерений изготовитель и потребитель должны согласовать условия места отбора и хранения проб.

      7 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать как минимум следующую информацию:

a) подробные сведения, необходимые для идентификации испытуемого материала (наименование продукции, химическое наименование);

b) ссылку на настоящий стандарт;

c) описание испытуемого материала;

d) условия отбора и подготовки проб для испытаний, описание характеристик проб;

e) дату испытаний, наименование испытательной лаборатории и сведения о системе менеджмента качества испытательной лаборатории;

f) результаты измерений, включая наименование характеристик и методы измерений в соответствии с таблицей 1 и, если требуется, таблицей 2;

g) любую дополнительную информацию, подтверждающую достоверность результатов измерений.

По возможности к протоколу следует прикладывать документы с результатами испытаний, подтверждающими антибактериальные свойства НЧС.

Приложение A

(справочное)

 Методы измерений, применяемые для определения характеристик антибактериальных наночастиц серебра

В таблице A.1 представлены сведения о методах измерений, применяемых для определения основных характеристик антибактериальных НЧС.

Таблица A.1 - Методы измерений, применяемые для определения основных характеристик антибактериальных НЧС

В таблице A.2 представлены сведения о методах измерений, применяемых для определения дополнительных характеристик антибактериальных НЧС.

Таблица A.2 - Методы измерений, применяемые для определения дополнительных характеристик антибактериальных НЧС

N п/п	Характеристика	Метод измерения	Краткое описание метода
2.1	Гидродинамический диаметр	ДРС	Данным методом определяют гидродинамический диаметр частиц, находящихся в броуновском движении. Методом ДРС определяют размеры частиц диаметром более 3 нм в зависимости от испытуемого материала. Руководство по применению метода приведено в ГОСТ Р 8.774. См. также ГОСТ Р 55723
		АТДЧ	АТДЧ основан на исследовании траекторий перемещения облученных сфокусированным пучком лазера частиц, находящихся в броуновском движении в суспензии. Проведя анализ временной зависимости интенсивности рассеянного света движущихся частиц, можно определить коэффициент диффузии и, следовательно, размеры частиц, например гидродинамический диаметр, по формуле Стокса - Эйнштейна. Руководство по применению метода приведено в [8]
2.2	Счетная концентрация	очИСП-МС	Методом очИСП-МС выявляют наличие одиночных наночастиц в очень низких концентрациях в материале. Методом очИСП-МС определяют размеры НЧС в водных суспензиях. Концентрации частиц, которые можно определить в водных суспензиях данным методом, варьируются от 10 до 10 частиц/л, что соответствует массовой концентрации в диапазоне приблизительно от 1 до 1000 нг/л. Фактическое значение зависит от типа используемого масс-спектрометра и типа анализируемых наночастиц. Данным методом можно определить ионные концентрации веществ в суспензии. Руководство по применению метода приведено в [9] частиц/л, что соответствует массовой концентрации в диапазоне приблизительно от 1 до 1000 нг/л. Фактическое значение зависит от типа используемого масс-спектрометра и типа анализируемых наночастиц. Данным методом можно определить ионные концентрации веществ в суспензии. Руководство по применению метода приведено в [9]
		МРР	Методом МРР определяют распределение НЧС по размерам, размеры и формы монодисперсных НЧС и концентрацию серебра

_______________

В тексте ISO/TS

20660:2019 допущена опечатка.

Приложение B

(справочное)

 Зависимость антибактериальных свойств наночастиц серебра от их характеристик

B.1 Общие положения

НЧС - наноматериал с антибактериальными свойствами, применяемый для изготовления потребительских товаров с целью контроля роста микроорганизмов на внешних и внутренних поверхностях изделий [16]. НЧС применяют в процессах катализа, для изготовления продукции фотоники, медицинских изделий, устройств накопления и преобразования энергии [17]. НЧС применяют для изготовления конечной продукции с улучшенными характеристиками в различных отраслях промышленности и научных исследованиях. Активное использование НЧС и наночастиц других металлов обусловлено их уникальными размерами, формами, составом, кристалличностью и структурно-зависимыми физико-химическими свойствами [17]. В настоящем стандарте установлен перечень основных и дополнительных характеристик антибактериальных НЧС, которые должны быть согласованы изготовителем и потребителем и включены в спецификации. В данном приложении представлена информация, обосновывающая выбор основных и дополнительных характеристик, установленных в настоящем стандарте.

B.2 Средний размер и распределение по размерам первичных частиц, удельная площадь поверхности

Размеры НЧС - важная характеристика, определяющая воздействие НЧС на биологические процессы, включая пиноцитоз, активацию клеток и распределение межклеточной жидкости, [18]-[23]. Антибактериальные свойства выявлены у НЧС сферической формы и размерами 7, 29 и 89 нм [24]. Ухудшение антибактериальных свойств НЧС происходит с увеличением их размеров. Влияние размеров НЧС на их антибактериальные свойства обусловлено увеличением реакционной активности НЧС с уменьшением их размеров и увеличением удельной площади поверхности по отношению к объему, [25]-[28]. Для изучения данного свойства применяют методы электронной микроскопии, с помощью которых выявляют влияние размеров НЧС на их взаимодействие с бактериями. Выявлено усиление антибактериальной эффективности у НЧС наименьших размеров за счет увеличения контактной площади поверхности, [29], [30]; повышенная агломерация покрытых углеродом НЧС способствует снижению их антибактериальной эффективности по сравнению с НЧС без покрытий [31].

B.3 Дзета-потенциал

Прямой метод определения поверхностного заряда - определение дзета-потенциала. На значение дзета-потенциала могут влиять условия измерения, включая температуру, уровень рН, концентрацию НЧС и вязкость наносуспензии. Выявленные отличия в результатах измерений дзета-потенциала как функции рН у различных НЧС свидетельствуют о необходимости учитывать влияние покрывающих агентов при определении поверхностного заряда НЧС

[32].

Снижение значения дзета-потенциала у НЧС без покрытий с уменьшением рН, как правило, является результатом уменьшения концентрации гидроксид-ионов (

) и, возможно, протонирования поверхности наночастиц. Атомы серебра на поверхности наночастицы координационно не насыщены

[33],

поэтому нуклеофильная молекула (

и

) отдает им пару электронов. При повышении уровня рН от 2 до 10 концентрация

увеличивается, следовательно,

более эффективно конкурируют за участки поверхности НЧС, что создает отрицательный поверхностный заряд в щелочной среде рН.

Тип стабилизирующего механизма оказывает влияние на потенциал НЧС к агрегации. Покрывающие агенты - это химические вещества, которые используют в синтезе НЧС для предотвращения их агрегации посредством электростатического отталкивания, стерического отталкивания или того и другого. В случае НЧС наиболее распространенными компенсирующими агентами являются цитраты и поливинилпирролидон [34]. Следует учитывать, что механизм и функциональные группы покрывающих агентов, участвующих в стабилизации коллоидных систем, различаются, что может привести к изменению размеров частиц и стабильности. Покрывающие агенты, например ионные жидкости, которые, как правило, используют для изменения поверхностных зарядов наночастиц, также могут влиять на биологическую активность НЧС, [35]-[37]. Выявлено, что НЧС с положительно или отрицательно заряженными поверхностями уничтожают бактерии при низких концентрациях, [38]-[40]. Стенки клеток грамположительных и грамотрицательных бактерий имеют суммарный отрицательный заряд. У грамположительных бактерий отрицательный заряд обеспечивают тейхоевые кислоты, которые связаны с пептидогликаном или нижележащей плазматической мембраной. Тейхоевые кислоты являются анионными из-за присутствия фосфатов в их структурах. Грамотрицательные бактерии имеют внешнее покрытие, состоящее из фосфолипидов и липополисахаридов. Данные липополисахариды придают сильный отрицательный заряд на поверхности клеток грамотрицательных бактерий [41]. Выявлены отличия антибактериальных свойств положительно и отрицательно заряженных НЧС [42]. Положительно заряженные НЧС обладают более высокой бактерицидной активностью в отношении всех испытуемых микроорганизмов по сравнению с отрицательно заряженными или нейтральными НЧС, [43], [44]. Данное явление, как правило, является результатом неспецифического электростатического взаимодействия между положительными и отрицательными зарядами, что усиливает антибактериальный эффект.

B.4 Общее содержание серебра и счетная концентрация наночастиц серебра

Скорость растворения серебра и образование нерастворимого хлорида серебра влияют на антибактериальные свойства НЧС. Следовательно, данные о количестве растворенного и дисперсного серебра необходимо указывать при поставке конечному потребителю. Одним из методов, с помощью которого различают растворенное и дисперсное серебро, является метод очИСП-МС. Допускается применять методы ИСП-МС, ИСП-ОЭС и ААС для определения концентрации и общего содержания серебра в пробе.

Выявлено, что НЧС высвобождают ионы серебра быстрее, что приводит к более высокой общей концентрации серебра в материале и, как следствие, его токсичности [45]. Антибактериальный эффект выявлен при концентрации серебра от 1 до 30 ppm, в зависимости от содержания и размера НЧС. При взаимодействии НЧС с микроорганизмами высвобождаются ионы серебра, которые по-разному воздействуют на микроорганизмы и повреждают их [17]. Ионы серебра, выделяемые НЧС, могут взаимодействовать с хлоридом, который, как правило, присутствует в бактериальных питательных средах и проявляет аналогичные окисленному серебру свойства [46]. Высокие концентрации хлорид-ионов в обычно используемых средах могут вызвать осаждение ионов серебра (Ag) в виде хлорида серебра (AgCI), таким образом маскируя вклад растворенного серебра в антибактериальный эффект НЧС. В биологической системе механизм антибактериального эффекта недостаточно изучен. Установлены несколько возможных механизмов: 1) ионы серебра с положительным зарядом, выделяющиеся из НЧС, способны быстро связываться с сульфгидрильными группами на поверхности бактерий, что приводит к изменению и повреждению структур бактерий; 2) поглощение ионов серебра или небольших НЧС нарушает образование аденозинтрифосфата (АТФ) и репликацию дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК); 3) НЧС и ионы серебра генерируют активные формы кислорода (АФК), что приводит к окислительному стрессу и повреждению бактерий и т.д., [47]-[49].

B.5 Гидродинамический диаметр

Метод многоуглового ДРС применяют для определения гидродинамических радиусов частиц, механизмов их агрегации и взаимодействия между частицами. Следует учитывать, что ионы и другие связанные молекулы увеличивают размеры НЧС по сравнению с размерами, определенными методом ПЭМ. Поэтому гидродинамические диаметры частиц больше, чем их диаметры, определенные методом ПЭМ. Во многих исследованиях подчеркивается важность определения гидродинамических диаметров НЧС для оценки и оптимизации размеров наночастиц и их биологической активности.

Приложение C

(справочное)

 Методы измерений, применяемые для определения антибактериальных свойств наночастиц серебра

Для определения антибактериальных свойств НЧС допускается использовать различные методы измерений, в том числе приведенные в национальной фармакопее или установленные в нормативных документах регулирующих органов. При этом следует учитывать требования к конечной продукции, в состав которой входят НЧС.

Антибактериальные свойства НЧС не стандартизованы. В настоящем стандарте отсутствуют рекомендации по применению методов измерений для определения антибактериальных свойств НЧС. Для определения антибактериальных свойств НЧС рекомендуется применять методы, приведенные в [50] и [51].

Приложение ДА

(справочное)

 Сведения о соответствии ссылочных национальных и межгосударственных стандартов международным стандартам, использованным в качестве ссылочных в примененном международном документе

Таблица ДА.1

 Библиография

[1]	ИСО 26824	Определение характеристик частиц систем макрочастиц. Словарь (Particle characterization of particulate systems - Vocabulary)
[2]	ИСО 16700	Анализ с использованием микропучка. Сканирующая электронная микроскопия. Руководящие указания для калибровки увеличения изображения (Microbeam analysis - Scanning electron microscopy - Guidelines for calibrating image magnification)
[3]	ISO/TS 10797	Нанотехнологии. Определение характеристик одностенных углеродных нанотрубок с использованием метода просвечивающей электронной микроскопии (Nanotechnologies - Characterization of single-wall carbon nanotubes using transmission electron microscopy)
[4]	ИСО 9277	Определение удельной площади поверхности твердых тел по адсорбции газа с применением метода Брункера, Эммета и Теллера (БЭТ-метод) (Determination of the specific surface area of solids by gas adsorption - BET method)
[5]	ИСО 18757	Керамика тонкая (высококачественная керамика, высококачественная техническая керамика). Определение удельной поверхности керамических порошков по адсорбции газа методом БЭТ (Fine ceramics (advanced ceramics, advanced technical ceramics) - Determination of specific surface area of ceramic powders by gas adsorption using the BET method)
[6]	ИСО 17294-1	Качество воды. Применение масс-спектрометрии индуцируемой плазмы (ICP-MS). Часть 1. Общее руководство (Water quality - Application of inductively coupled plasma mass spectrometry (ICPMS) - Part 1: General guidelines)
[7]	ИСО 26845	Химический анализ огнеупорных материалов. Общие требования к влажному химическому анализу, спектрометрии с атомной абсорбцией (AAS) и спектрометрии с атомной эмиссией индуктивно связанной плазмы (ICP-AES) (Chemical analysis of refractories - General requirements for wet chemical analysis, atomic absorption spectrometry (AAS) and inductively coupled plasma atomic emission spectrometry (ICP-AES) methods)
[8]	ИСО 19430	Анализ гранулометрического состава. Метод анализа по отслеживанию траекторий частиц (РТА) (Particle size analysis - Particle tracking analysis (РТА) method)
[9]	ISO/TS 19590	Нанотехнологии. Распределение по размерам и концентрация неорганических наночастиц в водной среде с помощью масс-спектрометрии одиночных частиц с индуктивно связанной плазмой (Nanotechnologies - Size distribution and concentration of inorganic nanoparticles in aqueous media via single particle inductively coupled plasma mass spectrometry)
[10]	Pauw R., C., A. Nanoparticle size distribution quantification: results of a small-angle X-ray scattering inter-laboratory comparison//Journal of applied crystallography, 50. - 2017. - 1280-1288
[11]	Palmer Richard E. Characterization of Nanomaterials in Complex Environmental and Biological Media, Volume 8. - 2015. - 1st Edition
[12]	Haider M., & Mehdi M.S. Study of morphology and Zeta Potential analyzer for the Silver Nanoparticles//lnternational Journal of Scientific & Engineering Research. - 2014. - 5 (7): 381-387
[13]	ИСО 14488	Материалы на основе твердых частиц. Отбор и деление проб для определения характеристик частиц (Particulate materials - Sampling and sample splitting for the determination of particulate properties)
[14]	ИСО 14887	Подготовка образца. Процедуры диспергирования порошков в жидкостях (Sample preparation - Dispersing procedures for powders in liquids)
[15]	ISO/TS 10798	Нанотехнологии. Определение характеристик одностенных углеродных нанотрубок с использованием анализа методом растровой электронной микроскопии и энергодисперсионной рентгеновской спектроскопии (Nanotechnologies - Charaterization of single-wall carbon nanotubes using scanning electron microscopy and energy dispersive X-ray spectrometry analysis)
[16]	Zhang X., Liu Z., Shen W., Gurunathan S. Silver Nanoparticles: Synthesis, Characterization, Properties, Applications, and Therapeutic Approaches//lnternational Journal of Molecular Science. - 2016. - 17 (9): 1534
[17]	Helmlinger J., Sengstock C., Gross-Heitfeld C., Mayer C., Schildhauer T.A., M., Epple M. Silver nanoparticles with different size and shape: equal cytotoxicity, but different antibacterial effects//RSC Advances. - 2016. - 6 (22), 18490-18501
[18]	Harush-Frenkel O., Debotton N., Benita S., Altschuler Y. Targeting of nanoparticles to the clathrin-mediated endocytic pathway//Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2007. - 353, 26-32
[19]	Cha K., Hong H.W., Choi Y.G., Lee M.J., Park J.H., Chae H.L., Ryu G., Myung H. Comparison of acute responses of mice livers to short-term exposure to nano-sized or microsized silver particles//Biotechnology Letters. - 2008. - 30, 1893-1899
[20]	Chung Y.C., Chen I.H., Chen C.J. The surface modification of silver nanoparticles by phosphoryl disulfides for improved biocompatibility and intracellular uptake//Biomaterials. -2008. - 29, 1807-1816
[21]	Kastl L., Sasse D., Wulf V., Hartmann R., Mircheski J., Ranke C., Carregal-Romero S., Mart’inez-L’opez J.A., Fern’andez-Chac’on R., Parak W.J., Elsasser H.P., RiveraGil P. Multiple Internalization Pathways of Polyelectrolyte Multilayer Capsules into Mammalian Cells//ACS Nano. - 2013. - 7, 6605-6618
[22]	Shang L., Nienhaus K., Jiang X., Yang L., Landfester K., V., Simmet T, Nienhaus G.U. Nanoparticle interactions with live cells: Quantitative fluorescence microscopy of nanoparticle size effects//Beilstein Journal of Nanotechnology. - 2014. - 5, 2388-2397
[23]	Kuhn D.A., Vanhecke D., Michen F., Blank R, Gehr P., Petri-FinkA., Rothen-Rutishauser B. Different endocytotic uptake mechanisms for nanoparticles in epithelial cells and macrophages//Beilstein Journal of Nanotechnology. - 2014. - 5, 1625-1636
[24]	Martinez-Castanon G.A., Nino-Martinez N., Martinez-Gutierrez F., Martinez-Mendoza J.R., Ruiz J. Synthesis and antibacterial activity of silver nanoparticles with different sizes//Journal of Nanoparticle Research. - 2008. - 10, 1343-1348
[25]	Morones J.R., Elechiguerra J.L., Camacho A., Holt K., Kouri J.B., Ramirez J.T., Yacaman M.J. The bactericidal effect of silver nanoparticles//Nanotechnology. - 2005. - 16:2346-2353
[26]	Lok C.N., Ho C.M., Chen R., He Q.Y., Yu W.Y., Sun H., Tarn P.K., Chiu J.F., Chen C.M. Proteomic analysis of the mode of antibacterial action of silver nanoparticles//Journel of Proteomemcis Research. - 2006. - 5:916-924
[27]	Panacek A., L., Prucek R., Kolar M., Vecerova R., N., Sharma V.K., Nevecna T., Zboril R. Silver colloid nanoparticles: Synthesis, characterization, and their antimicrobial activity//Journal of Physical Chemistry. - 2006. - B, 110:16248-16253
[28]	Dror-Ehre A., Mamane H., Belenkova T., Markovich G., Adin A. Silver nanoparticle-E. coli colloidal interaction in water and effect on E. coli survival//Journal of Colloid and Interface Science. - 2009. - 339: 521-526
[29]	Khaydarov R.R., Khaydarov R.A., Estrin Y., Evgrafova S., Scheper T., Endres C., Cho S.Y., Linkov I., Steevens J. Nanomaterials: Risk and Benefits, Springer, Netherlands. - 2009. - 287-299
[30]	Pal S., Tak Y.K., Song J.M. Does the antibacterial activity of silver nanoparticles depend on the shape of the nanoparticle? Astudy of the Gram-negative bacterium Escherichia coli//Appled and Environmental Microbiology. - 2007. - 73:1712-1720
[31]	Monteiro-Riviere N.A., Oldenburg S.J., Inman A.O. Interactions of aluminum nanoparticles with human epidermal keratinocytes//Journal of Applied Toxicology. - 2010. - 30: 276-285
[32]	El Badawy A.M., Luxton T.P., Silva R.G., Scheckel K.G., Suidan M.T., Tolaymat T.M. Impact of Environmental Conditions (pH, Ionic Strength, and Electrolyte Type) on the Surface Charge and Aggregation of Silver Nanoparticles Suspensions//Environmental science and technology. - 2010. - 44, 4, 1260-1266
[33]	Mulvaney P., Linnert T., Henglein A. Surface chemistry of colloidal silver in aqueous solution: observations on chemisorption and reactivity//Journal of physical chemistry. - 1991. - 95, 7843-7846
[34]	Tan S., Erol M., Attygalle A., Du H., Sukhishvili S. Synthesis of Positively Charged Silver Nanoparticles via photoreduction of AgNO3 in branched polyethyleneimine/HEPES solutions//Langmuir. - 2007. - 23, 9836-9843
[35]	Tanner E.E., Batchelor-McAuley C., Compton R.G. Nanoparticle capping agent controlled electron-transfer dynamics in ionic liquids. Chemistry//A European Journal. - 2016. - 22:5976-81
[36]	Abbaszadegan A., Nabavizadeh M., Gholami A., Aleyasin Z., Dorostkar S., Saliminasab M. Positively charged imidazolium-based ionic liquid-protected silver nanoparticles: A promising disinfectant in root canal treatment// International Endodontic Journal. - 2015. - 48:790-800
[37]	Ebrahiminezhad A., Bagheri M., Taghizadeh S., Berenjian A., Ghasemi Y Biomimetic synthesis of silver nanoparticles using microalgal secretory carbohydrates as a novel anticancer and antimicrobial//Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology. - 2016. - 7
[38]	Gholami A., Ghoshoon M.B., Ghafari P., Ghasemi Y. The effect of different positively charged silver nanoparticles against bacteria, fungi and mammalian cell line/Trends in pharmaceutical science. - 2017. - 3(2): 135-142
[39]	Chang T.Y., Chen C.C., Cheng K.M., Chin C.Y., Chen Y.H., Chen X.A., Sun J.R., Young J.J., Chiueh T.S. Trimethyl chitosan-capped silver nanoparticles with positive surface charge: Their catalytic activity and antibacterial spectrum including multidrug-resistant strains of Acinetobacter baumannii//Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. - 2017. - 155: 61-70
[40]	Salvioni L., Galbiati E., Collico V., Alessio G., Awakumova S., Corsi R., Tortora P., Prosperi D., Colombo M. Negatively charged silver nanoparticles with potent antibacterial activity and reduced toxicity for pharmaceutical preparations//International Journal of Nanomedicine. -2017. - 12: 2517-2530
[41]	Silhavy T.J., Kahne D., Walker S. The bacterial cell envelope, Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. - 2010. - 2 a000414
[42]	Gottenbos B., Grijpma D.W., van der Mei H.C., Feijen J., Busscher H.J. Antimicrobial effects of positively charged surfaces on adhering gram-positiveand gram-negative bacteria//Journal of Antimicrobial Chemotherapy. - 2001. - 48: 7-13
[43]	Lee K.J., Browning L.M., Nallathamby P.D., Xu X.H.N. Study of charge-dependent transport and toxicity of peptide-functionalized silvernanoparticles using zebrafish embryos and single nanoparticle plasmonicspectroscopy//Chemical Research in Toxicology. - 2013. - 26: 904-917
[44]	Abbaszadegan A., Ghahramani Y., Gholami A., Hemmateenejad В., Dorostkar S., Nabavizadeh M., Sharghi H. The effect of charge at the surface ofsilver nanoparticles on antimicrobial activity against gram-positive andgram-negative bacteria: a preliminary study//Journal of Nanomaterials. - 2015. - 205: 720654
[45]	Sotiriou G.A., & Pratsinis S.E. Engineering nanosilver as an antibacterial, biosensor and bioimaging material// Current Opinion in Chemical Engineering. - 2011. - 1, 3-10
[46]	Choi O., Deng K.K., Kim N.J., Ross L., Surampalli R.Y., Hu Z. The inhibitory effects of silver nanoparticles, silver ions, and silver chloride colloids on microbial growth/Water research. - 2008. - 42(12), 3066-3074
[47]	Raza M.A., Kanwal Z., Rauf A., Sabri A.N., Riaz S., Naseem S. Size-and ShapeDependent Antibacterial Studies of Silver Nanoparticles Synthesized by Wet Chemical Routes//Nanomaterials. - 2016. - 6 (4), 74
[48]	Jalalia S.A.H., & AIIafchianb A.R. Assessment of antibacterial properties of novel silver nanocomposite//Journal of theTaiwanlnstitute of Chemical Engineers. - 2016. - 59, 506-513
[49]	Pandey J.K., Swarnkar R.K., Soumya K.K., Dwivedi P., Singh M.K., Sundaram S., Gopal R. Silver nanoparticles synthesized by pulsed laser ablation: as a potent antibacterial agent for human enteropathogenic gram-positive and gram-negative bacterial strains//Applied biochemistry and biotechnology. - 2014. - 174 (3), 1021-1031
[50]	ISO/TS 16550		Нанотехнологии. Определение активности серебряных наночастиц путем выделения мурамовой кислоты из Staphylococcus aureus (Nanotechnologies - Determination of silver nanoparticles potency by release of muramic acid from Staphylococcus aureus)
[51]	Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility test: M2-A9 Vol.26 No.1, Clinical and laboratory standards insititute