Методические указания по методам контроля МУК 4.2.1174-02 Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспоридий для гигиенической оценки эффективности водоочистки.
МУК 4.2.1174-02-99
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДЕЛЬНЫХ ТЕСТОВ ЦИСТ ЛЯМБЛИЙ И ООЦИСТ КРИПТОСПОРИДИЙ ДЛЯ ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВОДООЧИСТКИ
Дата введения 2003-02-01
УТВЕРЖДЕНО Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 14 ноября 2002 года
1. Общее положение и область применения
1.1. Методические указания устанавливают методы приготовления модельных жидкостей, содержащих цисты лямблий и (или) ооцист криптоспоридий, и применения их для гигиенической оценки эффективности водоочистки различными технологиями.
2. Нормативные ссылки
2.1. МУК 4.2.964-00 "Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого назначения".
2.2. МУК 4.2.796-99 "Методы санитарно-паразитологических исследований".
2.3. МУК 4.2.735-99 "Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов".
2.4. СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества".
2.5. СанПиН 2.1.2.568-96* "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов".
2.6. СанПиН 3.2.563-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации".
2.7. ГОСТ 2874-82* "Вода питьевая. Контроль за качеством".
2.8. СП 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".
3. Методика подготовки модельного теста с цистами лямблий и использование его для оценки эффективности водоочистных технологий
3.1. Этапы проведения методики
3.1.1. Подготовка модельной жидкости (воды), содержащей определенное (не менее 15) число лямблий в 1 куб.дм (л).
3.1.2. Обработка не менее 50 куб.дм модельной жидкости (1 проба) на испытуемом водоочистном устройстве (фильтрация, адсорбция, разрушение и прочие способы инактивации цист) как минимум в 3-х повторностях.
3.1.3. Контроль за содержанием цист лямблий и их жизнеспособностью в конечном продукте, получаемом после обработки модельной жидкости на испытуемом устройстве.
3.1.4. Оценка эффективности барьерной функции в отношении цист лямблий и выдачи соответствующего заключения.
3.2. Подготовка модельной жидкости
Лаборатории, осуществляющие сертификационные испытания водоочистных устройств по паразитологическому показателю, должны иметь запас максимально очищенной взвеси цист лямблий (Giardia lamblia = Lamblia intestinalis) в объеме не менее 25 мл с содержанием цист не менее 10000 экз. в 1 мл.
При испытании водоочистных устройств, использующих химические и физические (УФ-лучи, МИО, озон и др.) факторы воздействия, используются только жизнеспособные тест-объекты. Цисты лямблий, выделенные из фекалий человека, сохраняют свою жизнеспособность в полном объеме в течение 10 суток при условии хранения их при 4 °С.
3.2.1. Материалом для получения жизнеспособных цист лямблий могут служить фекалии больных лямблиозом лиц и лиц-цистоносителей. Материал может быть получен в инфекционных больницах (особое внимание должно быть обращено на детские отделения), кишечных кабинетах поликлиник, гастроэнтерологических отделениях больниц и клиник, паразитологических лабораториях центров госсанэпиднадзора.
Специалист, осуществляющий подготовку взвесей тест-объектов, должен руководствоваться СП 1.2.731-99 (п.2.8).
Цисты лямблий выделяют из оформленных или полуоформленных фекалий инвазированных лямблиями людей. Для этого используются методы обнаружения цист лямблий, описанные в нормативно-методических документах МУК 4.2.735-99 (п.2.3).
Фекалии, в которых обнаруживаются цисты лямблий более 100 экз. в одном поле зрения при 200-кратном увеличении микроскопа (окуляр - 10х, объектив - 20х), следует подвергать соответствующей дальнейшей обработке.
________________
* Рисунки не приводятся
3.2.1.2. В качестве флотационной жидкости используется насыщенный (30%) раствор сахарозы (насыщение достигается при условии нерастворения кристаллов сахарозы в воде с температурой около 50 °С при перемешивании или встряхивании).
Раствор следует остудить до 18-20 °С. Обработка осадка фекалий флотирующим раствором должна сопровождаться интенсивным перемешиванием с помощью пипетки или стеклянной палочки.
Для ускорения перехода цист лямблий из осадка в поверхностную пленку флотанта и очищения их пробирки центрифугируют при 1500 об./мин. в течение 5 мин.
После 10-15-минутной экспозиции поверхностную пленку флотанта снимают металлической петлей (из медной или алюминиевой проволоки) с внутренним диаметром 5-6 мм и переносят в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия или жидкости Барбагалло (3%-ным раствором формальдегида на физиологическом растворе). Процедуру повторяют не менее 3-х раз. Вместо петли можно использовать пипеточный дозатор 0,1 мл, которым осторожно снимают поверхностную пленку. Для получения концентрированной взвеси цист в работе должно быть задействовано 10 и более пробирок (емкостью 10-15 мл) с фекалиями и флотантом.
3.2.1.3. Для более высокой очистки взвеси цист от фекального загрязнения ее подвергают дополнительной обработке 8%-ным раствором сахарозы следующим образом: взвесь цист центрифугируют 3 мин. при 1500 об./мин., надосадочную жидкость удаляют, осадок осторожно переносят на поверхность 8%-ного раствора сахарозы (6 мл и более) в центрифужной пробирке. Эту суспензию вновь центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об./мин. Надосадочную жидкость удаляют, а взвесь, обогащенную отмытыми цистами, хранят в пробирках с резиновыми пробками при 4 °С.
Жизнеспособность отмытых цист при данном режиме консервации сохраняется в течение 10 суток. Даже если суспензия не подвергалась дополнительно очистке, ее следует освободить от остатков сахарозы путем 2-3-кратного промывания, что резко снизит возможность развития в суспензии плесени и бактериальной флоры.
При получении взвеси формалинизированных цист лямблий в качестве начального этапа обработки фекалий может быть использована методика формалин-эфирного осаждения (см. МУК 4.2.735-99, стр.13, 14, 25, 26). При этом могут быть использованы и фекалии, законсервированные в фиксирующих жидкостях (Барбагалло, Турдыева и др.).
3.2.2. Количественное определение цист лямблий в полученной взвеси. Взвесь интенсивно встряхивают путем постукивания пальцем по пробирке или размешивания стеклянной палочкой. Пипеточным дозатором отбирают 0,1 мл и переносят на предметное стекло. Образовавшуюся на стекле каплю накрывают покровным стеклом и микроскопируют при 200-кратном увеличении микроскопа (окуляр - 10х, объектив - 20х). При таком увеличении микроскопа покровное стекло размером 24x24 мм накрывает площадь, соответствующую 2935 полям зрения. Просматривают не менее 20 полей зрения и подсчитывают число цист лямблий в каждом из них. Числа суммируют и делят на число просмотренных полей; получается среднее число цист в одном поле зрения. Это число умножают на 2935 и получают усредненное число цист, содержащихся в 0,1 мл взвеси. При умножении на 10 получают содержание в 1 мл взвеси с поправкой +/- 5%. Это маточная взвесь, которая должна содержать около 200000 цист лямблий в 1 мл.
3.2.2.1. Концентрация цист лямблий в 1 мл взвеси, предназначенной для приготовления модельной жидкости (рабочая суспензия), должна составлять не менее 2000 единиц. Если она менее этих цифр, то ее корректируют добавлением более концентрированной взвеси. Если содержание цист превышает 10% обозначенной нормы, то суспензию разводят.
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.