ГОСТ 16204-2018 Пищевая продукция. Определение липофильных токсинов водорослей (токсинов окадаиковой кислоты, ессотоксинов, азаспирацидов, пектенотоксинов) в моллюсках и продукции из них методом ВЭЖХ-МС/МС.

        ГОСТ EN 16204-2018

 МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 ПИЩЕВАЯ ПРОДУКЦИЯ

 Определение липофильных токсинов водорослей (токсинов окадаиковой кислоты, ессотоксинов, азаспирацидов, пектенотосксинов) в моллюсках и продукции из них методом ВЭЖХ-МС/МС

 Foodstuffs. Determination of lipophilic algal toxins (okadaic acid group toxins, yessotoxins, azaspiracids, pectenotoxins) in shellfish and shellfish products by LC-MS/MS

МКС 67.050

Дата введения -*

 Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результатам голосования в АИС МГС (протоколом от 30 августа 2018 г. N 111-П)

За принятие стандарта проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 16204:2012* "Продукты пищевые. Определение липофильных токсинов водорослей (токсинов окадаиковой кислоты, ессотоксинов, азаспирацидов, пектенотоксинов) в моллюсках и продукции из них методом LC-MS/MS" ("Foodstuffs - Determination of lipophilic algal toxins (okadaic acid group toxins, yessotoxins, azaspiracida, pectenotoxins) in shellfish and shellfish products by LC-MS/MS", IDT).

Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого руководит DIN.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного европейского стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных (государственных) органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация также будет опубликована в сети Интернет на сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Зарегистрирован N 14288 30 августа 2018 г.

 Введение

Липофильные морские биотоксины являются наиболее часто встречающимися токсинами водорослей в Европе и вырабатываются определенными морскими динофлагеллятами. Они могут накапливаться в моллюсках-фильтраторах, при употреблении которых в пищу, токсичность, достигшая высокого уровня, может нанести вред людям, например вызывать тошноту, рвоту и диарею.

Регламент Комиссии 15/2011 определяет метод ЖХ-МС/МС как базовый метод и относит его к методу, утвержденному сетью Референтных лабораторий ЕС. Метод, изложенный в EN 16204, предлагается в качестве одного из альтернативных методов, утвержденных Референтными лабораториями ЕС.

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает контрольный метод определения липофильных токсинов водорослей (жирорастворимых токсинов водорослей, вырабатываемых некоторыми динофлагеллятами) в сырых моллюсках и продуктах из моллюсков, включая вареных моллюсков, с помощью жидкостной хроматографии совместно с тандемной масс-спектрометрией ВЭЖХ-МС/МС [1], [2], [3]. Данный метод был подтвержден межлабораторным исследованием, состоящим из трех компонентов, посредством анализа как гомогенатов голубой мидии, зараженных естественным путем, так и обогащенных экстрактов из голубой мидии, устриц и двухстворчатого моллюска. Дополнительную информацию о валидации метода см. в приложении A. Кроме того, дополнительно изучены исследуемые матрицы (см. [4], [5]).

Предел обнаружения для токсинов группы окадаиковой кислоты, азаспирацидов и пектенотоксинов составляет 6 мкг/кг, для ессотоксинов - 10 мкг/кг.

Количественное определение окадаиковой кислоты (OA), пектенотоксина-2 (PTX-2), азаспирацида-1 (AZA-1) и ессотоксина (YTX) может осуществляться с использованием стандартных веществ, имеющихся в продаже. Если предположить равный коэффициент отклика, окадаиновая кислота используется для непрямого количественного определения двух динофизистоксинов - динофизистоксина-1 (DTX-1) и динофизистоксина-2 (DTX-2); аналогично азаспирацид-1 (AZA-1) используется для непрямого количественного определения азаспирацида-2 (AZA-2) и азаспирацида-3 (AZA-3), тогда как YTX используется для гомоессотоксина, 45-OH-ессотоксина и 45-OH-гомоессотоксина, а PTX-2 - для пектенотоксина-1 (PTX-1).

Установленный предел измерения (LOQ) для токсинов группы окадаиковой кислоты, азаспирацидов и пектенотоксинов составляет 20 мкг/кг мяса моллюсков и для ессотоксинов - 35 мкг/кг мяса моллюсков.

Посредством гидролиза [6] также могут быть количественно определены эфиры окадаиковой кислоты DTX-1 и DTX-2 как соответствующие кислоты в свободном состоянии.

      2 Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

      3 Сущность метода

Все мясо моллюсков удаляют из раковины и гомогенизируют. Экстрагируют водным раствором метанола (

=80%). Разделение проводят методом ВЭЖХ с градиентным элюированием на обращенно-фазовой колонке, детектирование осуществляют с применением тандемного масс-спектрометра типа тройного квадруполя. Концентрацию липофильных токсинов определяют с помощью внешней калибровки.

      4 Реактивы

Если не указано иное, используют реактивы аналитической степени чистоты и растворители, подходящие для ВЭЖХ-МС/МС. Воду следует дистиллировать в стеклянных сосудах или деминерализовывать перед использованием, или она должна иметь чистоту в соответствии с EN ISO 3696:1995. Поскольку применение данного метода связано с использованием реактивов, вредных для здоровья, то необходимо принять соответствующие меры предосторожности и защиты, такие как предотвращение контакта с кожей и использование вытяжки.

4.1

Водный раствор метанола

(

=80%).

Примечание - Результаты валидации настоящего метода были получены с использованием 80%-ного водного раствора метанола. Однако было доказано (см. [4], [5]), что эквивалентные результаты могут быть получены при использовании 100%-ного метанола.

4.2 Ацетонитрил

4.3 Гидроксид натрия, c(NaOH)=2,5 моль/л.

4.4 Соляная кислота, c(HCl)=2,5 моль/л.

4.5 Муравьиная кислота, массовая доля от 98% до 100%.

4.6 Формиат аммония

4.7 Азот, газообразный, степень чистоты не менее 5,0.

4.8 Гидрокарбонат аммония

4.9 Подвижная фаза 1 ВЭЖХ (хроматография в кислотных условиях)

4.9.1 Элюент A1

Растворяют 126 мг (для получения раствора с концентрацией 2 ммоль/л) формиата аммония (см. 4.6) и 2 мл (для получения раствора с концентрацией 50 ммоль/л) муравьиной кислоты (см. 4.5) в 50 мл воды и доводят объем до 1000 мл водой. При необходимости элюент фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.9.2 Элюент B1

Растворяют 126 мг (для получения раствора с концентрацией 2 ммоль/л) формиата аммония (см. 4.6) и 2 мл (для получения раствора с концентрацией 50 ммоль/л) муравьиной кислоты (см. 4.5) в 50 мл воды. Добавляют 950 мл ацетонитрила (см. 4.2) и при необходимости элюент фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.10 Подвижная фаза 2 ВЭЖХ (хроматография в общих условиях)

4.10.1 Элюент A2

Растворяют 395 мг (для получения раствора с концентрацией 5 ммоль/л) гидрокарбоната аммония (см. 4.8) в 1000 мл воды. При необходимости элюент фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.10.2 Элюент B2

Растворяют 395 мг (для получения раствора с концентрацией 5 ммоль/л) гидрокарбоната аммония (см. 4.8) в 50 мл воды. Добавляют 950 мл ацетонитрила (см. 4.2) частями по 100 мл. Энергично встряхивают после добавления каждой порции. При необходимости элюент фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

4.11 Гомогенат моллюска, не содержащий токсинов

Для оценки и определения матричного влияния стандартные растворы готовят на экстракте из чистой матрицы. Гомогенат моллюска, необходимый для данной цели, готовят из моллюсков, не содержащих токсинов.

4.12 Эталонные вещества

_______________

Эталонные вещества можно приобрести в Национальном исследовательском совете Канады (NRC) Океанографического института, Галифакс, например (

http://www.nrc-cnrc.gc.ca

). Здесь представлен пример подходящих продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта и не является одобрением CEN данных продуктов.

Примечание - При валидации были использованы нижеперечисленные эталонные вещества, имеющиеся в продаже. Рекомендуется в будущем использование других сертифицированных эталонных веществ, при их наличии.

4.12.1 Окадаиковая кислота (OA)

4.12.2 Пектенотоксин-2 (PTX-2)

4.12.3 Азаспирацид-1 (AZA-1)

4.12.4 Ессотоксин (YTX)

4.12.5 Стандартные растворы с несколькими токсичными веществами

Готовят стандартные калибровочные растворы (стандартный раствор с несколькими токсинами) в водном растворе метанола (см. 4.1). Рекомендуются следующие концентрации:

- OA, AZA-1, PTX-2: 1,5; 2,5; 5,0; 10,0; 15,0 и 25,0 нг/мл;

- YTX: 3,0; 5,0; 10,0; 20,0; 30,0 и 50,0 нг/мл.

4.12.6 Стандартные растворы с несколькими токсинами в матрице

Для оценки или определения матричного влияния готовят раствор со стандартной концентрацией аналитов путем его разбавления в метанольном экстракте из моллюсков, не содержащих испытуемые аналиты (см. 6.2). Рекомендуемые уровни концентрации:

- OA, AZA-1, PTX-2: 15,0 нг/мл;

- YTX: 30,0 нг/мл.

      5 Оборудование

Используют обычную лабораторную посуду и оборудование, и в частности следующее:

5.1 Механический высокоскоростной блендер или гомогенизатор

(например, Grindomix, Ultra-Turrax

®)

.

_______________

Ultra Turrax

®

является примером подходящего продукта, доступного на рынке у различных поставщиков. Данная информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта и не является одобрением CEN данного продукта.

5.2 Центрифуга (с режимом работы как минимум 2000g) и центрифужные пробирки (объем 20 мл).

5.3 Электровстряхиватель (например, Vortex).

5.4 Термоблок.

5.5 Аналитические весы с точностью до 0,1 мг.

5.6 Мерная колба 20 или 10 мл.

5.7 Мерный цилиндр и соответствующие пипетки.

5.8 Система высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с градиентным элюированием.

5.9 Пробирки для ВЭЖХ.

5.10 Жидкостной хроматограф с масс-селективным детектором типа тройного квадруполя ВЭЖХ-МС/МС.

5.11 Аналитическая колонка с обращенной фазой,

например RP C18, размер частиц 3 мкм, 150 мм (длина)

2 мм (диаметр), или C8, 50 мм (длина)

2 мм (диаметр), размер частиц 3 мкм (только для кислотных условий).

5.12 Шприцевый или мембранный фильтр (например, регенерированные целлюлозные мембраны с диаметром пор 0,45 мкм).

5.13 Шприц для фильтрующей системы, например, 1 мл.

5.14 Высокоскоростная настольная центрифуга (до 10000g).

      6 Проведение испытания

      6.1 Подготовка образцов

6.1.1 Общие положения

Хранение образцов моллюсков в замороженном состоянии (при минус 18°C) сроком до года не оказывает отрицательного влияния (см. [7]) на результаты, полученные с помощью данного метода.

6.1.2 Неочищенные образцы

После получения неочищенные образцы должны быть сразу извлечены из раковин и обсушены, или их извлекают и затем до начала исследования замораживают.

6.1.3 Сваренные образцы

Образец варят/обрабатывают паром после получения, затем обсушивают и снимают раковину. Если он не подвергается немедленной обработке, он может находиться в охлажденном состоянии в течение 24 ч.

Для того чтобы сварить моллюсков, воду (приблизительно от 2 до 3 л воды на 1 кг моллюсков) нагревают. Когда вода закипит, моллюсков помещают в воду и варят в кипящей воде приблизительно в течение 3 мин. После варки удаляют мясо моллюсков из открытых раковин и гомогенизируют.

      6.2 Гомогенизация и экстракция

Для определения липофильных токсинов водорослей гомогенизируют от 100 до 200 г мяса моллюсков или мясо 50-100 моллюсков, чтобы обеспечить репрезентативные данные. Если имеется только небольшое количество, то используют весь образец.

Мясо моллюсков гомогенизируют с помощью механического смесителя (см. 5.1) и незамедлительно готовят или отправляют на хранение при температуре минус 18°C.

Взвешивают (2,00

±0,02)

г гомогената в центрифужной пробирке (см. 5.2). Добавляют 9 мл водного раствора метанола (см. 4.1) и перемешивают в течение 1 мин с использованием блендера (см. 5.1) при 13500 мин

. Затем смесь центрифугируют (см. 5.2) приблизительно при 2000

g

при комнатной температуре в течение 5 мин. Декантируют супернатант в колбу 20 мл. Повторяют экстракцию. Декантируют второй супернатант в колбу 20 мл и разбавляют до метки водным раствором метанола (см. 4.1). Затем фильтруют экстракт, используя мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.12). В качестве альтернативы фильтрации с этой же целью может быть использована высокоскоростная настольная центрифуга 10000

g

(см. 5.14).

Если имеется только небольшое количество образца ((1,00±0,01) г), то гомогенат может быть экстрагирован дважды с применением 4,5 мл метанола (см. 4.1), а объем должен быть доведен до 10 мл.

      6.3 Гидролиз

Гидролиз необходим для определения токсинов окадаиковой кислоты, преставленной в виде сложных эфиров. На этом этапе определяют сумму свободных и связанных токсинов группы окадаиковой кислоты. Связанные токсины определяют как разницу между суммой (после гидролиза) и свободными токсинами (без гидролиза).

Пипеткой переносят 1,0 мл метанольного экстракта (см. 6.2) в пробирку (см. 5.9). Добавляют 125 мкл гидроксида натрия (см. 4.3) и нагревают в термоблоке (см. 5.4) при (76±2)°С в течение 40 мин. Охлаждают раствор до комнатной температуры, добавляют 125 мкл соляной кислоты (см. 4.4) для нейтрализации и встряхивают в течение 30 с (см. 5.3). Затем образцы фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.12).

Другие количества также могут быть использованы для гидролиза. Необходимо следить за соблюдением следующих соотношений:

- сырье/неочищенный экстракт/NaOH (2,5 моль/л)/HCl (2,5 моль/л), соответствующие 1/0,125/0,125.

Во время гидролиза пробирки должны быть плотно закрыты (точка кипения метанола составляет 65°C). Потеря метанола во время гидролиза может быть проверена путем взвешивания пробирок до и после нагревания.

      7 Анализ ВЭЖХ-МС/МС

      7.1 Общие положения

Представленные условия измерения являются лишь ориентировочными; они могут быть скорректированы с учетом соответствующих локальных условий. Необходимо применять тандемную тройную квадрупольную масс-спектрометрию. Анализируемые вещества, которые нельзя различить с помощью масс-спектрометрии (например, OA и DTX-2), должны быть изначально разделены с помощью хроматографии.

Перед началом измерений система ВЭЖХ должна быть тщательно промыта (используют пусковой режим). Кроме того, перед началом измерений рекомендуется выполнить пробное испытание, по меньшей мере для одного образца.

      7.2 Рабочие условия ВЭЖХ 1 (хроматография в кислотных условиях)

Хроматографические условия могут быть выбраны по собственному усмотрению. Допустимое минимальное время удерживания (для анализируемого вещества) должно быть в два раза больше времени удерживания "мертвого" объема колонки.

Пример 1. При использовании колонки C18, указанной в 5.11, и подвижных фаз A1 (см. 4.9.1) и B1 (см. 4.9.2) было установлено, что условия, указанные в таблице 1, являются оптимальными:

Таблица 1 - Рабочие условия ВЭЖХ 1

Пример 2 - При использовании колонки C8, указанной в 5.11, и мобильных фаз A1 (см. 4.9.1) и B1 (см. 4.9.2), было установлено, что условия, указанные в таблице 2, являются соответствующими:

Таблица 2 - Рабочие условия ВЭЖХ 2

      7.3 Рабочие условия ВЭЖХ 2 (хроматография в общих условиях)

При использовании колонки, указанной в 5.11, и мобильных фаз A2 (см. 4.10.1) и B2 (см. 4.10.2) было установлено, что условия, указанные в таблице 3, являются соответствующими (см. также рисунок C.1):

Таблица 3 - Рабочие условия ВЭЖХ 3

      7.4 Рабочие условия масс-спектрометрии

Измерение может быть выполнено с использованием различных приборов и параметров прибора. Некоторые параметры инструментов перечислены в приложении B. Данные условия показали удовлетворительные результаты.

      7.5 Калибровочная кривая

Строят калибровочную кривую, которая включает в себя не менее 6 уровней концентрации (исключая начало координат) и которая охватывает диапазон концентрации, например, от 1,5 до 25 нг/мл (или от 3,0 до 50 нг/мл для YTX). Если требуется более широкий диапазон концентрации, калибровочная кривая может быть разделена на несколько диапазонов или может быть приведена средневзвешенная калибровка.

Концентрация самого низкого стандарта должна быть на уровне или равна LOQ.

Образцы, концентрация которых выше самого высокого уровня калибровки, также могут быть разбавлены экстрактом холостой пробы моллюска для попадания в диапазон калибровки.

Соотношение между отсекаемым отрезком и наклоном рассчитывают и используют как параметр качества. Абсолютное значение данного соотношения соответствует концентрации, нанесенной на ось x, и не должно превышать половину предела. Кроме того, коэффициент корреляции

должен быть равен или больше 0,985.

      7.6 Определение токсинов водорослей в образцах тестовых растворов

Вводят аликвоты тестового образца (см. 6.2, 6.3) в систему ВЭЖХ в соответствующей последовательности.

      7.7 Меры управления свойств последовательностей

Все образцы, подлежащие количественному определению липофильных токсинов водорослей, должны анализироваться по крайней мере путем двойного ввода образца. Предел повторяемости для двух измерений должен быть меньше 2,8

, где

- стандартное отклонение повторяемости экстракта.

Для проверки качества химических анализов была доказана необходимость одновременного испытания не менее одного контрольного матричного образца на серию анализируемых образцов. Данный образец должен содержать известную концентрацию липофильных токсинов водорослей, так же как и образец с заданным значением, используемый в межлабораторном исследовании, сертифицированный исходный материал (например, NRC Mus-b), лабораторный исходный материал или холостой экстракт/холостой гомогенат с добавлением стандартов. Когда допустимое отклонение или границы предупреждения определены, различие стандартного отклонения повторяемости экстрактов и гомогенатов должно быть учтено.

Ожидаемые матричные эффекты должны быть скорректированы в ходе измерений, как описано в 8.3.

Для определения липофильных токсинов водорослей необходимо применение определенной последовательности измерений.

Рекомендуется следующий принцип действий:

а) для последовательностей, включающих более 20 образцов или превышающих время записи хроматограммы 12 ч:

1) калибровочные стандарты;

2) матричный стандарт;

3) образец для контроля качества;

4) образцы (n>20, первый ввод);

5) калибровочные стандарты;

6) матричный стандарт;

7) образец для контроля качества;

8) образцы (n>20, второй ввод);

9) при необходимости: один калибровочный стандарт;

б) для последовательностей, включающих менее 20 образцов или имеющих время записи хроматограммы менее 12 ч:

1) образцы (n<20, первый ввод);

2) калибровочные стандарты;

3) стандарт коррекции матрицы;

4) образец для контроля качества;

5) образцы (n<20, второй ввод);

6) при необходимости: один калибровочный стандарт.

Прогон стандартов или повторный ввод стандартов между образцами также допускается для коррекции смещения, хотя данная процедура не проводилась при валидации.

      8 Расчет

      8.1 Идентификация пика

Качественное обнаружение липофильных токсинов проводят путем сравнения времени удерживания анализируемых веществ в образце с анализируемыми веществами стандартных веществ или эталонного материала. Для окончательной идентификации аналита необходимо получить "подтверждающий" ион-продукт.

      8.2 Количественное определение с помощью внешней калибровки и коррекции матричных эффектов

Количественное определение осуществляют в соответствии с методом внешнего стандарта путем подставления значений площади пиков в калибровочную зависимость стандартных растворов.

Принимая во внимание равный коэффициент отклика, окадаиковую кислоту используют для количественного определения динофизистоксинов DTX-1 и DTX-2; аналогично AZA-1 используют для количественного определения AZA-2 и AZA-3. YTX используют для гомоессотоксина, 45-OH-ессотоксина и 45-OH-гомоессотоксина, а PTX-2 - для PTX-1, если применимо. Для определения эфиров OA, DTX-1 или DTX-2 количественное определение свободных кислот осуществляют до и после гидролиза. Было бы целесообразно использовать сертифицированные стандарты для других аналогов, как только они будут коммерчески доступны.

Оценка основана на линейном уравнении прямой регрессии отдельных липофильных токсинов водорослей. Коррекцию матричных эффектов осуществляют с помощью экстракта моллюсков, не содержащего токсинов, с той же концентрацией матрицы, которая содержит стандартное вещество (см. 4.12.6).

Рассчитывают концентрацию отдельных токсинов в образце с использованием формулы (1):

,                                        (1)

где C - концентрация анализируемого вещества в микрограммах токсина на килограмм образца;

A - площадь пика, в единицах измерения;

b - отрезок, отсекаемый на оси Y прямой регрессии;

a - наклон прямой регрессии;

F - коэффициент разбавления:

10 - для измерения сырого экстракта (см. 6.2) без гидролиза;

12,5 - для измерения сырого экстракта (см. 6.3) с гидролизом.

С помощью этапа гидролиза определяют сумму свободных и связанных токсинов группы окадаиковой кислоты. Связанные токсины определяют как разность между суммой (после гидролиза) и свободными токсинами (без гидролиза).

      8.3 Описание коррекции матричных эффектов

В валидационных исследованиях четко указано, что эффект влияния матрицы одного вида может быть применен к другим видам матрицы (см. [8]) с одним уровнем концентрации аналита.

Другие исследования показали, что правильно подобранная полная матричная градуировка может использоваться также и для коррекции матричных эффектов.

Когда применяют одноточечную коррекцию матрицы, то анализируют подготовленный матричный стандарт (см. 4.12.6). Концентрацию матричного стандарта определяют с помощью прямой регрессии. Найденная концентрация является показателем степени установленного извлечения (матричного эффекта) анализируемых веществ и отражает подавление отклика или усиление анализируемых веществ в матрице. Концентрацию, определенную в неизвестном образце, корректируют в соответствии со степенью установленного извлечения.

ПРИМЕР 1 AZA-1 в стандарте матрицы

                                                      (2)

c[матрица AZA1]=7,5 нг/мл, степень извлечения 100% (с внешним стандартом):

здесь: 15 нг/мл                                                                                                                           (3)

Степень установленного извлечения [матрица AZA-1]=50%                                                (4)

Если, например, степень установленного извлечения AZA-1 в матрице составляет 50%, то концентрация AZA-1 каждого неизвестного образца должна быть скорректирована путем применения коэффициента коррекции на степень установленного извлечения.

ПРИМЕР 2 AZA-1 коррекция матрицы в неизвестном образце:

                                                    (5)

Матричные эффекты определяют для отдельных токсинов следующим образом:

OA:	Степень извлечения стандарта 15 нг/мл в матрице; ОА также может быть скорректирован с использованием разбавления (например, 1/20 в матрице) Mus-b с экстрактом холостой пробы моллюсков;
DTX-2:	Принятие того же матричного эффекта, что и для OA;
DTX-1:	Степень извлечения DTX-1 в NRC Mus-b (например, 1/20 в матрице) или принятие того же матричного эффекта, что и для OA;
PTX-2:	Степень извлечения 15 нг/мл стандарта в матрице;
PTX-1:	Принятие того же матричного эффекта, что и для PTX-2;
YTX:	Степень извлечения 30 нг/мл стандарта в матрице;
45-OH-YTX, гомо-YTX и 45-OH-гомо-YTX:	Принятие того же матричного эффекта, что и для YTX;
AZA-1:	Степень извлечения 15 нг/мл стандарта в матрице;
AZA-2 и AZA-3:	Принятие того же матричного эффекта, что и для AZA-1.

_______________

Сертифицированный эталонный материал Mus-b получают из смеси пищеварительной железы мидий клеток водорослей.

Целесообразно использовать другие аналоги сертифицированных стандартов, как только они будут коммерчески доступны.

      8.4 Расчет общей токсичности

Концентрации определенных токсинов должны быть преобразованы в эквивалентность токсичности ключевого токсина данной конкретной токсинной группы путем применения факторов эквивалентности токсичности (TEF), предложенных EFSA (см. [9], [10], [11], [12]).

      9 Прецизионность

Подробная информация о межлабораторном исследовании на точность метода в соответствии с ISO 5725-2, ISO 5725-4 и ISO 5725-6 (см. [13], [14], [15]) приведена в приложении A. Значения, полученные на основе данного межлабораторного исследования, не могут быть применены к диапазонам концентраций и/или матрицам, отличным от тех, которые приведены в приложении A.

      10 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать следующие данные:

a) всю информацию, необходимую для идентификации образца (вид образца, происхождение образца, обозначение);

b) ссылку на настоящий стандарт;

c) дату и тип процедуры отбора образцов (если известны);

d) дату получения;

e) дату испытания;

f) результаты испытаний и единицы, в которых они были выражены;

g) любые особые моменты, наблюдаемые в ходе испытания;

h) любые действия, не указанные в методе или считающиеся необязательными, которые могли бы повлиять на результаты.

Приложение A

(справочное)

 Данные прецизионности

A.1 Подробная информация о межлабораторном исследовании

Данные, приведенные в таблицах A.1-A.12, были получены в процессе международного межлабораторного исследования (см. [8], [16]), организованного рабочей группой "Фикотоксины" Федерального ведомства Германии по защите потребителей и безопасности пищевых продуктов (Bundesamt

Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit - BVL) согласно Кодексу о пищевых продуктах и кормах Германии, раздел 64 (Lebensmittel- und Futtermittelgesetzbuch-LFGB,

§ 64)

в соответствии с ISO 5725-2, ISO 5725-4 и ISO 5725-6. В исследовании принимали участие 16 лабораторий с представителями из разных европейских стран (включая 7 НРЛ).

Данное валидационное исследование было проведено тремя независимыми дополнительными исследованиями. Данные прецизионности для окадаиковой кислоты, DTX-2, DTX-1 (включая их сложные эфиры), AZA-1, AZA-2, AZA-3, YTX, 45-OH-YTX и PTX-2 были определены в естественно загрязненных голубых мидиях (гомогенат вареных и сырых мидий), экстрактах с внешним стандартом устриц (гомогенат сырых моллюсков), экстрактах с внешним стандартом двухстворчатых моллюсков (гомогенат сырых моллюсков). Испытательные образцы с 1 по 8 были проанализированы 13 лабораториями путем двойного ввода (аналогично стандартному отклонению повторяемости (SD) экстракта) в трех отдельных последовательностях (промежуточные условия). Испытательные образцы с 9 по 12 были проанализированы 8 лабораториями в пределах одной последовательности посредством двойного ввода (аналогично стандартному отклонению повторяемости (SD) экстракта). Испытательные образцы с 13 по 16 были проанализированы 15 лабораториями в пределах одной последовательности путем двойного ввода (аналогично стандартному отклонению повторяемости (SD) экстракта). Результаты статистической оценки исследуемых токсинов приведены в таблицах A.1-A.12. Скорректированные значения коэффициента Хорвитца были рассчитаны согласно [17].

Различные аналитические условия, т.е. кислотные и базовые подвижные фазы, использовались разными участниками и не влияли на результаты лабораторных результатов.

Образец 2 представляет собой холостой гомогенат голубой мидии, в отношении которого все лаборатории пришли к заключению, что он является незагрязненным материалом.

Таблица A.1 - Данные прецизионности для азаспирацида-1 (AZA-1)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	-	13	13	13	7	7	15	15	-	-
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	-	11	12	13	7	7	15	15	-	-
Количество выбросов (лабораторий)	0	-	2	1	0	0	0	0	0	-	-
Количество одобренных результатов	156	-	66	72	156	28	28	30	30	-	-
Среднее значение , мкг/кг	96,36	<LOD	111,7	82,5	99,5	17,4	71,9	127,54	64,92	<LOD	<LOD
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	11,4	-	8,9	8,2	10,4	1,8	3,5	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	11,8	-	8,0	9,9	10,5	10,4	4,9	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	31,8	-	25,0	22,9	29,2	5,1	9,9	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	20,4	-	25,9	12,1	22,5	6,6	22,1	19,4	10,6	-	-
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	21,2	-	23,2	14,7	22,6	37,9	30,8	15,2	16,3	-	-
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	57,2	-	72,6	34,0	63,0	18,5	62,0	54,3	29,6	-	-
Промежуточное состояние, %	14,1	-	9,6	10,7	11,9	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	0,96	-	1,05	0,67	1,03	1,72	1,40	0,69	0,74	-	-
Коэффициент нескорректированный	0,93	-	1,04	0,63	1,00	1,29	1,30	0,69	0,67	-	-
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица А.2 - Данные прецизионности для азаспирацида-2 (AZA-2)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	-	13	-	-	-	7	15	14	-	-
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	-	13	-	-	-	6	14	13	-	-
Количество выбросов (лабораторий)	0	-	0	-	-	-	1	1	1	-	-
Количество одобренных результатов	156	-	78	-	-	-	24	28	26	-	-
Среднее значение , мкг/кг	21,80	<LOD	28,90	<LOD	<LOD	<LOD	10,78	36,22	19,29	<LOD	<LOD
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	3,16	-	4,7	-	-	-	1,0	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	14,5	-	16,3	-	-	-	9,5	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	8,85	-	13,2	-	-	-	2,9	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	8,24	-	7,6	-	-	-	4,5	11,9	6,6	-	-
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	37,8	-	26,2	-	-	-	42,0	32,8	34,0	-	-
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	23,7	-	21,2	-	-	-	12,7	33,3	18,4	-	-
Промежуточное состояние, %	24,4	-	18,0	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,72	-	1,19	-	-	-	1,91	1,49	1,54	-	-
Коэффициент нескорректированный	1,33	-	0,96	-	-	-	1,33	1,24	1,17	-	-
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.3 - Данные прецизионности для азаспирацида-3 (AZA-3)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	-	13	-	-	7	7	13	9	-	-
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	-	12	-	-	6	6	12	8	-	-
Количество выбросов (лабораторий)	0	-	1	-	-	1	1	1	1	-	-
Количество одобренных результатов	156	-	72	-	-	24	24	24	16	-	-
Среднее значение , мкг/кг	50,27	<LOD	49,88	<LOD	<LOD	10,98	41,59	11,02	8,11	<LOD	<LOD
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	5,5	-	6,3	-	-	0,7	1,9	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	10,9	-	12,7	-	-	6,1	4,6	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	15,3	-	17,7	-	-	1,9	5,4	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	14,7	-	12,3	-	-	3,6	11,4	3,7	1,8	-	-
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	29,2	-	24,6	-	-	32,4	27,3	33,7	22,4	-	-
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	41,1	-	34,4	-	-	10,0	31,8	10,4	5,1	-	-
Промежуточное состояние, %	13,1	-	13,7	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,33	-	1,12	-	-	1,47	1,24	1,53	1,02	-	-
Коэффициент нескорректированный	1,16	-	0,98	-	-	1,03	1,06	1,07	0,68	-	-
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.4 - Данные прецизионности для окадаиковой кислоты (OA)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	13	13	13	13	8	8	15	15	15	15
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	11	12	12	13	7	8	15	14	15	14
Количество выбросов (лабораторий)	0	2	1	1	0	1	0	0	1	0	1
Количество одобренных результатов	156	66	72	72	156	28	32	30	28	30	28
Среднее значение , мкг/кг	23,32	36,71	23,07	130,79	81,79	17,94	18,85	111,04	52,45	37,55	25,66
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	5,7	-	5,1	18,7	10,7	2,3	2,6	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	24,6	-	22,2	14,3	13,1	12,9	13,9	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	16,1	-	14,3	52,4	30,0	6,5	7,3	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	6,9	9,0	6,9	19,1	17,0	6,1	6,2	32,0	14,8	10,1	5,8
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	29,4	24,6	30,1	14,6	20,8	33,9	32,6	28,8	28,3	26,9	22,7
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	19,2	25,3	19,4	53,5	47,6	17,0	17,2	89,6	41,6	28,3	19,2
Промежуточное состояние, %	29,0	24,6	20,8	14,3	17,3	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,34	1,12	1,37	0,67	0,95	1,54	1,48	1,31	1,28	1,22	1,03
Коэффициент нескорректированный	1,04	0,94	1,07	0,67	0,89	1,16	1,12	1,29	1,13	1,02	0,82
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.5 - Данные прецизионности для окадаиковой кислоты (OA) после гидролиза

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	13	-	-	-	-	-	15	15	15	15
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	13	-	-	-	-	-	13	13	13	13
Количество выбросов (лабораторий)	0	0	-	-	-	-	-	2	2	2	0
Количество одобренных результатов	156	78	-	-	-	-	-	26	26	26	156
Среднее значение , мкг/кг	48,08	78,57	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	174,67	79,37	65,53	44,09
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	9,5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	19,7	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	26,5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	14,0	20,4	-	-	-	-	-	54,0	21,3	17,6	10,9
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	29,2	25,9	-	-	-	-	-	30,9	26,8	26,9	24,8
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	39,3	57,0	-	-	-	-	-	151,1	59,6	49,4	30,6
Промежуточное состояние, %	25,7	19,4	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,33	1,18	-	-	-	-	-	1,48	1,22	1,22	1,13
Коэффициент нескорректированный	1,16	1,10	-	-	-	-	-	1,48	1,14	1,11	0,97
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.6 - Данные прецизионности для динофизистоксина-1 (DTX-1)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	-	13	-	-	-	8	8	-	-	15	15
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	-	13	-	-	-	7	7	-	-	14	14
Количество выбросов (лабораторий)	0	0	-	-	-	1	1	-	-	1	1
Количество одобренных результатов	-	78	-	-	-	28	28	-	-	28	28
Среднее значение , мкг/кг	<LOD	68,51	<LOD	<LOD	<LOD	80,26	33,17	<LOD	<LOD	219,17	118,11
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	-	-	-	-	-	5,1	5,7	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	-	-	-	-	-	6,3	17,3	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	-	-	-	-	-	14,2	16,1	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	-	23,3	-	-	-	27,1	12,8	-	-	76,7	42,3
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	-	34,0	-	-	-	33,8	38,7	-	-	35,0	35,8
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	-	65,2	-	-	-	76,0	35,9	-	-	214,8	118,4
Промежуточное состояние, %	-	20,6	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	-	1,55	-	-	-	1,54	1,76	-	-	1,74	1,63
Коэффициент нескорректированный	-	1,42	-	-	-	1,45	1,45	-	-	1,74	1,62
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.7 - Данные прецизионности для динофизистоксина-1 (DTX-1) после гидролиза

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	-	13	-	-	-	-	-	-	-	15	15
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	-	13	-	-	-	-	-	-	-	14	14
Количество выбросов (лабораторий)	-	0	-	-	-	-	-	-	-	1	1
Количество одобренных результатов	-	78	-	-	-	-	-	-	-	28	28
Среднее значение , мкг/кг	<LOD	96,54	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	424,09	221,44
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	-	31,5	-	-	-	-	-	-	-	149,7	72,6
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	-	32,6	-	-	-	-	-	-	-	35,3	32,8
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	-	88,12	-	-	-	-	-	-	-	419,2	203,4
Промежуточное состояние, %	-	22,0	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	-	1,48	-	-	-	-	-	-	-	1,94	1,63
Коэффициент нескорректированный	-	1,43	-	-	-	-	-	-	-	1,94	1,63
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.8 - Данные прецизионности для динофизистоксина-2 (DTX-2)

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	13	13	-	-	8	8	15	15	-	-
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	13	11	-	-	8	8	15	15	-	-
Количество выбросов (лабораторий)	0	0	2	-	-	0	0	0	0	-	-
Количество одобренных результатов	156	78	66	-	-	32	32	30	30	-	-
Среднее значение , мкг/кг	129,50	119,74	116,52	<LOD	<LOD	36,21	82,02	187,95	99,20	<LOD	<LOD
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	19,29	-	14,10	-	-	6,95	16,65	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	14,9	-	12,1	-	-	19.2	20,3	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	54,03	-	39,48	-	-	19,47	46,62	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	49,73	40,59	40,90	-	-	9,78	31,99	40,4	27,3	-	-
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	38,4	33,9	35,1	-	-	27,0	39,0	21,5	27,5	-	-
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	139,24	113,66	114,51	-	-	27,37	89,56	113,1	76,4	-	-
Промежуточное состояние, %	19,8	18,5	13,1	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,76	1,54	1,60	-	-	1,23	1,77	1,05	1,25	-	-
Коэффициент нескорректированный	1,76	1,54	1,59	-	-	1,02	1,67	1,05	1,21	-	-
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.

Таблица A.9 - Данные прецизионности для динофизистоксина-2 (DTX-2) после гидролиза

Образец	1/3	4	5	7	6/8	9/11	10/12	13	14	15	16
Год межлабораторного испытания	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2009	2010	2010	2010	2010
Количество лабораторий	13	13	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Количество лабораторий, оставшихся после исключения выбросов	13	13	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Количество выбросов (лабораторий)	0	0	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Количество одобренных результатов	156	78	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Среднее значение , мкг/кг	179,42	155,43	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	<LOD	203,78	104,14	<LOD	<LOD
Стандартное отклонение повторяемости , мкг/кг	26,0	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Относительное стандартное отклонение повторяемости , %	14,5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Предел повторяемости r [ ], мкг/кг	72,8	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Стандартное отклонение воспроизводимости , мкг/кг	51,0	43,5	-	-	-	-	-	68,3	37,2	-	-
Относительное стандартное отклонение воспроизводимости , %	28,4	28,0	-	-	-	-	-	33,5	35,7	-	-
Предел воспроизводимости R [ ], мкг/кг	142,7	121,9	-	-	-	-	-	191,1	104,1	-	-
Промежуточное состояние, %	16,8	13,8	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Коэффициент Хорвитца, скорректированный в соответствии с [17]	1,37	1,32	-	-	-	-	-	1,65	1,62	-	-
Коэффициент нескорректированный	1,37	1,32	-	-	-	-	-	1,65	1,59	-	-
Образцы 1/3: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образец 4: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат.   Образец 5: экстракт образцов 1/3 и дополнительно с внешним стандартом PTX-2.   Образец 7: двухстворчатые моллюски сырые, экстракт контрольной пробы двухстворчатых моллюсков с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX.   Образцы 6/8: устрицы сырые, экстракт контрольной пробы устриц с внешним стандартом OA, AZA-1, PTX-2 и YTX (контрольная дублирующая проба).   Образцы 9/11: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 10/12: голубые мидии сваренные, загрязненный естественным образом гомогенат (контрольная дублирующая проба).   Образцы 13-16: голубые мидии сырые, загрязненные естественным образом гомогенаты.