ГОСТ 29185-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий.
ГОСТ 29185-91
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий
Food products. Methods for detection and quantity determination of sulphite-reducing clostridium
МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109
Дата введения 1993-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 23.12.91 N 2050
3. Настоящий стандарт соответствует ИСО 7937-85 в части выявления колоний, характерных для сульфитредуцирующих микроорганизмов
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта, подпункта |
2 | |
2 | |
2; 3.1.8; 3.1.9; 3.1.10; 3.2.1; 3.2.2; 3.2.3; 3.2.4; 3.2.7; 3.2.9 | |
3.2.6 | |
2 | |
1 | |
1; 4.1.1 | |
3.1.7; 4.1.4; 5.5; 5.7 | |
| 5.6
|
4.3; 4.6; 4.7.1; 4.7.2; 4.7.3 |
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта сульфитредуцирующих клостридий и два метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и метод посева в агаризованную среду.
Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в железосульфитсодержащие среды, инкубировании посевов при (37±1) °С не более 72 ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов по культуральным, морфологическим и биохимическим признакам к сульфитредуцирующим клостридиям.
Требования настоящего стандарта являются обязательными.
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор и подготовка проб пищевых продуктов - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);
________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 (здесь и далее).
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта);
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление растворов и реактивов
3.1.6. Растворы, приготовленные по пп.3.1.1-3.1.5, стерилизуют текучим паром в течение 1 ч.
3.1.8. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.9. Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.10. Реактив для определения каталазы готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Голодный агар готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.2. Мясную воду готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.3. Мясо-пептонный агар (бульон) с 0,1% глюкозы и дрожжевым экстрактом готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.4. Среду из сухого питательного агара с глюкозой готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2.6. Триптозо-сульфит-циклосериновый агар готовят по ГОСТ 10444.9.
3.2.9. Среду Китт-Тароцци без добавления агара, вазелинового масла готовят по ГОСТ 10444.1.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Определение количества сульфитредуцирующих клостридий
Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда содержащееся в колбе исходное разведение или продукт достигнут указанной температуры. После термообработки колбу немедленно охлаждают под струей водопроводной воды.
4.1.3. При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных навески продукта и (или) его разведения, отличающиеся друг от друга по количеству высеваемого продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) его разведение высевают в пробирки с одной из вязких питательных сред, приготовленных по п.3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8.1, или 3.2.8.2. Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения к питательной среде 1:9.
4.2. Определение присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий
При определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении эту навеску или разведение вносят в одну из вязких питательных сред, приготовленных по п.3.2.5 или 3.2.7, или 3.2.8.1, или 3.2.8.2.
4.3. Посевы по пп.4.1.3, 4.1.4 и 4.2 инкубируют при (37±1) °С не более 72 ч. Посевы на чашках Петри инкубируют в анаэробных условиях по ГОСТ 30425. Ежедневно посевы просматривают для обнаружения признаков роста сульфитредуцирующих микроорганизмов - почернения сульфитной среды.
4.4. Из посевов в вязкие среды отбирают пробирки с признаками роста - отдельными черными колониями или полностью почерневшей питательной средой на глубине свыше 1 см. Из отобранных пробирок проводят пересевы петлей в чашки Петри на поверхность одной из агаризованных сред, приготовленных по п.3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2 так, чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при (37±1) °С в течение 24-48 ч.
4.5. Из посевов на агаризованные среды (см. п.4.1.4) отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний.
4.6. Не менее 5 овальных черных или окруженных черным или серым ореолом колоний диаметром 4-5 мм, отобранных по п.4.4 или 4.5, высевают раздельно в свежерегенерированную по ГОСТ 30425 среду, приготовленную по п.3.2.9.
Посевы инкубируют при (37±1) °С не более 48 ч.
4.7. Подтверждение принадлежности выделенных сульфитредуцирующих микроорганизмов к роду Clostridium
4.7.1. Микроскопирование
Из культур, выросших, как указано в п.4.6, готовят два препарата и окрашивают по ГОСТ 30425, первый - по Граму, второй - для выявления бактериальных спор.
Сульфитредуцирующие клостридии представляют собой грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений параллельных клеток. При спорообразовании споры сульфитредуцирующих клостридий овальные или сферические, субтерминальные или терминальные.
4.7.2. Определение отсутствия каталазы
Отсутствие каталазы в культурах, выросших, как указано в п.4.6, определяют по ГОСТ 30425.
Сульфитредуцирующие клостридии каталазу не образуют.
4.7.3. Подтверждение анаэробного роста
Подтверждение анаэробного роста проводят посевом по ГОСТ 30425 культур, выросших, как указано в п.4.6, в чашки Петри под стекло или в трубки Вейона. Для посева используют одну из агаризованных питательных сред, приготовленных по п.3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.7, или 3.2.8, или 3.2.8.2. Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37±1) °С в течение 18-72 ч.
Для сульфитредуцирующих клостридий характерен анаэробный рост.
Допускается взамен подтверждения анаэробного роста проводить определение отсутствия роста в аэробных условиях. При этом культуры высевают в чашки Петри на поверхность агаризованной среды.
Посевы инкубируют в аэробных условиях при (37±1) °С в течение 18-72 ч.
5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты испытания оценивают по каждой пробе отдельно.
5.2. Если при изучении культуральных, морфологических и биохимических свойств обнаружены сульфитредуцирующие грамположительные, каталазоотрицательные, способные расти в анаэробных условиях микроорганизмы, то дают заключение о том, что эти микроорганизмы относятся к сульфитредуцирующим клостридиям.
5.3. Если при подтверждении характерных колоний в 80% случаев, то есть не менее чем в 4 из 5 колоний подтвержден рост сульфитредуцирующих клостридий, то считают, что все характерные колонии, выросшие на чашке Петри (см. п.4.5), принадлежат к этой группе. В остальных случаях количество сульфитредуцирующих клостридий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.
5.4. При определении НВЧ или при определении присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий в определенной навеске продукта посевы в вязкие среды считают положительными, если при последующем пересеве и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной колонии будут обнаружены сульфитредуцирующие клостридии.
5.7. Результаты определения количества сульфитредуцирующих клостридий записывают по ГОСТ 26670.
5.8. Результаты выявления присутствия (отсутствия) сульфитредуцирующих клостридий с указанием навески продукта записывают следующим образом: сульфитредуцирующие клостридии обнаружены (или не обнаружены).