ГОСТ ISO 15914-2016 Корма для животных. Ферментативный метод определения содержания общего крахмала.

    ГОСТ ISO 15914-2016

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

 Ферментативный метод определения содержания общего крахмала

 Animal feeding stuffs. Enzymatic determination of total starch content

МКС 65.120

Дата введения 2017-07-01

 Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт кормов имени В.Р.Вильямса (ФГБНУ "ВНИИ кормов им.В.Р.Вильямса") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 мая 2016 г. N 88-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 сентября 2016 г. N 1253-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15914-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15914:2004* "Корма для животных. Ферментативный метод определения содержания общего крахмала" ("Animal feeding stuffs - Enzymatic determination of total starch content", IDT).

Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты", Подкомитетом SC 10 "Корма для животных" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ          

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2020 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает ферментативный метод определения содержания общего крахмала в кормах для животных и в сырье для их производства.

Метод также применим для установления наличия примесей в крахмале.

В анализируемой пробе не должно содержаться компонентов, которые обладают абсорбцией при длине волны 340 нм.

Аналитический диапазон метода определения общего крахмала в анализируемой пробе от 40 до 1000 г/кг. Диапазоны содержания от 200 до 1000 г/кг и от 40 до 200 г/кг крахмала определяются по различным стандартным растворам глюкозы. В случае содержания крахмала в анализируемой пробе в диапазоне от 40 до 200 г/кг применяется другая процедура разбавления стандартного раствора глюкозы и проб.

      2 Нормативные ссылки           

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

ISO 6498:1998

, Animal feeding stuffs - Preparation of test samples (Корма для животных. Приготовление проб для испытания)

_______________

Заменен на ISO 6498:2012.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

3.1

крахмал

(starch): Натуральный растительный полимер, состоящий из длинных неразветвленных цепей 1,4-

-D-глюкозных единиц (амилоза) и/или длинных

-1,6-разветвленных цепей

-1,4-связанных глюкозных единиц (амилопектин).

3.2 содержание крахмала (starch content): Массовая доля крахмала и высокомолекулярных продуктов его распада, нерастворимых в 40%-ном этаноле, определенная в соответствии с методом, установленным в настоящем стандарте.

Примечание - Содержание крахмала выражается в граммах на килограмм.

      4 Сущность метода

Размолотую анализируемую пробу экстрагируют 40%-ным этанолом для удаления растворимых сахаров. После удаления сахаров остаток анализируемой пробы для экстракции и растворения в ней крахмала обрабатывают водным раствором диметилсульфоксида (ДМСО) (объемная доля 90%) при температуре 100°C, затем концентрированной соляной кислотой при температуре 60°C.

Растворенный и разжиженный крахмал количественно превращается в глюкозу с помощью фермента амилоглюкозидазы. Количество образовавшейся глюкозы определяют гексокиназным методом [1], [2].

      5 Реактивы

Используют реактивы установленной аналитической чистоты.

5.1 Вода чистотой не менее 3-й степени по ISO 3696.

5.2 Этанол (C

H

OH) объемной долей 40%

Этанол объемом 417 см

(объемная доля 96%) разбавляют водой до 1000 см

.

5.3 Соляная кислота,

c

(HCl)=12 моль/дм

.

5.4 Водный раствор гидроксида натрия,

c

(NaOH)=4 моль/дм

В химическом стакане растворяют 40 г гидроксида натрия в 50 см

воды. После охлаждения раствор переносят в мерную колбу вместимостью 250 см

и его объем доводят до метки водой.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Выделяется тепло. Необходимо проводить растворение в защитных очках.

5.5 Раствор уксусной кислоты,

c

(CH

COOH)=2 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 500 см

вносят 200 см

воды, затем 59 см

ледяной уксусной кислоты. Доводят объем раствора в колбе до метки водой.

5.6 Раствор уксуснокислого натрия

,

c

(CH

COONa)=2 моль/дм

В мерной колбе вместимостью 500 см

растворяют в воде 82,0 г уксуснокислого натрия и разбавляют раствор до метки водой.

5.7 Буфер уксуснокислого натрия

,

c

(CH

COONa/H)=2 моль/дм

, pH=4,8 ед. pH

Смешивают 41 см

раствора уксусной кислоты (5.5) 59 см

раствора уксуснокислого натрия (5.6). Проверяют значение pH на pH-метре и, при необходимости, устанавливают требующееся значение pH, пользуясь раствором уксусной кислоты или уксуснокислого натрия.

Ежедневно готовят свежий буферный раствор.

5.8 Диметилсульфоксид (ДМСО), объемной долей 90%

Смешивают ДМСО и воду в объемном соотношении 9:1.

5.9 Осветляющие растворы по Каррезу

5.9.1 Раствор железистосинеродистого калия (II),

c

[K

Fe(CN)

]=0,25 моль/дм

В мерной колбе вместимостью 1 дм

растворяют в воде 106 г трехводного железистосинеродистого калия (II) [K

Fe(CN)

·3H

O]. Доводят объем раствора до метки водой.

5.9.2 Раствор уксуснокислого цинка в 0,5 моль/дм

уксусной кислоты,

c

[

]=1 моль/дм

В мерной колбе вместимостью 1 дм

растворяют в воде 219,5 г двуводного уксуснокислого цинка [

] и 30 г ледяной уксусной кислоты. Доводят объем раствора до метки водой.

5.10 Раствор йода в йодистом калии

В мерной колбе вместимостью 1 дм

растворяют в воде 12,7 г йода (I

) и 24,0 г йодистого калия (KI). Доводят объем раствора водой до метки. Перед использованием полученный раствор разбавляют в 10 раз.

5.11 Стандартный раствор глюкозы

5.11.1 Стандартные растворы глюкозы, используемые при анализе проб, содержащих крахмал в пределах 200-1000 г/кг

Готовят три стандартных раствора глюкозы

c

[C

H

O

]=0,0194 моль/дм

. В каждой мерной колбе вместимостью 100 см

растворяют в воде (350±1) мг безводной глюкозы, взвешенной с точностью 1 мг. Доводят объем раствора до метки водой.

5.11.2 Стандартные растворы глюкозы, используемые при анализе проб, содержащих крахмал в пределах 40-200 г/кг

Готовят три стандартных раствора глюкозы

c

[C

H

O

]=0,0039 моль/дм

. В каждой мерной колбе вместимостью 500 см

растворяют в воде (350±1) мг безводной глюкозы. Доводят объем раствора до метки водой.

Ежедневно готовят свежие стандартные растворы глюкозы.

5.12 Раствор амилоглюкозидазы

(АМГ), 160 единиц/см

Амилоглюкозидазу (АМГ) массой 267 мг [EC 3.2.1.3 (Aspergillus niger, Roche Diagnostics, No. 1202367, 6 U/mg)]

растворяют в смеси 9 см

воды и 1 см

буфера уксуснокислого натрия (5.7). При хранении и использовании фермента необходимо тщательно соблюдать рекомендации производителя.

_______________

Roche Diagnostics No. 1202367 является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.

Если используется другой фермент, следует учитывать его активность, как указано в примечании. В этом случае необходимую массу фермента, достаточную для разложения крахмала, определяют в соответствии с его активностью.

Примечание - Различные поставщики фермента используют различные обозначения единиц активности фермента. В настоящем стандарте использовано следующее обозначение единицы активности фермента АМГ - 1 единица амилоглюкозидазы, способная выделять 1 мкмоль глюкозы из гликогена за 1 мин при 25°C и pH=4,75 ед. 10 см

раствора фермента достаточно для 75 определений.

5.13 Набор реактивов для определения концентрации D-глюкозы ферментативным гексокиназным УФ-методом (R-Biopharm, No. 716251)

. Согласно инструкции производителя неиспользованные наборы можно хранить в течение года при температуре 4°C. Реактивы, включенные в набор, и их приготовление при проведении анализов - по 5.13.1 и 5.13.2.

________________

R-Biopharm AG No. 716251 является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.

5.13.1 Раствор буфер/субстрат (склянка 1)

Содержимое склянки 1 растворяют в 45 см

воды. Реактив хранят при температуре 4°C в темном месте в течение не более четырех недель и используют при комнатной температуре.

5.13.2 Раствор фермента (склянка 2)

Раствор готов для использования.

5.13.3 Окрашивающий раствор

Смешивают 22,5 см

раствора буфер/субстрат (5.13.1) с 95 см

воды и 0,45 см

раствора фермента (5.13.2) и гомогенизируют. Полученное количество раствора достаточно для проведения приблизительно 40 измерений. Используют только свежеприготовленные окрашивающие растворы при комнатной температуре.

      6 Оборудование, посуда и вспомогательные материалы

6.1 Аналитические весы с точностью взвешивания 0,1 мг.

6.2 Центрифуга с ускорением (180±10)

g

и 3000

g

, подходящая для пробирок с завинчивающимися крышками вместимостью 12 см

(значение g дается на дне пробирки).

6.3 Водяная баня, поддерживающая температуру (100±2)°C.

6.4 Водяная баня, поддерживающая температуру (60±1)°C.

6.5 pH-метр градуированный с комбинированным стеклянным электродом точностью измерения 0,01 ед. pH.

6.6 Микропипетки градуированные с регулируемым объемом раствора 40-200 мкдм

, 200-1000 мкдм

, 1-5 см

и дозатор с регулируемым объемом раствора 1-5 см

.

6.7 Спектрометр с проточной кюветой, позволяющий проводить измерения при длине волны 340 нм.

6.8 Ротационный шейкер с частотой вращения 50 об/мин для центрифужных пробирок с завинчивающимися крышками (6.11).

6.9 Дозатор/разбавитель Hook&Tucker Compudil D

.

________________

Hook&Tucker Compudil D является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.

6.10 Сушильный шкаф с принудительной вентиляцией воздуха.

6.11 Стеклянные центрифужные пробирки 100

16 мм, с завинчивающимися крышками, подходящими к резиновым пробкам, покрытым фторопластом.

6.12 Мерные колбы вместимостью 100 см

широкогорлые, снабженные притертым стеклянным соединением 14/23, позволяющие измерять значение pH раствора в колбе комбинированным стеклянным электродом.

6.13 Мешалка для пробирок (Vortex mixer)

для альтернативного метода разложения и растворения крахмала по 8.4.2.

________________

Vortex mixer является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.

6.14 Шейкерная водяная баня, поддерживающая температуру (100±2)°C, с длиной хода 2 см, частотой колебаний 150-200 раз в минуту. Водяная баня должна быть снабжена штативом, чтобы пробирки размещались в воде в горизонтальном положении.

6.15 Стеклянные центрифужные пробирки вместимостью не менее 20 см

с завинчивающимися насадками, подходящими к резиновым пробкам, покрытым фторопластом.

6.16 Стеклянные шарики диаметром 3 мм.

      7 Приготовление анализируемой пробы

Анализируемую пробу готовят в соответствии с ISO 6498.

      8 Проведение анализа

8.1 Анализируемая проба

Анализы выполняют в двукратной повторности.

Взвешивают около 200 мг анализируемой пробы (раздел 7) в центрифужной пробирке (6.11). Во второй центрифужной пробирке взвешивают вторые 200 мг как дубликат подготовленной пробы (раздел 7).

Анализируют пробы в каждой пробирке.

8.2 Экстракция сахаров

В каждую пробирку добавляют 10 см

этанола (5.2). Экстрагируют растворимые сахара путем непрерывного встряхивания суспензии в течение 10 мин на ротационном шейкере (6.8). Затем центрифугируют в течение 10 мин на центрифуге (6.2) с радиальным ускорением (180±10)

g

и удаляют надосадочную жидкость. Экстракцию проводят дважды.

8.3 Холостая проба

Начиная с этой стадии в каждой серии анализов выполняют холостое определение, которое включает все стадии анализа, кроме взятия навески анализируемой пробы в пробирку.

8.4 Разложение крахмала

8.4.1 Общее

Разложение и растворение крахмала можно выполнить двумя способами (8.4.2 - способ 1 или 8.4.3 - способ 2). При проведении анализа по 8.4.3 анализируемую пробу помещают в стеклянную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой вместимостью не менее 20 см

(6.15).

8.4.2 Проведение анализа 1

В пробирку с анализируемой пробой при непрерывном перемешивании на мешалке для пробирок (6.13) дозатором добавляют 10 см

ДМСО (5.8) и продолжают перемешивать до получения свободной от комочков суспензии. Пробирку закрывают завинчивающейся крышкой.

Примечание - Энергичная гомогенизация при добавлении ДМСО необходима для предотвращения образования микрогеля и/или комочков. Образование микрогеля и комочков приводит к получению ошибочного результата анализа, главным образом, заниженного, в связи с неполным гидролизом крахмала ферментом АМГ.

После гомогенизации пробирку немедленно вставляют в ротационный шейкер (6.8) и помещают на 30 мин в сушильный шкаф при температуре 100°C для расщепления крахмала. Пробирку охлаждают, после чего пипеткой (6.6) добавляют 1,7 см

концентрированной соляной кислоты (5.3), тщательно перемешивают. Пробирку закрывают и помещают в ротационный шейкер. Для частичного гидролиза пробы пробирку ставят в сушильный шкаф (6.10) при непрерывном встряхивании в течение 30 мин при температуре 60°C.

Далее анализ выполняют по 8.4.4.

8.4.3 Проведение анализа 2

В остаток в стеклянной центрифужной пробирке (6.15) помещают 15 стеклянных шариков (6.16). В пробирку с помощью раздаточного устройства/разбавителя при непрерывном перемешивании на мешалке (6.13) добавляют 10,0 см

водного ДМСО до получения суспензии без комочков. Пробирку закрывают завинчивающейся крышкой.

Примечание - Энергичная гомогенизация при добавлении ДМСО необходима для предотвращения образования микрогеля и/или комочков. Микрогель и комочки приводят к ошибочному результату определения содержания крахмала.

Пробирку помещают в штативе в горизонтальном положении в кипящую водяную баню (6.14) и встряхивают в течение 30 мин. После охлаждения в нее пипеткой (6.6) добавляют 1,7 см

концентрированной соляной кислоты (5.3) и тщательно перемешивают. Пробирку закрывают и помещают в водяную баню при температуре (60±1)°C, встряхивают в течение 30 мин. При этом происходит частичный гидролиз крахмала. Далее анализ выполняют по 8.4.4.

8.4.4 Регулирование значения pH

Пробирку охлаждают и ее содержимое переносят в мерную колбу вместимостью 100 см

(6.12). Добавляют 5 см

водного раствора гидроксида натрия (5.4) и 2,5 см

буфера уксуснокислого натрия (5.7), раствор гомогенизируют. Измеряют значение pH раствора на pH-метре (6.5). При необходимости значение pH устанавливают до (4,8±0,1) ед. pH разбавленной соляной кислотой или гидроокисью натрия. Смывают раствор и приставшие с ним частички пробы с электродов pH-метра водой в ту же мерную колбу и доводят объем раствора до метки водой.

8.5 Ферментативное разложение крахмала в глюкозу

Сразу после гомогенизации пипеткой (6.6) переносят 5,00 см

(этот объем в формуле расчета содержания крахмала по 9.2 соответствует объему, обозначенному как

) гомогенизированного раствора расщепленного и частично разложенного крахмала (8.4.4) в чистую и сухую стеклянную пробирку (6.11). Пипеткой (6.6) добавляют 0,125 см

раствора фермента АМГ (5.12). Закрывают пробирку завинчивающейся крышкой и тщательно гомогенизируют. Раствор инкубируют в водяной бане при температуре 60°C в течение времени не менее 16 ч. Для инактивации АМГ пробирку помещают в кипящую водяную баню на 15 мин. Пробирку охлаждают до комнатной температуры и добавляют пипеткой 0,125 см

раствора железистосинеродистого калия (5.9.1) и встряхивают в течение 1 мин. Добавляют пипеткой 0,125 см

раствора уксуснокислого цинка (5.9.2) и снова встряхивают в течение 1 мин. В пробирке содержится 5,375 см

раствора (который равен

при расчетах в 9.2). Затем центрифугируют в течение 10 мин с радиальным ускорением не менее 3000

g

. Надосадочную жидкость переносят в чистую и сухую пробирку.

Для проверки полноты гидролиза крахмала в центрифужную пробирку добавляют несколько см

воды, кипятят в течение 10 мин, охлаждают и вносят 0,2 см

раствора йода. Голубая окраска показывает наличие крахмала, что означает его неполное разложение. В случае наличия крахмала анализ данной пробы повторяют (см. 8.1).

8.6 Ферментативное определение содержания глюкозы

8.6.1 Пробы с содержанием крахмала 200-1000 г/кг

В отдельные чистые сухие пробирки помещают по 0,5 см

каждого из растворов гидролизованного крахмала (8.5), холостой пробы (8.3), три стандартных раствора глюкозы (5.11.1) и воду (5.1). В пробирки с помощью дозатора/разбавителя (6.9) приливают по 9,5 см

воды (5.1) и гомогенизируют.

8.6.2 Пробы с содержанием крахмала 40-200 г/кг

Отбирают пипеткой по 0,5 см

растворов гидролизованного крахмала (8.5), холостой пробы (8.3), трех стандартных растворов глюкозы (5.11.2) и воды (5.1) в отдельную чистую сухую пробирку. Отобранные растворы разбавляют при помощи дозатора/разбавителя (6.9) с 1,5 см

воды (5.1) и гомогенизируют.

Если ожидается низкое содержание крахмала (менее 200 г/кг), для повышения чувствительности определения используют другое соотношение разбавления для ферментативного гидролиза крахмала в глюкозу. Такое же разбавление необходимо соблюдать и для холостой пробы.

Готовят стандартные растворы глюкозы сравнительно более низкой концентрации и разбавляют стандартные растворы так же, как и растворы анализируемой и холостой проб.

Колориметрические измерения холостой пробы (8.3), воды (5.1) и трех стандартных растворов глюкозы проводят дважды. Анализируемые пробы, содержащие гидролизованный крахмал, измеряют один раз.

Пипеткой (6.6) переносят по 0,4 см

разбавленных растворов анализируемой пробы, холостой пробы, разбавленных стандартных растворов глюкозы и воды в чистые сухие центрифужные пробирки. В пробирки пипеткой (6.6) добавляют 2,62 см

окрашивающего раствора (5.13.3) и тщательно перемешивают. Измеряют абсорбцию (см. 6.7) раствора при длине волны 340 нм относительно воды.

      9 Обработка и выражение результатов

9.1 Градуировочный график

Вычисляют значение абсорбции для каждого их трех стандартных растворов глюкозы (

E

), для чего из значения абсорбции стандартного раствора глюкозы, полученного на приборе (

E

), вычитают значение абсорбции окрашенной воды (

E

) по формуле

.                                                        (1)

Значение абсорбции неокрашенной воды (по определению) равно нулю.

Используя линейный регрессионный анализ, строят градуировочный график для значений абсорбции против содержания глюкозы в неразбавленных стандартных растворах глюкозы (в г/дм

).

Вычисляют значение абсорбции раствора анализируемой пробы (

E

), для чего из значения абсорбции раствора пробы, полученного на приборе (

E

), вычитают значение абсорбции раствора холостой пробы (

E

) по формуле

.                                                        (2)

Используя градуировочный график (9.1), вычисляют содержание глюкозы (

) в неразбавленных растворах пробы (8.5), г/дм

.

Смотреть приложение A.

9.2 Вычисление содержания крахмала

Содержание крахмала в анализируемой пробе

, г/кг, вычисляют по формуле

,                                                     (3)

где

- содержание глюкозы в растворе пробы, вычисленное в соответствии с 9.1, г/дм

;

V

- объем раствора крахмала в 8.5, взятого для гидролиза (5,00 см

);

V

- общий объем раствора после ферментативного гидролиза крахмала в глюкозу в 8.5, равный 5,375 см

;

m

- масса анализируемой пробы, г.

Для вычисления содержания крахмала по вышеприведенной формуле необходимо, чтобы были использованы соответствующие разбавления растворов пробы в 8.6.1 и стандартных растворов глюкозы в 5.11.     

      10 Прецизионность

10.1 Межлабораторные испытания

Подробности межлабораторных испытаний по определению прецизионности метода приводятся в приложении B. Значения, полученные в межлабораторных испытаниях, не применимы для других диапазонов концентрации и матриц, отличающихся от приведенных.

10.2 Повторяемость

Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученными с использованием одного и того же метода, на идентичном анализируемом материале в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же оборудовании в течение короткого интервала времени, не должна превышать более чем в 5% случаев предел повторяемости:

- 14 г/кг для гороха, комбикорма молочного скота и тапиоки;

- 17 г/кг для корма поросят;

- 48 г/кг для корма кур-несушек (см. приложение B).

10.3 Воспроизводимость

Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученными с использованием одного и того же метода на идентичном анализируемом материале в разных лабораториях различными операторами на различном оборудовании в течение короткого интервала времени, не должна превышать более чем в 5% случаев предел воспроизводимости:

- 25 г/кг для корма поросят;

- 34 г/кг для тапиоки;

- 36 г/кг для комбикорма молочного скота;

- 48 г/кг для корма кур-несушек;

- 50 г/кг для гороха (см. приложение B).

      11 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен включать:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- использованный метод отбора проб, если он известен;

- использованный метод анализа со ссылкой на настоящий стандарт;

- все подробности анализа, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями любых случайностей, которые могли оказать влияние на результат(ы) анализа;

- полученный результат анализа или два результата анализа, если контролировалась повторяемость.

Приложение A

(справочное)

Отдельные примечания к ходу проведения анализа

A.1 Градуировочная кривая, построенная по результатам трехкратного измерения холостого и стандартного растворов, более достоверна, чем кривая, построенная на результатах однократного измерения холостого и пяти градуировочных растворов различных концентраций [5].

A.2 Для получения точных результатов анализируемая проба не должна содержать компонентов, которые обладают абсорбцией или абсорбцией в условиях проведения анализа при длине волны 340 нм. Поэтому при анализе неизвестных проб следует контролировать отсутствие в них таких компонентов следующим способом.

По 0,4 см

подготовленных по 8.6.1 растворов анализируемой пробы и холостой пробы пипеткой переносят в стеклянные пробирки. В пробирки прибавляют 2,6 см

окрашивающего раствора, приготовленного без добавления раствора фермента.

Через 30-60 мин измеряют абсорбцию растворов при длине волны 340 нм. Разница в абсорбции между растворами анализируемой и холостой проб не должна превышать 0,002 единицы абсорбции. Для анализа проб, у которых эта разница выше, метод не применим. Пробы, исследованные при разработке настоящего стандарта, - пробы кормов для животных, зерен злаков (кукурузы, пшеницы), лебеды и лиофильно-высушенной картофельной мезги - удовлетворяли этому условию.

Приложение B

(справочное)

Результаты межлабораторных испытаний

Межлабораторные испытания проводились в 1998 г. в соответствии с [4]. Участвовало двенадцать лабораторий. Изучались пробы обезвоженной тапиоки, корма для кур-несушек, зерна гороха, корма для поросят и комбикорма для молочного скота. Показатели прецизионности приводятся в таблице B.1.

Таблица B.1 - Статические* результаты межлабораторного исследования

	Проба
	1	2	3	4	5
Количество лабораторий после удаления выбросов	9	10	9	8	10
Количество принятых результатов	18	20	18	16	20
Среднее содержание крахмала, г/кг	456	447	233	704	394
Стандартное отклонение повторяемости s , г/кг	5	6	5	5	17
Коэффициент вариации повторяемости, %	1,1	1,3	2,1	0,7	4,3
Предел повторяемости r , 2,8· s , г/кг	14	17	14	14	48
Стандартное отклонение воспроизводимости s , г/кг	18	9	13	12	17
Коэффициент вариации воспроизводимости, %	3,9	2,0	5,6	1,7	4,3
Предел воспроизводимости R , 2,8 ·s , г/кг	50	25	36	34	48
Пробы:     1 - зерно гороха;     2 - корм для поросят;     3 - корм для молочного скота;     4 - тапиока обезвоженная;     5 - корм для кур-несушек.

Приложение ДА

(справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта	Степень соответствия	Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта
ISO 3696:1987	IDT	ГОСТ ISO 3696-2013 "Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля"
ISO 6498:1998	-	*,
* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта.     Примечание - В настоящем стандарте использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:     - IDT - идентичный стандарт.

_______________     

Действует ГОСТ ISO 6498-2014 "Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний", идентичный ISO 6498:2012.          

 Библиография

[1]	Brunt K., Sanders P. and Rozema T. The enzymatic determination of starch in food, feed and raw materials of the starch industry. Starch/ , 50, 1998, pp.413-419
[2]	Method of enzymatic bioanalysis and food analysis. Boehringer Mannheim, 1995, pp.46-49 and 126-129
[3]	ISO 5725-1:1994	Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions [Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Общие принципы определений]
[4]	ISO 5725-2:1994	Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method [Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения]
[5]	Miller J.C. and Miller J.N. Statistics for analytical chemistry, 2nd edition, 1992, pp.112-115, Ellis Horwood, New York, London, Toronto, Sydney, Tokyo, Singapore
[6]	Brunt K., Sanders P. and Rozema T. The enzymatic determination of starch in food, feed and raw materials of the starch industry. Starch/ , 50, 2000, pp.73-75