ГОСТ ISO 11053-2015 Растительные жиры и масла. Определение эквивалентов какао-масла в молочном шоколаде.
ГОСТ ISO 11053-2015
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Растительные жиры и масла
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭКВИВАЛЕНТОВ КАКАО-МАСЛА В МОЛОЧНОМ ШОКОЛАДЕ
Vegetable fats and oils. Determination of cocoa butter equivalents in milk chocolate
МКС 67.190; 67.200.10
Дата введения 2017-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием "Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по | Код страны по | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
Украина | UA | Минэкономразвития Украины |
4 межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11053-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 11053:2009* "Растительные жиры и масла. Определение эквивалентов какао-масла в молочном шоколаде" (Vegetable fats and oils. Determination of cocoa butter equivalents in milk chocolate", IDT).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, находятся в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии.
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и количественного определения эквивалентов какао-масла (ЭКМ) и молочного жира (МЖ) в молочном шоколаде посредством анализа профиля триацилглицеридов (ТАГ) с использованием капиллярной газожидкостной хроматографии высокого разрешения и последующей обработки данных на основе анализа регрессии простых и частных наименьших квадратов. Предел обнаружения примесей ЭКМ составляет 0,5 г ЭКМ/100 г молочного шоколада и определены количественно при уровне 5% массовой доли добавки ЭКМ к молочному шоколаду с прогнозируемой погрешностью 0,7 г ЭКМ/100 г молочного шоколада.
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующим определением:
2.1 содержание молочного жира в молочном шоколаде (milk fat content of milk chocolate): Массовая доля молочного жира в молочном шоколаде, определенная методом, установленным в настоящем стандарте.
Примечание - Массовая доля выражена в граммах на 100 г молочного шоколада.
2.2 эквиваленты какао-масла (cocoa butter equivalents): Растительные жиры и масла, отличные от какао-масла, обнаруживаемые в молочном шоколаде методом, описанным в настоящем стандарте.
Примечание - Результат выражен качественно, т.е. ЭКМ присутствуют/ЭКМ не присутствуют (ДА/НЕТ).
2.3 содержание эквивалентов какао-масла в молочном шоколаде (cocoa butter equivalents content of milk chocolate): Массовая доля веществ, определенная методом, установленным в настоящем стандарте.
Примечание - Массовая доля выражена в граммах на 100 г молочного шоколада.
3 Сущность метода
Анализируемые образцы, т.е. жиры, полученные из молочного шоколада методом быстрого экстрагирования, разделяют посредством газожидкостной хроматографии высокого разрешения на фракции триацилглицеридов в соответствии с их молекулярной массой и степенью ненасыщенности. Отдельные фракции ТАГ, т.е. 1-пальмитоил-2-стеароил-3-бутироилглицерид (PSB), 1,3-дипальмитоил-2-олеоилглицерид (POP), 1-пальмитоил-2-олеоил-3-стеароилглицерид (POS), 1-пальмитоил-2,3-диолеилглицерид (РОО), 1,3-дистеароил-2-олеоилглицерид (SOS) и 1-стеароил-2,3-диолеоилглицерид (SOO) используют чтобы:
a) вычислить содержание молочного жира в жире, выделенном из шоколада (г/100 г жира, выделенного из шоколада);
b) определить присутствие/отсутствие ЭКМ в жире, выделенном из шоколада, используя модель простой линейной регрессии на основе трех ТАГ: POP, POS и SOS с поправкой на вклад ТАГ, обусловленный вкладом молочного жира, и установить, является ли образец чистым какао-маслом;
c) определить количество примеси ЭКМ в жире, выделенном из шоколада (г/100 г шоколада), используя модель регрессии частных наименьших квадратов (ЧНК) с шестью входными переменными, т.е. с пятью ТАГ: POP, POS, POO, SOS, SOO, нормированными к 100%, и определенным содержанием молочного жира в жире, выделенном из шоколада.
Чтобы обеспечить правильное этикетирование молочного шоколада, результаты, полученные для жира, выделенного из шоколада, преобразуют в граммы молочного жира на 100 г шоколада и граммы ЭКМ на 100 г шоколада, для чего требуется точное определение общего содержания жира в шоколаде методом Сокслета (на основе [5]). Если метод обнаружения подтверждает отсутствие ЭКМ в жире, выделенном из шоколада, то нет необходимости в количественном определении общего содержания жира.
4 Реактивы, растворы и стандарты
Используются только реактивы признанного аналитического класса.
Предупреждение - Необходимо уделять внимание пунктам, которые описывают процедуры обращения с опасными веществами. Должны соблюдаться технические и организационные меры безопасности, а также меры личной безопасности.
________________
4.2 Чистый молочный жир для проверки пригодности системы.
________________
4.3.1 Общие положения калибровки
Таблица 1 - Массы IRMM-801 и объемы исходного раствора PSB для приготовления серии калибровочных растворов PSB
|
|
|
|
|
Калибровочный раствор | Масса IRMM-801 (4.1), помещенная в мерную колбу вместимостью 25 см , мг | Объем, взятый из исходного раствора PSB и добавленный в мерную колбу вместимостью 25 см , см | Концентрация PSB в калибровочном растворе  , мг/см | Окончательная концентрация IRMM-PSB в растворе  , мг/см |
1 | 250 | 4 | 0,128 | 10 |
2 | 250 | 3 | 0,096 | 10 |
3 | 250 | 2 | 0,064 | 10 |
4 | 250 | 1 | 0,032 | 10 |
5 | 250 | 0,5 | 0,016 | 10 |
4.3.2 Использование метода холодного ввода пробы в колонку (OCI)
4.3.3 Использование метода ввода пробы в колонку с делением потока
Примечание - Окончательные концентрации PSB вычисляют, используя фактическую массу в исходном стандартном растворе.
________________
4.5 Растворитель жира, не содержащий хлор (например, диэтиловый эфир, петролейный эфир, н-гексан, н-гептан, изооктан).
5 Аппаратура и оборудование
5.1 Аналитические весы с ценой деления 0,1 мг.
5.2 Сушильный шкаф. Может использоваться сухой нагревательный блок.
________________
5.4 Блендер для пищевой продукции, кухонный блендер с расположением двигателя выше принимающего контейнера для предотвращения плавления образцов.
5.5 Ротационный испаритель
Могут использоваться альтернативные методы упаривания.
5.6 Испарительный блок, с подачей азота.
5.7 Эксикатор, герметический сосуд, содержащий осушающие вещества, используемый для хранения гигроскопичных материалов.
5.12 Газовый хроматограф (ГХ), оборудованный системой холодного ввода пробы в колонку или системой ввода пробы в колонку с делением потока и пламенно-ионизационным детектором (ПИД).
Примечание 1 - Могут использоваться альтернативные системы ввода (например, инжектор с программируемой температурой (ТПИ) или инжектор с подвижной иглой) при условии, что получаемые результаты идентичны указанным в 10.2.
Разделение и измерение количества оказываются удовлетворительными, если соблюдаются следующие условия:
- кварцевая хроматографическая колонка: СВ-ТАР длина 25 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина термостабильной среднеполярной фенилметилполисилоксановой пленки 0,10 мкм;
- температурная программа для холодного ввода в колонку: начальная температура - 100°С, время выдержки не менее 2 мин; скорость нагрева до 270°С - 30°С/мин; время выдержки 1 мин; скорость нагрева до 340°С - 2,5°С/мин; время выдержки 7 мин;
- температурная программа для ввода с делением потока: начальная температура - 200°С, время выдержки не менее 1 мин; скорость нагрева до 270°С - 14°С/мин; время выдержки 1 мин; скорость нагрева до 340°С - 2,5°С/мин; время выдержки 10 мин;
- детектор (ПИД): температура 360°С;
Примечание 2 - Колонки и альтернативные условия эксперимента, используемые в международном совместном исследовании (см. [7]), приведены в таблице А 1. Рабочие условия можно изменять для получения оптимального разделения.
5.13 Хроматографическая система сбора и обработки данных
6 Отбор проб
________________
7 Приготовление образцов
7.1 Подготовка стандартного образца какао-масла для калибровки и проверки пригодности системы
Перед вскрытием ампулы и использованием IRMM-801 (4.1) ампулу нагревают в сушильном шкафу (5.2) до плавления содержимого. После получения прозрачного раствора перемешивают содержимое путем многократного переворачивания ампулы в течение не менее 20 с. Затем ампулу вскрывают и переносят содержимое в чистую виалу, которую плотно закрывают и хранят в прохладном месте для последующего использования.
7.2 Подготовка чистого молочного жира для проверки пригодности системы
Если нет чистого молочного жира, его можно получить из пробы масла, расплавляя и перенося слой жира через складчатую фильтровальную бумагу (5.3) при 50°С в сушильном шкафу (5.2).
7.3 Приготовление образца шоколада
7.3.1 Общие положения
Охлаждают около 200 г шоколада до затвердевания и натирают на мелкие гранулы при помощи блендера для пищевой продукции (5.4). Тщательно перемешивают и хранят в плотно закрытой емкости в холодильнике.
7.3.2 Быстрая экстракция жира
Жир, выделенный из шоколада, полученный быстрой экстракцией, используется для окончательного анализа ТАГ методом газожидкостной хроматографии высокого разрешения. Для обнаружения ЭКМ точное содержание общего жира в шоколаде не требуется. Если ЭКМ не обнаружены, то их количественное определение относительно установленного предела 5% нецелесообразно.
Если ЭКМ обнаружены, то определение их количества должно быть выполнено с использованием того же профиля ТАГ, который использовался для обнаружения ЭКМ. В этом случае определяют точное содержание общего жира в шоколаде по процедуре 7.3.3. Можно использовать альтернативные процедуры экстракции, если они дают такие же результаты.
7.3.3 Определение содержания общего жира
Проводят экстракцию и определяют общее содержание жира в образце молочного шоколада (приготовленного по 7.3.2) методом Сокслета (на основе официального метода [5]).
Сушат колбу при 102°С до постоянной массы (1,5 ч). Охлаждают колбу в эксикаторе (5.7) до комнатной температуры, затем взвешивают ее. Постоянная масса достигается, когда последующие периоды сушки по 1 ч последовательно показывают потерю влаги менее 0,05%. Расхождения между параллельными определениями жира должны быть в пределах 0,1%.
Можно использовать альтернативные методы экстракции (например, ускоренная экстракция растворителем, использование сверхкритической экстракции углекислым газом или экстракции с использованием СВЧ-диапазона), при условии что они дают такие же результаты. Жир, выделенный из шоколада, полученный экстракцией по Сокслету, не следует использовать для анализа триацилглицеридов посредством газожидкостной хроматографии высокого разрешения, поскольку в некоторых случаях могут наблюдаться изменения в полученном профиле триацилглицеридов.
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
8 Проведение определения
8.1 Построение калибровочной кривой для определения содержания PSB
Для метода холодного ввода в колонку (OCI):
Для метода ввода в колонку с делением потока:
Можно использовать альтернативные количества образцов и инжекторы, при условии, что применяемая система обнаружения дает линейную характеристику и соответствует критериям пригодности системы (10.2).
8.2 Разделение отдельных триацилглицеридов стандартного образца какао-масла методом газовой хроматографии высокого разрешения.
Стандартный образец какао-масла IRMM-801 (4.1) следует нагревать в сушильном шкафу (5.2) до полного плавления. Пипетки или аналогичное оборудование, используемые для переноса образца в процессе взвешивания, нагревают примерно до температуры 55°С в сушильном шкафу (5.2), чтобы избежать частичного фракционирования жиров.
Могут использоваться альтернативные растворители жира, навески образцов и инжекторы, при условии, что применяемая система обнаружения дает линейную характеристику и соответствует критериям пригодности системы (10.2).
8.3 Разделение отдельных триацилглицеридов чистого молочного жира методом газовой хроматографии высокого разрешения
Могут использоваться альтернативные растворители жира, навески образцов и инжекторы, при условии, что применяемая система обнаружения дает линейную характеристику и соответствует критериям пригодности системы (10.2).
8.4 Разделение отдельных триацилглицеридов жира, выделенного из шоколада, методом газовой хроматографии высокого разрешения
Анализируемый образец [жир, выделенный из молочного шоколада методом быстрой экстракции жира (7.3.2)] нагревают в сушильном шкафу (5.2) до полного расплавления. Если жидкий образец содержит осадок, образец фильтруют в шкафу, чтобы получить прозрачный фильтрат. Пипетки (или аналогичное оборудование), используемые для переноса образца во время операции взвешивания, следует нагреть в сушильном шкафу до температуры примерно 55°С для того, чтобы избежать расщепления жира при переносе образцов.
Можно использовать альтернативные растворители жира, навески образцов и инжекторы, при условии, что применяемая система обнаружения дает линейную характеристику и соответствует критериям пригодности системы (10.2).
8.5 Идентификация
ТАГ выходят в порядке увеличения атомов углерода и увеличения ненасыщенности (числа двойных связей) для одного и того же числа атомов углерода. Порядок элюирования триацилглицеридов IRMM-801 (8.2) приведен на рисунке В.1 (приложение В). Порядок элюирования триацилглицеридов молочного жира средней чистоты (8.3) приведен на рисунке В.2.
9 Обработка результатов
9.1 Количественное определение PSB и молочного жира в жире, выделенном из шоколада, и шоколаде
9.1.1. Определение коэффициента чувствительности для PSB
9.1.2 Количественное определение PSB в жире, выделенном из шоколада
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.1.3 Количественное определение молочного жира в жире, выделенном из шоколада
Примечание - Калибровочная функция была установлена на основе использования данных из широко исследованных баз данных, содержащих информацию по профилю триацилглицеридов для более 900 смесей, приготовленных весовым методом: (какао-масло - молочный жир), (какао-масло - эквиваленты какао-масла - молочный жир) с известным содержанием молочного жира, путем моделирования состава действительных жиров (см. ссылку [8]).
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.1.4 Количественное определение молочного жира в шоколаде
9.2 Обнаружение ЭКМ в жире, выделенном из шоколада
9.2.1 Определение коэффициента чувствительности для POP, POS, SOS
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.2.2 Вычисление массовых долей POP, POS и SOS в жире, выделенном из шоколада. Вычисляют по формуле:
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.2.3 Поправка для вклада молочного жира
Вычитают полученные массовые доли трехтриацилглицеридов, присутствующих также в молочном жире [уравнение (9)] из массовых долей трех триацилглицеридов, полученных для анализируемого образца [уравнение (8)].
Нормализуют полученные процентные массовые доли трехтриацилглицеридов [формула (10)] до 100% [формула (11)]:
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.2.4 Решение, является ли жир, выделенный из шоколада, чистым какао-маслом
Примечание - Преимущество данного детально разработанного метода состоит в том, что при использовании IRMM-801 (4.1) для калибровки отдельные испытательные лаборатории могут использовать для верификации чистоты какао-масла математическое выражение, не сталкиваясь с проблемой создания "КМ-линии" как предпосылки. Калибровка посредством IRMM-801 (4.1) автоматически связывает результаты, полученные в лаборатории, с базой данных ТАГ для какао-масла и разработанным правилом для принятия решения [по формуле (13)].
9.3 Количественное определение ЭКМ в жире, выделенном из шоколада, и шоколаде
9.3.1 Определение коэффициентов чувствительности для POP, POS, POO, SOS и SOO
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.3.2 Вычисление массовых долей POP, POS, POO, SOS и SOO в жире, выделенном из шоколада
Вычисления проводят с точностью до второго знака после запятой.
9.3.3 Количественное определение ЭКМ в жире, выделенном из шоколада
Вычисления проводят с точностью до первого знака после запятой.
Примечание - Модель количественного определения была создана на основе использования данных из широко исследованных баз данных, содержащих информацию по профилю ТАГ для более 700 смесей, приготовленных весовым методом КМ - ЭКМ - МЖ, изменяющихся по типу и количеству КМ, ЭКМ и МЖ (см. ссылку [8]).
9.3.4 Количественное определение ЭКМ в шоколаде
Массовую долю эквивалентов какао-масла в шоколаде вычисляют по формуле (19):
Вычисления проводят с точностью до первого знака после запятой.
10 Требования к проведению испытаний
10.1 Общие положения
Проведение хроматографического анализа зависит среди других факторов, от оборудования, типа, срока службы и поставщика колонки, средств инжектирования раствора, размера образца и от детектора. Можно использовать колонки различной длины и различных марок, и инжекционные объемы можно варьировать, если система соответствует требованиям 10.2.
10.2 Пригодность хроматографической системы
10.2.1 Разрешение
- Хроматографическая система должна обеспечивать разделение критических пар POS/POO и SOS/SOO с хроматографическим разрешением не менее 1,0. Это требование может быть проверено использованием IRMM-801 (8.2), как показано на рисунке В.1.
- Хроматографическая система должна обеспечивать отделение PSB от соседних пиков в пределах CN38 группы. Это требование может быть проверено использованием образца чистого молочного жира (8.3), как показано на рисунках В.2 и В.3.
В противном случае хроматографические условия (например, размер образца, температура колонки, поток газа-носителя и др.) оптимизируют для наибольшего разрешения.
10.2.2 Определение коэффициентов чувствительности детектора
- Для проверки допущения, что факторы отклика пламенно-ионизационного детектора для ТАГ не отличаются от единицы более чем на 20%, следует провести анализ IRMM-801 (8.2), применяя стандартные хроматографические условия. Опыт показал, что для правильно функционирующей хроматографической системы факторы отклика для пяти триацилглицеридов (POP, POS, POO, SOS, SOO) находятся в диапазоне от 0,80 до 1,20. Для проверки стабильности системы анализ следует повторить несколько раз (не менее трех параллельных анализов). Значения факторов отклика детектора, полученные на отдельных калибровочных растворах, не должны отличаться от среднего значения более чем на 5%.
В противном случае хроматографические условия оптимизируют, например, размер образца, температура колонки, поток газа-носителя и др.
11 Прецизионность
11.1 Межлабораторные испытания
Детали совместного испытания данного метода приведены в таблице А.1. Значения, полученные в данном межлабораторном испытании, не могут применяться к диапазонам концентраций и матрицам, кроме тех, которые установлены здесь.
11.2 Повторяемость
Абсолютная разность между результатами двух независимых отдельных испытаний, полученными с использованием одного и того же метода на идентичном материале в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором, использующим то же самое оборудование, в короткий интервал времени, не должна превышать значение для молочного шоколада 0,3 г/ 100 г более чем в 5% случаев, (при доверительной вероятности P=0,95).
Значения для предела повторяемости, r, полученные при валидации, приведены в таблице А.3.
11.3 Воспроизводимость
Абсолютная разность между результатами двух отдельных испытаний, полученных с использованием одного и того же метода на идентичном материале в различных лабораториях различными операторами, использующими различное оборудование, не должна превышать значение для молочного шоколада 0,6 г/100 г более чем в 5% случаев, (при доверительной вероятности P=0,95).
Значения для предела воспроизводимости R, полученные при валидации, приведены в таблице А.3.
12 Протокол испытания
Протокол испытания должен содержать как минимум следующую информацию:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
b) используемый метод отбора проб, если известно;
c) используемый метод испытания со ссылкой на этот стандарт;
d) все рабочие детали, не установленные в этом стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с деталями всех моментов, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;
e) полученные результаты испытания и, если была определена повторяемость, последний цитируемый результат, который был получен.
Приложение А
(справочное)
Результаты межлабораторных испытаний
Метод был валидирован в 2006 в Европейском межлабораторном испытании с 12 участниками (см. [7]). Детали метода, применяемые отдельными лабораториями, приведены в таблице А.1. Шесть специально изготовленных образцов шоколада и семь образцов шоколадного жира, различающихся по составу и количеству эквивалентов какао-масла, были проанализированы в данном исследовании (таблица А.2). Данные прецизионности приведены в таблице А.3.
Таблица А.1 - Условия хроматографического разделения, применяемые для анализа ТАГ в жирах, выделенных из шоколада
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Код лаборатории | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
Газ-носитель | ||||||||||||
тип | Не | Не | Не | Н | Н | Н | Н | Не | Н | Н | Н | Н |
постоянное давление, кПа | 100 | 180 | - | - | - | - | 150 | 135 | 130 | 140 | - | - |
постоянный поток, см /мин | - | - | 2,2 | 2 | 2 | 1,5 | - | - | - | - | 3,5 | 2 |
Характеристики колонки | ||||||||||||
стационарная фаза | Ulti- metal | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР | RT х65 TG | СВ-ТАР | СВ-ТАР | СВ-ТАР |
длина, м | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 | 30 | 25 | 25 | 25 |
внутренний диаметр, мм | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
толщина пленки, мкм | 0,05 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
Температурный режим | ||||||||||||
термостат колонок |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
начальная температура, °С | 200 | 200 | 100 | 200 | 200 | 200 | 100 | 200 | 200 | 200 | 100 | 200 |
время удерживания, мин | 2 | 1 | 0,5 | 1 | 0 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 | 2 | 1 |
скорость нагрева 1, °С/мин | 20 | 14 | 40 | 14 | 20 | 24 | 30 | 14 | 15 | 30 | 30 | 14 |
температура, °С | 320 | 270 | 280 | 270 | 270 | 270 | 270 | 270 | 360 | 270 | 270 | 270 |
время удерживания, мин | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 | 0 |
скорость нагрева 2, °С/мин | 1 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 5 | 2,5 | 3 | 2 | 1 | 2,5 | 3,5 | 2,5 |
температура, °С | 360 | 340 | 340 | 340 | 340 | 340 | 340 | 340 | 370 | 355 | 340 | 340 |
время удерживания, мин | 10 | 30 | 17 | 10 | 15 | 13 | 10 | 30 | 0 | 2 | 7 | 10 |
скорость нагрева 3, °С/мин | - | 10 | - | - | 25 | - | - | - | - | - | - | - |
конечная температура, °С | - | 350 | - | - | 200 | - | - | - | - | - | - | - |
время удерживания, мин | - | 9 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
температура инжектора, °С | 65 до 370 | 360 | температура в термостате | 365 | 370 | 350 |
| 340 | 380 | 140 до 340 | температура в термостате | 360 |
температура детектора, °С | 370 | 360 | 360 | 365 | 360 | 370 | 350 | 360 | 380 | 350 | 360 | 360 |
Режим инжекции | ||||||||||||
ручной (M)/автоматический (А) | М | А | - | А | А | А | М | А | А | А | А | А |
деление потока/на колонку/PTV | PTV | деление | OCI | деление | деление | деление | OCI | деление | деление | PTV | OCI | деление |
если деление [отношение деления] | - | 1:20 | - | 1:10 | 1:10 | 1:10 | - | 1:7 | - | - | - | 1:10 |
Таблица А.2 - Состав образцов, применяемых в межлабораторных испытаниях для проверки данного метода
|
|
|
|
|
|
Образец | Образцы шоколада  | Тип эквивалентов какао-масла (ЭКМ) | Содержание какао-масла (КМ), % | Содержание эквивалентов какао-масла, % | Содержание молочного жира (МЖ), % |
1 | Молочный шоколад, FCMP, нет ЭКМ | - | 29,67 | 0,00 | неизвестно |
2 | Молочный шоколад, FCMP, низкий уровень добавления ЭКМ | 50% PMF + 50% SOS высокой жирности | 29,22 | 0,45 | неизвестно |
3 | Молочный шоколад, SKMP + MF, нет ЭКМ | - | 25,70 | 0,00 | неизвестно |
4 | Молочный шоколад, SKMP+MF, низкий уровень добавления ЭКМ | 50% PMF + 50% SOS высокой жирности | 23,67 | 2,03 | неизвестно |
5 | Молочный шоколад, крошка + MF + FCMP + SKMP + WP, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 50% PMF + 50% SOS высокой жирности | 14,60 | 5,11 | неизвестно |
6 | Белый шоколад, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 50% PMF + 50% SOS высокой жирности | 23,50 | 3,95 | неизвестно |
7 | Западноафриканское КМ, нет ЭКМ | - | 100,00 | 0,00 | 0,00 |
8 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, нет ЭКМ | - | 85,01 | 0,00 | 14,99 |
9 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, низкий уровень добавления ЭКМ | 70% PMF + 30% SOS высокой жирности | 83,03 | 2,00 | 14,98 |
10 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 70% PMF + 30% SOS высокой жирности | 68,95 | 16,03 | 15,02 |
11 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 70% PMF + 30% SOS высокой жирности | 64,99 | 19,98 | 15,04 |
12 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 100% мягкого PMF | 64,94 | 20,08 | 14,99 |
13 | Западноафриканское КМ + смесь 310 образцов МЖ, установленный законом уровень добавления ЭКМ | 70% PMF + 30% SOS высокой жирности | 56,91 | 28,04 | 15,05 |
Образцы были приготовлены в испытательных шоколадотделочных машинах массой 40 кг. FCMP - сухое цельное молоко; SKMP - сухое обезжиренное молоко; WP - сухая сыворотка; PMF - промежуточная фракция пальмового масла, MF - молочный жир | |||||
Таблица А.3 - Данные прецизионности для образцов шоколада (образцы 5 и 6) и для образцов жира, выделенного из шоколада (образцы с 10 до 13)
|
|
|
|
|
|
|
Образец | 5 | 6 | 10 | 11 | 12 | 13 |
количество лабораторий | 12 | 12 | 12 | 12 | 12 | 12 |
количество выбросов | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
количество допущенных лабораторий | 12 | 11 | 12 | 12 | 12 | 12 |
Среднее значение, г ЭКМ/100 г шоколада | 5,20 | 4,08 | 4,62 | 5,81 | 5,35 | 8,23 |
Истинное значение, г ЭКМ/100 г шоколада | 5,11 | 3,95 | 4,81 | 5,99 | 6,02 | 8,41 |
Предел повторяемости, r [ r =2,8·  ], г/100 г | 0,276 | 0,150 | 0,261 | 0,188 | 0,186 | 0,231 |
Стандартное отклонение повторяемости, г/100 г | 0,098 | 0,054 | 0,093 | 0,067 | 0,067 | 0,082 |
Коэффициент вариации повторяемости, CV (r), % | 1,893 | 1,315 | 2,020 | 1,153 | 1,244 | 1,001 |
Предел воспроизводимости, R [ R =2,8·  ], г/100 г | 0,590 | 0,534 | 0,497 | 0,463 | 0,527 | 0,518 |
Стандартное отклонение воспроизводимости,  , г/100 г | 0,211 | 0,191 | 0,177 | 0,165 | 0,188 | 0,185 |
Коэффициент вариации воспроизводимости, CV (R), % | 4,053 | 4,678 | 3,843 | 2,847 | 3,518 | 2,248 |
Примечание - Образцы шоколада с 1 по 4 и образцы жира, выделенного из шоколада, с 7 по 9, представленные образцами с низким добавлением ЭКМ, применяемые для проверки метода обнаружения. Эффективность метода обнаружения (процент правильно классифицированных образцов) была 100%.
| ||||||
Приложение B
(справочное)
Примеры хроматограмм
Рисунок В.1 - Профиль триацилглицеридов сертифицированного стандартного материала какао-масла
Идентификация пиков: 1 - PPP; 2 - MOP; 3 - PPS; 4 - POP; 5 - PLP; 6 - не идентифицирован; 7 - PSS; 8 - POS; 9 - РОО; 10 - PLS; 11 - PLO; 12 - не идентифицирован; 13 - SSS; 14 - SOS; 15 - SOO; 16 - SLS+OOO; 17 - SLO; 18 - не идентифицирован; 19 - не идентифицирован; 20 - SOA; 21 - AOO.
Экспериментальные условия
Температура термостата колонки: Удерживание при 100°С не менее 2 мин;
30°С/мин до 270°С, удерживание в течение 1 мин;
2,5°С/мин до 340°С, удерживание в течение 7 мин;
|
|
Ввод пробы: | холодный в колонку. |
Детектор (ПИД): | 360°С. |
Газ-носитель: | Н с постоянной скоростью 3,5 см /мин. |
Обозначение
t - время удерживания
|
|
|
|
PPP | - трипалмитин |
| не идентифицирован |
MOP | - 1-миристоил-2-олеоил-3-палмитоил-глицерид | SSS | - тристеарин |
PPS | - 1,2-дипалмитоил-3стеароилглицерид | SOS | - 1,3-дистеароил-2-олеоилглицерид |
POP | - 1,3-дипалмитоил-2-олеоилглицерид | SOO | - 1-стеароил-2,3-диолеоилглицерид |
PLP | - 1,3-дипалмитоил-2-линолеоил-глицерид | SLS | - 1,3-дистеароил-2-линолеоил-глицерид |
| не идентифицирован | OOO | - триолеин |
PSS | - 1-палмитоил-2,3-дистеароилглицерид | SLO | - 1-стеароил-2-линолеил-3-олеоилглицерид |
POS | - 1-пальмитоил-2-олеоил-3-стеароил-глицерид |
| не идентифицирован |
POO | - 1-палмитоил-2,3-диолеоилглицерид |
| не идентифицирован |
PLS | - 1-палмитоил-2-линолеоил-3-стеароилглицерид | SOA | - 1-стеароил-2-олеоил-3-арахидоил-глицерид |
PLO | - 1-палмитоил-2-линолеоил-3-олеоил-глицерид | AOO | - 1-арахидоил-2,3-диолеилглицерид |
Рисунок В.2 - Профиль триацилглицеридов для чистого молочного жира, чистого какао-масла и их смеси
Идентификация пиков: 1 - POP; 2 - POS; 3 - POO; 4 - SOS; 5 - SOO; I, II, III, CN 34 до CN 54
Обозначение
t - время удерживания
|
|
POP | - 1,3-дипалмитоил-2-олеоилглицерид |
POS | - 1-пальмитоил-2-олеоил-3-стеароил-глицерид |
POO | - 1-палмитоил-2,3-диолеоилглицерид |
SOS | - 1,3-дистеароил-2-олеоилглицерид |
SOO | - 1-стеароил-2,3-диолеоилглицерид |
I | массовая доля молочного жира 100% |
II | массовая доля какао-масла 100% |
III | массовая доля какао-масла 85% + массовая доля молочного жира 15% |
CN 34 до CN 54 | группы пиков соответственно числу атомов углерода |
Рисунок В.3 - Профиль триацилглицеридов для чистого молочного жира: окно хроматограммы для той части, где элюируется PSB
Идентификация пиков: 1, PSB; CN 32 до CN 40
Обозначение
t - время удерживания
|
|
PSB | - 1-палмитоил-2-стеароил-3-бутироилглицерид |
CN 32 до CN 40 | группы пиков соответственно числу атомов углерода |
Обозначение
t - время удерживания
|
|
1 | - -холестан |
CN 26 до CN 34 | группы пиков соответственно числу атомов углерода |
Приложение ДА
(справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА.1
|
|
|
Обозначение и наименование международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование межгосударственного стандарта |
ISO 648:2008 | - | * |
ISO 1042:1998 | - | * |
ISO 5555:2001 | - | *, |
ISO 8655-2:2002 | - | * |
* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
| ||
________________
Библиография
|
|
|
[1] | ISO 1042 | Laboratory glassware; One-mark volumetric flasks (Посуда лабораторная стеклянная. Мерные колбы с одной меткой) |
[2] | ISO 648 | Laboratory glassware - Single-volume pipettes (Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной меткой) |
[3] | ISO 8655-2 | Piston-operated volumetric apparatus - Part 2: Piston pipettes (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 2. Пипетки, приводимые в действие поршнем) |
[4] | Animal and vegetable fats and oils - Sampling (Жиры и масла животные и растительные. Отбор проб) | |
[5] | AOAC Official Method 963.15, Fat in cacao products | |
[6] | KOEBER, R., BUCHGRABER, M., ULBERTH, F., BACAROLO, R., BERNREUTHER, A., SCHIMMEL, H., ANKLAM, E. and PAUWELS, J. The certification of the content of five triglycerides in cocoa butter, European Commission, Geel, 2003. (Report EUR 20781 EN.) (Сертификация содержания пяти триацилглицеридов в какао-масле) | |
[7] | BUCHGRABER, M., ANDRONI, S. Validation of an analytical approach to determine cocoa butter equivalents in milk chocolate - report on the final collaborative trial. European Commission, Geel, 2006, 162 p. (Report EUR 22553 EN.) Available (2009-03-20) at:http://www.irmm.jrc.be/html/activities/cocoa_butter_calculation-toolbox/EUR22553EN_CT_MC.pdf (Валидация аналитического метода определения эквивалентов какао-масла в молочном шоколаде - отчет итогового межлабораторного испытания) | |
[8] | BUCHGRABER, M., ANDRONI, S., ANKLAM, E. Quantification of milk fat in chocolate fats by triacylgliceride analysis using gas-liquid chromatography. J. Agric. Food Chem. 2007, 55, pp.3275-3283 (Количественное определение молочного жира в жирах шоколада посредством анализа триацилглицеридов методом газожидкостной хроматографии) | |
[9] | BUCHGRABER, M., ANDRONI, S., ANKLAM, E. Determination of cocoa butter equivalents in milk chocolate by triacylgliceride profiling. J. Agric. Food Chem. 2007, 55, pp.3284-3291 (Определение эквивалентов какао-масла в молочном шоколаде с использованием триацилглицеридного профиля) | |
[10] | BUCHGRABER, M., SENALDI, C., ULBERTH, F., ANKLAM, E. Detection and quantification of cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate by gas liquid chromatography of triacylglicerides, J. AOAC Int. 2004, 87, pp.1153-1163 (Определение наличия и количественное определение эквивалентов какао-масла в какао-масле и шоколаде путем разделения триацилглицеридов газожидкостной хроматографии) | |
[11] | BUCHGRABER, M., ULBERTH, F., ANKLAM, E. Method validation for detection and quantification of cocoa butter equivalents in cocoa butter and plain chocolate. J. AOAC Internat, 87, 2004, pp.1164-1172 (Валидация метода определения наличия и количественного определения эквивалентов какао-масла в какао-масле и шоколаде) | |
|
|
|
УДК 665.355.97(083.74)(476) | МКС 67.190; 67.200.10 | IDT |
Ключевые слова: жиры растительные, жиры животные, масла растительные, масла животные, эквиваленты какао-масла, молочный шоколад, метод газожидкостной хроматографии высокого разрешения | ||