ГОСТ Р 51240-98 Соки фруктовые и овощные Метод определения глюкозы и фруктозы.

ГОСТ Р 51240-98

(ДИН 1140-94)

Группа Н59

 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

 Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

 Fruit and vegetable juices. Determination of D-glucose and D-fructose content

ОКС 67.080

ОКСТУ 9109

Дата введения 1999-07-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. N 463

3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН ЕН 1140-94* "Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-глюкозы и D-фруктозы. Спектрофотометрическое определение НАДФН (никотинамидадениндинуклеотидфосфата)" с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7, 8 и 9 и пункт 6.1)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

 1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы.

 2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

      3 Определение, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в граммах на кубический дециметр.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения.

АТФ - аденозин-5’-трифосфат;

АДФ - аденозин-5’-дифосфат;

НАДФ -

-никотинамидадениндинуклеотидфосфат;

НАДФН -

-никотинамидадениндинуклеотидфосфат (восстановленная форма);

Г-6-Ф - глкюкозо-6-фосфат;

Ф-6-Ф - фруктозо-6-фосфат;

ГК - гексокиназа;

Г6Ф-ДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

ФГИ - фосфоглюкозоизомераза;

Е - международная единица, определяет количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 °С 1 мкмоля вещества в минуту.

 4 Сущность метода и реакции

4.1 Сущность метода

Метод [1, 2] основан на фосфорилировании D-глюкозы и D-фруктозы под действием АТФ в присутствии ГК с образованием Г-6-Ф и Ф-6-Ф, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой концентрации D-глюкозы; изомеризации Ф-6-Ф в Г-6-Ф в присутствии ФГИ, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой концентрации D-фруктозы в пробе.

4.2 Реакции, происходящие при определении D-глюкозы:     

            (1)

(2)

4.3 Реакции, происходящие при определении D-фруктозы:

       (3)

                                       (4)

.  (5)

 5 Реактивы

5.1 Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-глюкозы и D-фруктозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты триэтаноламингидрохлорида, динатриевой соли

-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (

) и динатриевой соли аденозин-5’-трифосфата (

) должны содержать не менее 90% основного вещества.

5.2 Буферный раствор гидрохлорида триэтаноламина активной кислотностью 7,6 pH

14,0 г триэтаноламингидрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см

дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,6 pH приблизительно 5 см

раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации

(

)=5 моль/дм

. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 см

. Буферный раствор устойчив при температуре 4

°

С 1 мес.

5.3 Раствор НАДФ

0,06 г динатриевой соли

-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (

) растворяют в 6 см

дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4

°

С 1 мес.

5.4 Раствор АТФ

0,3 г динатриевой соли аденозин-5’-трифосфата (

) и 0,3 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см

дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4

°

С 1 мес.

5.5 Суспензия ферментов ГК и Г6Ф-ДГ

Раствор гексокиназы массовой долей 0,002 г/см

и удельной активностью не менее 280 Е/см

, содержащий глюкозу в качестве субстрата и АТФ, и раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы массовой долей 0,001 г/см

и удельной активностью не менее 140 Е/см

, содержащий глюкозы-6-фосфат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации

(

)=3,2 моль/дм

. Суспензия устойчива при температуре 4

°

С 12 мес.

5.6 Суспензия фермента ФГИ

Раствор фосфоглюкозаизомеразы массовой концентрацией 0,002 г/см

, удельной активностью не менее 700 Е/см

, содержащий фруктозо-6-фосфат в качестве субстрата, суспендируют в растворе сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации

(

)=3,2 моль/дм

. Суспензия устойчива при температуре 4

°

С 12 мес.

 6 Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1-6.4.

6.1 Дозаторы пипеточные [3]* объемами доз 100, 50 и 25 см

и относительной погрешностью дозирования

±1%

или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,02 см

и допускаемой относительной погрешностью

±1%.

6.2 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

6.3 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.