ГОСТ 9.052-88 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов.
ГОСТ 9.052-88
Группа Т99
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Единая система защиты от коррозии и старения
МАСЛА И СМАЗКИ
Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов
Unified system of corrosion and ageing protection. Oils and greases. Laboratory test methods for mould resistance
МКС 19.040
75.100
ОКСТУ 0009
Дата введения 1989-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством высшего и среднего специального образования СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 25.03.88 N 754
3. ВЗАМЕН ГОСТ 9.052-75
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта, подпункта, приложения |
1.3.3, 1.4, 1.5.1, 1.5.2, 1.5.3, 1.6.1, 2.4, 2.6.1, 3.4, 3.6.1, 4.4, приложение | |
Приложение | |
Приложение | |
1.2.1 | |
Приложение | |
Приложение | |
Приложение | |
Приложение | |
Приложение | |
Приложение |
5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ
Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов:
1 - для установления грибостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений;
2 - для установления грибостойкости смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
3 - для установления грибостойкости масел в условиях, имитирующих минеральные загрязнения;
4 - для установления грибостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.
Смазки, применяемые для оптических приборов, испытывают только методом 1.
Методы применяют при испытании масел и смазок, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования грибостойкости.
1. МЕТОД 1
1.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных водной суспензией спор грибов, в условиях, оптимальных для развития грибов, без дополнительного источника минерального и органического питания.
1.2. Отбор образцов
1.2.1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517 массой 10-15 г.
1.2.2. Образцами являются масла и смазки в состоянии поставки, без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Количество параллельных образцов должно быть не менее пяти.
1.3. Виды грибов
1.3.1. Для испытаний применяют чистые культуры следующих видов плесневых грибов:
Aspergillus niger van Tieghem
Penicillium chrysogenum Thom
Penicillium cyclopium Westling
Scopulariopsis brevicaulis (Sacc.) Bainier
Paecilomyces varioti Bainier
1.3.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.
1.3.3. Пересев, выращивание и хранение культур грибов - по ГОСТ 9.048.
1.4. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048.
1.5. Подготовка к испытаниям
1.5.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048.
1.5.2. Среды для выращивания, хранения культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048.
Рецептура сред приведена в таблице.
|
|
|
|
|
|
Наименование реактива | Среда 1 (Чапека-Докса с агаром) | Среда 2 (Чапека-Докса с агаром без сахарозы) | Среда 3 (выщелоченный агар) | Среда 4 (сусло-агар) | Среда 5 (минеральная без сахарозы) |
Однозамещенный фосфорнокислый калий, г | 0,7 | 0,7 | - | - | 1,0 |
Двузамещенный фосфорнокислый калий, г | 0,3 | 0,3 | - | - | - |
Сернокислый магний, г | 0,5 | 0,5 | - | - | 0,5 |
Азотнокислый натрий, г | 2,0 | 2,0 | - | - | 3,0 |
Хлористый калий, г | 0,5 | 0,5 | - | - | 2,0 |
Сернокислое железо, г | 0,01 | 0,01 | - | - | - |
Сахароза, г | 30,0 | - | - | - | - |
Агар-агар, г | 30,0 | Выщелоченный 30,0 | Выщелоченный 30,0 | 30,0 | - |
Четырехбаллинговое неохмеленное пивное сусло (4% сахара), см  | - | - | - | До 1000 | - |
Дистиллированная вода, см  | До 1000 | - | - | ||
Водопроводная вода, см | - | - | - | - | До 1000 |
1.5.3. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048, используя грибы, приведенные в п.1.3.1.
Образцы смазок наносят на предметные стекла, покрывая всю поверхность слоем 1,5-2,0 мм, и помещают в чашки Петри.
1.5.5. Контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048.
1.6. Проведение испытаний
1.6.1. Водную суспензию спор грибов готовят по ГОСТ 9.048, используя грибы, выращенные, как указано в п.1.5.3.
1.6.2. Предметные стекла в чашках Петри, чашки Петри с образцами масел помещают в бокс. Поверхность образцов заражают водной суспензией спор грибов с помощью пульверизатора, не допуская слияния капель.
1.6.3. Образцы масел и смазок после заражения выдерживают 1-2 ч при температуре (25±10)°С.
1.6.4. Предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри с зараженными образцами и средами помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29±2)°С.
1.6.5. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.
1.6.6. Через 3-7 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри. Если на поверхности среды развитие грибов не наблюдается, споры грибов считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией спор из новой партии грибов.
1.6.7. Через 28 сут производят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие грибов, прекращают.
1.6.8. По окончании испытаний предметные стекла в чашках Петри и чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.
1.7. Обработка результатов
1.7.1. Образцы смазок и масел осматривают под микроскопом при 50-60-кратном увеличении.
1.7.2. Масла и смазки считают грибостойкими при отсутствии развития грибов на всех испытанных образцах.
2. МЕТОД 2
2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
2.2. Отбор образцов - по п.1.2.
2.3. Виды грибов - по п.1.3.
2.4. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048.
2.5. Подготовка к испытаниям - по пп.1.5.1-1.5.3, 1.5.5.
2.6. Проведение испытаний
2.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048.
2.6.2. Смазки наносят скальпелем в количестве пяти образцов размером 10х10 мм толщиной 1,5-2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, подготовленную, как указано в п.2.5.1.
2.6.3. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.6.2-1.6.4.
2.6.4. Образцы выдерживают в течение 28 сут.
2.6.5. Дальнейший порядок проведения испытаний - по пп.1.6.6-1.6.8 с промежуточным осмотром образцов через 14 сут.
2.7. Обработка результатов - по пп.1.7.1, 1.7.2.
3. МЕТОД 3
3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального питания.
3.2. Отбор образцов - по п.1.2.
3.3. Виды грибов - по п.1.3.
3.4. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048.
3.5. Подготовка к испытаниям - по пп.1.5.1-1.5.3 и 1.5.5.
3.5.2. Контролем служит суспензия спор грибов в среде 5.
3.6. Проведение испытаний
3.6.1. Суспензию спор грибов в среде 5 готовят по ГОСТ 9.048.
3.6.3. Пробирки помещают в наклонном положении под углом 30° и выдерживают в термостате при температуре (29±2)°С.
3.6.4. Пробирки с образцами выдерживают в термостате 10 сут.
3.6.5. Через 5 и 7 сут осматривают образцы. Допускается отбирать пробы минеральной среды из пробирок для оценки грибостойкости биолюминесцентным методом, при этом пробирки с образцами выдерживают в термостате 3 и 5 сут.
При появлении признаков развития грибов в образцах испытания прекращают.
3.6.6. По окончании испытаний пробирки с образцами извлекают из термостата и осматривают невооруженным глазом или с помощью лупы при 2,5-5,0-кратном увеличении.
3.7. Обработка результатов
3.7.1. Масла считаются грибостойкими, если отсутствует развитие грибов на всех испытанных образцах (отсутствует пленка на границе раздела среда-масло, в пробирках среда прозрачна и не пигментирована, нет осадка).
3.7.2. Масла считаются не стойкими к плесневым грибам, если на образцах наблюдается развитие грибов, признаком которого служит образование пленки на границе раздела среда-масло, помутнение и пигментация среды, образование осадка.
3.7.3. Допускается оценивать грибостойкость масел биолюминесцентным методом, приведенным в приложении.
4. МЕТОД 4
4.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов, зараженных суспензией спор грибов в водном растворе минеральных солей, в условиях, оптимальных для развития грибов, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.
4.2. Отбор образцов - по п.1.2.
4.3. Виды грибов - по п.1.3.
4.4. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048.
4.5. Подготовка к испытаниям - по пп.1.5.1-1.5.3, 1.5.5.
4.5.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п.2.5.1, используя среду 1 или 4.
4.5.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п.1.5.4, используя среду 1 или 4.
4.6. Проведение испытаний - по п.2.6.
4.6.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, приведенных в п.1.6.4, 14 сут.
4.6.2. Промежуточный осмотр образцов производят через 7 сут после начала испытаний.
4.7. Обработка результатов - по пп.1.7.1 и 1.7.2.
5. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ - по ГОСТ 9.048-89.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Обязательное
БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД ОЦЕНКИ ГРИБОСТОЙКОСТИ
Сущность метода заключается в определении количества внутриклеточной аденозин-5’-трифосфорной кислоты динатриевой соли (АТФ) в минеральной среде после испытания масел на грибостойкость (п.3.6.5) с помощью специфической ферментативной хемилюминесцентной реакции с использованием люциферин-люциферазной системы светляков. Интенсивность излучаемого свечения прямо пропорциональна концентрации АТФ. Концентрация АТФ пропорциональна количеству живых клеток, так как ее содержание во всех типах живых клеток примерно одинаково и составляет 1-10 мг/г сухого веса. Этот факт является основной биолюминесцентного метода определения биомассы.
1. Аппаратура, материалы и реактивы
Весы для статического взвешивания по ГОСТ 29329.
Термостат, обеспечивающий температуру нагрева до 200°С.
Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 16317.
Лабораторный рН-метр.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
Аденозин-5’-трифосфорной кислоты динатриевая соль, 3-водная (АТФ).
Люцифераза светляков.
Люциферин.
Диметилсульфоксид (ДМСО), х.ч.
Трис-(оксиметил)-аминометан, х.ч.
Кислота уксусная, х.ч. по ГОСТ 61.
Магний сернокислый, 7-водный, х.ч. по ГОСТ 4523.
Соль динатриевая этилендиамин - N, N, N’, N’ - тетрауксусной кислоты, 2-водная (трилон Б) (ЭДТА) по ГОСТ 10652.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
2. Подготовка к испытаниям
2.1. Стерилизуют посуду по ГОСТ 9.048.
3. Проведение испытаний
4. Обработка результатов
10 - коэффициент, учитывающий разбавление пробы образца при экстракции клеток диметилсульфоксидом в 10 раз.
При упрощении формула (3) приобретает вид:
