ГОСТ Р 53774-2010 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков.
ГОСТ Р 53774-2010
Группа Н19
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков
Milk and milk products. Immunoenzyme methods for determination of antibiotics indication
ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2011-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. N 24-ст
4 ВЗАМЕН ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5 и 6 (рецепторные методы)
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Приказом Росстандарта от 14.12.2011 N 1553-ст c 01.07.2012
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее - молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:
- методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;
- методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы;
- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;
- метод одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;
- метод определения наличия гентамицина;
- метод определения наличия сульфаметазина.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы
3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °С до 66 °С с допустимой погрешностью ±0,5 °С.
3.2 Блок термостатированных ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5±1,0) °С.
3.3 Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °С до 12 °С по ГОСТ 16317.
3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20±2) °С.
3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
3.10 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.11 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
3.12 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:
_______________
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.13 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 °С до 66 °С.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
4 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ Р 53430 с дополнением. Допускается хранить пробы молока для определения в холодильнике при температуре (5±1) °С не более 24 ч.
5 Методы контроля
5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа
5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.1.1.1 Подготовка к определению
Вскрывают упаковку тест-набора N 1, проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.
Срок хранения тест-набора N 1 (без упаковки) при температуре (20±2) °С - не более 24 ч.
5.1.1.2 Проведение определения
Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45±5) °С в течение 5-6 мин.
Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45±5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.1.1.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 1.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.
5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.
5.1.2.1 Подготовка к определению
Необходимое для проведения определения количество комплектов тест-наборов N 2 по 3.12 перед применением выдерживают при комнатной температуре в течение 10-15 мин.
Флаконы с реагентом по 3.12 встряхивают для полного осаждения содержимого на дне.
5.1.2.2 Проведение определения
5.1.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.1.2.2 в соответствии с А.2 (приложение А).
Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
5.1.3 Метод с использованием тест-набора N 3
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с мечеными белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.
5.1.3.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 3 хранят в холодильнике при температуре от (6±2) °С не более 6 мес.
Анализируемое молоко переливают в колбу по 3.8 или 3.9, помещают в термостат и выдерживают в нем до достижения температуры молока (64±2) °С.
Необходимое для проведения определения количество входящих в состав тест-набора N 3 флаконов извлекают из набора и открывают, удаляя фольгу.
5.1.3.2 Проведение определения
Флакон с анализируемым молоком помещают в термостат и выдерживают при температуре (64±2) °С в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата и перемешивают круговыми движениями.
Во флакон помещают полоску хроматографической бумаги на 3 мин, после чего извлекают из флакона и считывают результат.
5.1.3.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.1.3.2 в соответствии с А.2 (приложение А).
Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
5.1.3, 5.1.3.1-5.1.3.3 (Измененная редакция, Изм. N 1).
5.1.4 Метод с использованием тест-набора N 8
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическим иммунокомплексом антител, меченных коллоидным золотом, и антигенов с последующим визуальным выявлением оставшихся свободными иммунокомплексов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.
5.1.4.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 8 хранят в холодильнике или другом сухом месте при температуре от 2 °С до 30 °С не более года.
Вскрывают герметично укупоренный пакет, достают закрытый крышкой контейнер. Открывают контейнер, крышку помещают на стол вниз донышком.
Открытый контейнер выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 10-15 мин.
Необходимое для проведения определения количество пластиковых чашек достают из пакета и ставят по одной на ровную сухую поверхность.
5.1.4.2 Проведение определения
Из контейнера берут полоску хроматографической бумаги и помещают ее в чашку под наклоном так, чтобы она касалась и дна, и стенки чашки. Через 5 мин полоску хроматографической бумаги извлекают из чашки и считывают результат.
5.1.4.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.1.4.2 в соответствии с А.6 (приложение А).
Появление трех полосок одинакового интенсивно-красного цвета свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
Если одна или две линии из трех не появились или цвет их менее интенсивный, это свидетельствует о наличии антибиотиков бета-лактамного типа в молоке.
Если окрашивания не произошло или появились три полоски одинакового бледно-розового цвета, результат считают недействительным и определение повторяют по 5.1.4.2.
5.1.4, 5.1.4.1-5.1.4.3 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
5.2 Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы
5.2.1 Метод с использованием тест-набора N 4
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.2.1.1 Подготовка к определению
Подготовку тест-набора N 4 по 3.12 проводят по 5.1.1.1.
5.2.1.2 Проведение определения - по 5.1.1.2 (для тест-набора N 1 ("Бета-лактам Snap")).
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.2.1.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 4.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики тетрациклиновой группы в анализируемом молоке отсутствуют.
Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о присутствии в нем антибиотиков тетрациклиновой группы.
5.2.2 Метод с использованием тест-набора N 5
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.
5.2.2.1 Подготовка к определению
Подготовку тест-набора N 5 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.
5.2.2.2 Проведение определения
5.2.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.2.2.2 в соответствии с А.3 (приложение А).
Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.
5.2.3 Метод с использованием тест-набора N 9
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическим иммунокомплексом антител, меченных коллоидным золотом, и антигенов с последующим визуальным выявлением оставшихся свободными иммунокомплексов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.
5.2.3.1 Подготовка к определению по 5.1.4.1.
5.2.3.2 Проведение определения по 5.1.4.2.
5.2.3.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.2.3.2 в соответствии с А.3 (приложение А).
Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.
5.2.3, 5.2.3.1-5.2.3.3 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
5.3 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы
5.3.1 Метод с использованием тест-набора N 6
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.3.1.1 Подготовка к определению
Из тест-набора N 6 по 3.12 отбирают необходимое количество пеналов и перед их открытием выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.
Из тест-набора N 6 отбирают и маркируют необходимое количество микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов.
Термост нагревают до температуры (40±3) °С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.
Восстановление контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard"
Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 °С - не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.
5.3.1.2 Проведение определения
В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и термостатируют в течение 3 мин при температуре (40±3) °С. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.
5.3.1.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.4 (приложение А).
Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной.
Если после проведения определения окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют по 5.3.1.2.
Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
При проведении определений с применением контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов проводят, как указано выше.
5.3.2 Метод с использованием тест-набора N 7
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.3.2.1 Подготовка к определению
Подготовку тест-набора N 7 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.
5.3.2.2 Проведение определения с использованием тест-набора N 7 ("Betastar Combo") - в соответствии с 5.2.2.2.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.3.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5 (приложение А).
Зона центральной части полоски хроматографической бумаги является контрольной.
Если после проведения определения по 5.2.2.2 не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новой тест-полоской.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы - под контрольной зоной.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков испытуемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зон определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.3.3 Метод с использованием тест-набора N 10
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.3.3.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.
5.3.3.2 Проведение определения
Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45±5) °С в течение 5-6 мин.
Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45±5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата
5.3.3.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.7 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.3.3.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 10.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики в анализируемом молоке отсутствуют.
Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии в анализируемом молоке антибиотиков.
5.3.3, 5.3.3.1-5.3.3.3 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
5.4 Метод одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина с использованием тест-набора N 11
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.
5.4.1 Подготовка к определению
5.4.1.1 Тест-набор N 6 по 3.12 хранят в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С. Перед открытием пеналы выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.
Берут необходимое число микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов и маркируют их. Оставшиеся микропробирки хранят в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С.
5.4.1.2 Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40±3) °С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.
5.4.1.3 Подготовка контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard"
5.4.2 Проведение определения
5.4.2.2 В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и выдерживают в термостате или на водяной бане в течение 5 мин при температуре (40±3) °С. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.
5.4.3 Обработка результатов
5.4.3.1 Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (приложение А).
5.4.3.2 Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения процедур окрашивания контрольной зоны не произошло, то результат считается недействительным и процедуры по 5.4.2 повторяют.
5.4.3.3 Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной четвертой.
Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков, свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.
5.4.3.4 При проведении испытаний с использованием контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов осуществляют в соответствии с 5.4.3.1-5.4.3.3.
5.5 Метод определения гентамицина с использованием тест-набора N 12
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой гентамицин захватывается специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие гентамицина устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.5.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.
5.5.2 Проведение определения в соответствии с 5.2.1.2.
5.5.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.5.2 не произошло, то определение наличия гентамицина в молоке повторяют с новым тест-набором N 12.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, гентамицин в анализируемом молоке отсутствует.
Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии гентамицина в анализируемом молоке.
5.6 Метод определения сульфаметазина с использованием тест-набора N 13
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой сульфаметазин захватывается специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие сульфаметазина устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.6.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.
5.6.2 Проведение определения в соответствии с 5.5.2.
5.6.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.6.2 не произошло, то определение наличия сульфаметазина в молоке повторяют с новым тест-набором N 13.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, сульфаметазин в анализируемом молоке отсутствует.
Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии сульфаметазина в анализируемом молоке.
5.4, 5.4.1, 5.4.1.1-5.4.1.3, 5.4.2, 5.4.2.1, 5.4.2.2, 5.4.3, 5.4.3.1-5.4.3.4, 5.5, 5.5.1-5.5.3, 5.6, 5.6.1-5.6.3 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
6 Метрологические характеристики
Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах приведены в таблице 1.
Таблица 1
Ед/г (мкг/г)*
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Наименование антибиотика | Наименьший предел определения антибиотиков с использованием тест-наборов | |||||||||||||
| N 1 | N 2 | N 3 | N 4 | N 5 | N 6 | N 7 | N 8 | N 9 | N 10 | N 11 | N 12 | N 13 | |
|
|
|
|
|
|
| Combo | Combo HS |
|
|
|
|
|
|
Амоксициллин | 0,0035 | 0,002 | 0,004 | - | - | 0,003 | 0,002 | 0,002 | 10 | - | 0,003 | 0,002 | - | - |
Ампициллин | 0,0035 | 0,002 | 0,004 | - | - | 0,003 | 0,002 | 0,002 | 2 | - | 0,003 | 0,003 | - | - |
Бензициллин | 0,003 | - | - | - | - | 0,003 | - | - | - | - | - | 0,003 | - | - |
Гентамицин | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,03 | - |
Гетациллин | 0,01 | - | - | - | - | 0,005 | - | - | - | - | - | 0,005 | - | - |
Дигидрострептомицин | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,05 | - | - |
Диклоксациллин | 0,02 | 0,005 | 0,03 | - | - | 0,006 | 0,003 | 0,002 | 0,02 | - | 0,011 | 0,006 | - | - |
Доксициклин | - | - | - | 0,04 | - | 0,0025 | 0,025 | 0,002 | - | 0,07 | - | 0,002 | - | - |
Клоксациллин | 0,022 | 0,005 | 0,03 | - | - | 0,006 | 0,005 | 0,002 | 0,004 | - | 0,018 | 0,006 | - | - |
Левомицетин (хлорамфеникол) | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,003 | - | - |
Метациклин | - | - | - | 0,04 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Метициллин | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Нафциллин | 0,052 | 0,008 | - | - | - | 0,030 | 0,012 | 0,0075 | 0,005 | - | 0,046 | 0,03 | - | - |
Оксациллин | 0,024 | 0,005 | 0,003 | - | - | 0,012 | 0,003 | 0,003 | 0,01 | - | 0,032 | 0,012 | - | - |
Окситетрациклин | - | - | - | 0,01 | 0,06 | 0,007 | 0,05 | 0,01 | - | 0,02 | 0,01 | 0,007 | - | - |
Пенициллин G | 0,002 | 0,002 | 0,004 | - | - | 0,002 | 0,002 | 0,002 | 0,003 | - | 0,001 | 0,002 | - | - |
Пенициллин V | 0,003 | - | - | - | - | 0,002 | - | - | - | - | - | 0,002 | - | - |
Пиперациллин | 0,006 | - | - | - | - | 0,005 | - | - | - | - | - | 0,005 | - | - |
Прокаинпенициллин | 0,002 | - | - | - | - | 0,003 | - | - | - | - | - | 0,003 | - | - |
Стрептомицин | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,15 | - | - |
Сульфаметазин | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,01 |
Тетрациклин | - | - | - | 0,011 | 0,06 | 0,01 | 0,05 | 0,01 | - | 0,02 | 0,01 | 0,01 | - | - |
Тикарциллин | 0,04 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Хлортетрациклин | - | - | - | 0,026 | 0,04 | 0,006 | 0,025 | 0,006 | - | 0,1 | 0,026 | 0,005 | - | - |
Цефадроксил | 0,03 | - | - | - | - | 0,005 | - | - | - | - | - | 0,005 | - | - |
Цефазолин | 0,013 | 0,04 | 0,05 | - | - | 0,018 | 0,005 | 0,015 | 0,003 | - | - | 0,018 | - | - |
Цефалексин | 0,025 | - | 0,1 | - | - | 0,750 | - | 0,4 | 0,01 | - | 0,01 | 1,0 | - | - |
Цефалоний | 0,04 | - | - | - | - | 0,003 | - | - | - | - | - | 0,003 | - | - |
Цефалониум | 0,04 | 0,007 | 0,02 | - | - | 0,003 | 0,004 | 0,003 | 0,003 | - | 0,04 | 0,003 | - | - |
Цефапирин | 0,011 | 0,008 | - | - | - | 0,006 | 0,008 | 0,004 | 0,02 | - | 0,008 | 0,006 | - | - |
Цефацетрил | 0,05 | - | - | - | - | 0,03 | - | - | - | - | 0,009 | 0,03 | - | - |
Цефкином | 0,02 | 0,02 | 0,02 | - | - | 0,02 | 0,02 | 0,006 | 0,02 | - | 0,01 | 0,03 | - | - |
Цефоксазол | 0,05 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефоперазон | 0,01 | 0,005 | 0,05 | - | - | 0,003 | 0,005 | 0,003 | 10 | - | 0,004 | 0,003 | - | - |
Цефотаксим | 0,01 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Цефрадин | 0,03 | - | - | - | - | - | - | - | 0,005 | - | - | - | - | - |
Цефтиофур | 0,011 | 0,075 | 0,1 | - | - | 0,01 | 0,05 | 0,05 | 0,005 | - | 0,002 | 0,01 | - | - |
Цефуроксим | 0,01 | - | - | - | - | - | - | - | 0,005 | - | - | - | - | - |
* 0,003 мкг активного вещества равно 0,005 Ед активности. | ||||||||||||||
(Измененная редакция, Изм. N 1).
Приложение А
(обязательное)
Примеры возможных результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах
А.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.1.
1 - антибиотики присутствуют; 2, 3 - антибиотики отсутствуют
Рисунок А.1
А.2 Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.2.
1 - антибиотики отсутствуют; 2, 3, 4 - антибиотики присутствуют; 5 - недействительный результат
Рисунок А.2
А.3 Примеры результатов определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.3.
1, 2 - антибиотики отсутствуют; 3, 4 - антибиотики присутствуют; 5 - недействительный результат
Рисунок А.3
А.1-А.3 (Измененная редакция, Изм. N 1).
А.4 Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 6 приведены на рисунке А.4.
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 3 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 4 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 - недействительный результат
Рисунок А.4
А.5 Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 7 приведены на рисунке А.5.
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 3 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 4 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 5 - недействительный результат
Рисунок А.5
(Измененная редакция, Изм. N 1).
А.6 Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 8 приведены на рисунке А.6.
1 - антибиотики присутствуют; 2 - антибиотики отсутствуют; 3 - недействительный результат
Рисунок А.6
А.7 Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 10.
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; 3 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 4 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы
Рисунок А.7
А.8 Примеры (некоторые) результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 11 приведены на рисунке А.8.
1 - антибиотики отсутствуют; 2 - присутствуют антибиотики тетрациклиновой группы; 3 - присутствует левомицетин; 4 - присутствует стрептомицин; 5 - присутствуют антибиотики бета-лактамного типа; 6 - недействительный результат
Рисунок А.8
А.6-А.8 (Введены дополнительно, Изм. N 1).
Библиография
|
|
[1] СП 1.2.731-99* | Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами |