ГОСТ Р 53774-2010 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков.
ГОСТ Р 53774-2010
Группа Н19
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков
Milk and milk products. Immunoenzyme methods for determination of antibiotics indication
ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2011-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. N 24-ст
4 ВЗАМЕН ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5 и 6 (рецепторные методы)
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Приказом Росстандарта от 14.12.2011 N 1553-ст c 01.07.2012
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее - молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:
- методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;
- методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы;
- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;
- метод одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;
- метод определения наличия гентамицина;
- метод определения наличия сульфаметазина.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы
3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °С до 66 °С с допустимой погрешностью ±0,5 °С.
3.2 Блок термостатированных ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5±1,0) °С.
3.3 Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °С до 12 °С по ГОСТ 16317.
3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20±2) °С.
3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.
3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
3.10 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.11 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
3.12 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:
_______________
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.13 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 °С до 66 °С.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
4 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ Р 53430 с дополнением. Допускается хранить пробы молока для определения в холодильнике при температуре (5±1) °С не более 24 ч.
5 Методы контроля
5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа
5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.
Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.
5.1.1.1 Подготовка к определению
Вскрывают упаковку тест-набора N 1, проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.
Срок хранения тест-набора N 1 (без упаковки) при температуре (20±2) °С - не более 24 ч.
5.1.1.2 Проведение определения
Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45±5) °С в течение 5-6 мин.
Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45±5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.
Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.1.1.3 Обработка результатов
Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).
Контрольная зона должна быть синего цвета.
Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 1.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.
Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.
5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.
5.1.2.1 Подготовка к определению
Необходимое для проведения определения количество комплектов тест-наборов N 2 по 3.12 перед применением выдерживают при комнатной температуре в течение 10-15 мин.
Флаконы с реагентом по 3.12 встряхивают для полного осаждения содержимого на дне.
5.1.2.2 Проведение определения
5.1.2.3 Обработка результатов
Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.1.2.2 в соответствии с А.2 (приложение А).
Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.
Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.
Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.
5.1.3 Метод с использованием тест-набора N 3
Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с мечеными белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.
5.1.3.1 Подготовка к определению
Тест-набор N 3 хранят в холодильнике при температуре от (6±2) °С не более 6 мес.
Анализируемое молоко переливают в колбу по 3.8 или 3.9, помещают в термостат и выдерживают в нем до достижения температуры молока (64±2) °С.
Необходимое для проведения определения количество входящих в состав тест-набора N 3 флаконов извлекают из набора и открывают, удаляя фольгу.
5.1.3.2 Проведение определения
Флакон с анализируемым молоком помещают в термостат и выдерживают при температуре (64±2) °С в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата и перемешивают круговыми движениями.
Во флакон помещают полоску хроматографической бумаги на 3 мин, после чего извлекают из флакона и считывают результат.
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.