ГОСТ ISO 15174-2014 Молоко и молочные продукты. Микробные коагулянты. Определение общей молокосвертывающей активности.
ГОСТ ISO 15174-2014
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Микробные коагулянты. Определение общей молокосвертывающей активности
Milk and milk products. Microbial coagulants. Determination of total milk-clotting activity
МКС 07.100.30
67.100.10
Дата введения 2016-01-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 мая 2014 г. N 67-П)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 июля 2014 г. N 707-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15174-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15174:2012* "Молоко и молочные продукты. Микробные коагулянты. Определение общей молокосвертывающей активности" ("Milk and milk products - Microbial coagulants - Determination of total milk-clotting activity", IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной федерацией по молочному животноводству (IDF)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
Введение
Микробные коагулянты получают из различных микробиологических источников, наиболее распространенными являются Rhizomucor miehei (КФ 3.4.23.23), R. pusillus (КФ 3.4.23.23) и Cryphonectria parasitica, ранее называемый Endothia parasitica (КФ 3.4.23.22).
Каждый из этих коагулянтов имеет свои собственные характеристики, что касается общей молокосвертывающей активности, и свойства, связанные с сыроделием. Существуют различия в чувствительности к воздействию температуры, pH, ионов кальция, а также во влиянии на реологические свойства образованного молочного геля.
Поэтому очень важно, исходя из практических и экономических соображений, иметь международный метод определения общей молокосвертывающей активности микробных коагулянтов относительно признанного на международном уровне контрольного образца. Так по практическим причинам было решено использовать коагулянт, полученный с использованием R. miehei, в качестве контрольного образца микробных коагулянтов для всех коагулянтов этого типа.
Этот метод соответствует методу определения относительной молокосвертывающей активности говяжьего сычужного фермента, описанного в ISO 11815 | lDF 157.
Качественное определение микробных коагулянтов в пробе можно выполнять в соответствии с [7], приложение А. В случае смеси различных молокосвертывающих ферментов невозможно осуществить правильное определение общей молокосвертывающей активности в пробе.
1 Область применения
2 Принцип
3 Реактивы и материалы
Если не указано иное, используют реактивы только признанного аналитического качества и дистиллированную или деминерализованную воду, либо воду эквивалентной чистоты.
________________
Перед применением доводят температуру основного раствора хлорида кальция до комнатной (18°С-22°С). Проверяют концентрацию раствора хлорида кальция путем титрования раствором ЕDTA (этилендиаминтетрауксусной кислоты) один раз в год.
Для приготовления рабочего раствора хлорида кальция рекомендуется взвешивание основного раствора хлорида кальция (3.2), поскольку вязкий раствор трудно отбирать пипеткой.
3.4 Сухое молоко низкотемпературного сгущения и распылительной сушки с пониженным содержанием жира, с хорошим сычужным свертыванием и хорошего бактериологического качества.
________________
3.5 Порошкообразный контрольный образец микробного коагулянта (Rhizomucor miehei) в стеклянных ампулах. Точное значение общей молокосвертывающей активности маркируют на ампулах.
Хранят порошкообразный контрольный образец микробного коагулянта в темноте при температуре минус 18°С в защищенном от влаги месте. В течение коротких промежутков времени, например, при транспортировании, порошок может храниться при температуре окружающей среды.
Порошкообразный контрольный образец микробного коагулянта является первичным контрольным образцом; можно приготовить вторичный жидкий контрольный образец и использовать его в том случае, если гарантируется получение одинаковых результатов.
Общая молокосвертывающая активность международного порошкообразного контрольного образца микробного коагулянта (R. miehei) - это величина активности, установленная относительно первой партии международного порошкообразного контрольного образца сычужного фермента из желудка телят, который, как было определено, содержит 1000 IMCU/г (см. [6]).
Примечание - Общую молокосвертывающую активность выражают в процентах относительно среднеарифметического значения результатов испытаний.
Общую молокосвертывающую активность порошкообразного контрольного образца микробного коагулянта маркируют на стеклянных ампулах и/или заявляют в предусмотренном сертификате. Это необходимо для будущих препаратов микробных контрольных образцов, активность которых должна быть установлена относительно предыдущей партии микробного контрольного образца.
________________
________________
4 Оборудование и химическая посуда
Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, указанное ниже.
4.2 Пипетки с одной меткой, для подачи соответствующих объемов [1], класс А.
Допускается для разбавления коагулянтов использовать разбавитель (например, разбавитель Гамильтона) с такой же прецизионностью. Для подачи субстрата также можно использовать шприц или дозатор с повторяемостью 0,4%.
4.3 Мерные колбы с одной меткой, требуемой вместимости [3], класс А.
4.4 Термометр, калиброванный, градуированный от 20°С до 45°С, с точностью до ±0,1°С.
4.5 pH-метр, пределы допускаемого значения основной (абсолютной) погрешности преобразователя не более 0,01 ед. pH.
4.6 Весы аналитические, обеспечивающие точность взвешивания с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±1 мг.
4.7 Секундомер, с ценой деления не более 1 с.
4.8 Колбы или пробирки для испытания молока на свертывание соответствующей вместимости (см. 7.4).
4.9 Баня водяная с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру (32±1)°С, с отклонением от заданной температуры ±0,2°С. Баню следует оборудовать следующими приспособлениями.
4.9.1 Электродвигатель, к вращающемуся валу которого может быть присоединена колба или пробирка (4.8), способный вращаться под углом примерно 30° к поверхности воды в водяной бане.
Примечание - Частота вращения не существенна для настоящего стандарта. Пригодна частота вращения от 2 до 4 об/мин.
4.9.2 Электрическая лампа, эффективно освещающая колбу или пробирку (4.8).
Примечание - Для улучшения визуального наблюдения за процессом свертывания молока в колбе или пробирке можно использовать экран с темным фoном, помещенный в водяную баню.
5 Отбор проб
Отбор проб не включен в метод, установленный в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приводится для жидкого микробного коагулянта (6.1) в [2] (раздел 9) и для порошкообразного микробного коагулянта (6.2) в [2] (раздел 13).
В лабораторию доставляют представительную пробу, которая не была подвергнута изменению во время транспортирования или хранения.
До испытания пробы хранят в темноте при температуре от 0°С до 5°С.
6 Приготовление пробы для испытания
6.1 Жидкий микробный коагулянт
Анализируемую пробу перемешивают с образованием завихрения, избегая образования пены. До приготовления испытуемого раствора коагулянта (7.3) анализируемую пробу доводят до комнатной температуры (18°С-22°С).
Жидкий коагулянт довольно вязкий. При отборе пробы пипеткой используют рекомендуемую методику. Допускается делать точные и прецизионные разбавления, особенно для коагулянтов высокой концентрации. Это достигается с помощью взвешивания жидких проб на аналитических весах и расчета их объема в кубических сантиметрах путем деления их массы на плотность используемого коагулянта.
6.2 Порошкообразный микробный коагулянт
Анализируемую пробу тщательно перемешивают для получения однородного порошка. Перед приготовлением испытуемого раствора коагулянта (7.3) анализируемую пробу доводят до комнатной температуры (18°С-22°С).
Примечание - Порошкообразные продукты могут быстро разделяться.
Учитывают массу проб(ы) для анализа, отбираемых(ой) от пробы для испытания. Отбирают пробы для анализа массой от 3 до 5 г. Однако если требуется анализировать неоднородные пробы для испытания и получить точные результаты, необходимо увеличить массу пробы для анализа.
7 Методика
7.1 Приготовление субстрата
Оставляют полученный субстрат в темноте при комнатной температуре на 30 мин. При необходимости субстрат хранят в темноте при комнатной температуре не более 4 ч или охлажденным в течение дня приготовления.
Примечание - pH приготовленного субстрата равняется приблизительно 6,50. Значение pH не является существенным и не требует регулирования.
7.2 Приготовление раствора контрольного образца микробного коагулянта
7.2.1 Раствор контрольного образца микробного коагулянта
Порошкообразный контрольный образец микробного коагулянта (3.5) растворяют согласно следующей методике.
Чтобы избежать попадания влаги в порошок, необходимо удостовериться в том, что перед открытием стеклянная ампула с порошкообразным контрольным образцом микробного коагулянта находится при комнатной температуре (18°С-22°С).
Примечание - В настоящем стандарте и [6] используют порошкообразный контрольный образец (3.5) с активностью примерно 1000 IMCU/г и устанавливают массу порошка 2,500 г, общая молокосвертывающая активность которой составляет примерно 2500 IMCU. При поставке второй партии невозможно достичь оговоренного значения активности 1000 IMCU/г. Поэтому было решено сохранять значение 2500 IMCU и регулировать взвешиваемую массу в зависимости от общей молокосвертывающей активности порошкообразного контрольного образца. Например, если контрольный образец имеет общую активность 2200 IMCU/г, то взвешивают 1,136 г (2500/2200) порошка.
7.2.2 Рабочий раствор контрольного образца микробного коагулянта
Примечание - Ожидаемая продолжительность свертывания рабочего раствора контрольного образца микробного коагулянта составляет от 350 до 550 с.
Хранят рабочий раствор контрольного образца микробного коагулянта при температуре от 0°С до 5°С (на льду) и используют в день приготовления.
7.3 Приготовление испытуемого раствора микробного коагулянта
От приготовленной анализируемой пробы (6.1 или 6.2) отбирают соответствующую пробу для анализа - для порошка от 3 до 5 г. Разбавляют пробу для анализа буферным раствором (3.1) до получения испытуемого раствора микробного коагулянта, продолжительность свертывания которого аналогична продолжительности свертывания рабочего раствора контрольного образца микробного коагулянта (7.2.2) с допуском ±40 с. Записывают окончательный коэффициент разбавления испытуемого раствора, используемый при расчете (8.1).
7.4 Свертывание
Записывают по секундомеру продолжительность свертывания, когда впервые наблюдается появление хлопьев в пленке субстрата на стенке колбы или пробирки.
Для получения идентичных условий пробы для анализа всегда размещают в водяной бане как можно ближе к пробам контрольного образца. Для данного метода, представляющего собой сравнительный анализ, первостепенное значение имеет поддержание одной и той же температуры свертывания для проб для анализа и для проб контрольного образца. Для выполнения данного требования проверяют температуру водяной бани путем измерения температуры проб молока в различных местах бани. Если невозможно достигнуть максимально допустимого отклонения ±0,2°С (см. 4.9), то используют водяную баню иной конструкции или иной системы циркуляции воды.
7.4.2 Как можно быстрее проводят испытания по 7.4.1, замещая рабочий раствор контрольного образца микробного коагулянта (7.2.2) испытуемым раствором микробного коагулянта (7.3).
7.4.3 Проводят два параллельных определения. Рассчитывают среднее значение продолжительности свертывания для рабочего раствора контрольного образца микробного коагулянта и испытуемого раствора микробного коагулянта соответственно.
8 Расчет и выражение результатов
8.1 Расчет
d - коэффициент разбавления испытуемого раствора (7.3);
8.2 Выражение результатов
9 Прецизионность
9.1 Межлабораторное испытание
Значения, полученные в данном межлабораторном испытании, могут быть не применимы к диапазонам концентраций и матрицам, отличным от приведенных в настоящем стандарте.
При анализе порошкообразных коагулянтов значение в процентах для упомянутых ниже параметров прецизионности, повторяемости и воспроизводимости может быть немного выше из-за различий в растворимости и некоторой степени неоднородности порошков.
Межлабораторное испытание по определению прецизионности метода было выполнено с использованием специфических исходных контрольных образцов микробного коагулянта для каждого типа микробного коагулянта (R. miehei, R. pusillus и Cryphonectria parasitica соответственно).
По практическим соображениям позже было решено, что для достижения цели этого метода будет достаточно одного контрольного образца микробного коагулянта, но межлабораторные испытания с использованием только одного контрольного образца микробного коагулянта не были проведены. Однако предполагают, что прецизионность метода будет не хуже прецизионности, представленной в этом методе.
9.2 Повторяемость
9.3 Воспроизводимость
Примечание - Значения параметров прецизионности действительны, принимая во внимание широкий диапазон лабораторий. Опыт показал, что хорошо обученный персонал лабораторий способен выполнять анализ с воспроизводимостью между лабораториями 2%.
10 Протокол испытаний
Протокол испытаний должен включать, по меньшей мере, следующую информацию:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
b) используемый метод отбора проб, если известен;
c) используемый метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;
d) все подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями всех побочных обстоятельств, которые могут повлиять на результат(ы) испытания;
e) полученный(е) результат(ы) испытания;
f) в случае проверки повторяемости - окончательный полученный зарегистрированный результат.
Приложение А
(справочное)
Межлабораторное испытание
А.1 Общие положения
________________
А.2 Пробы и результаты
Межлабораторные испытания были выполнены на трех различных жидких препаратах коагулянта R. miehei (Rm, термолабильный), R. pusillus (Rp) или С. parasitica (Ср) соответственно. Каждый препарат был разделен на две части, и одна из них была разбавлена до 85% (Rm), 75% (Rp) или 65% (Ср) первоначальной концентрации. Полученные таким образом шесть проб были разделены пополам, образуя в результате 12 необозначенных параллельных проб.
Примечания
1 Препарат R. miehei был назван во время межлабораторного испытания Mucor miehei и обозначен Mm.
2 Препарат С. parasitica был назван во время межлабораторного испытания Endothia parasitica и обозначен Ер.
Межлабораторные испытания были выполнены с использованием контрольного образца для каждого из трех типов микробного коагулянта, тогда как в настоящем стандарте используется только один контрольный образец. Это дает лишь незначительное расхождение в результатах и, что наиболее весомо, все лаборатории использовали один и тот же метод и контрольный образец.
________________
Таблица А.1 - Результаты межлабораторных испытаний
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Проба N | Коагулянт | Среднее IMCU/ см | , % | r | , % | , % | R | , % | Выбросы |
8/10 | Rm 100% | 208,6 | 3,1 | 17,9 | 8,6 | 3,6 | 20,9 | 10,0 | - |
1/5 | Rm 85% | 178,7 | 1,4 | 7,2 | 4,0 | 4,0 | 20,1 | 11,3 | 1 (Кохрен и Граббс) |
2/4 | Rp 100% | 422,3 | 1,9 | 21,9 | 5,2 | 8,2 | 97,3 | 23,0 | - |
9/12 | Rp 75% | 312,8 | 2,3 | 20,0 | 6,4 | 9,2 | 80,8 | 25,8 | 1 Кохрен |
7/11 | Cp 100% | 232,1 | 1,5 | 9,8 | 4,2 | 5,3 | 34,6 | 14,9 | 1 Кохрен |
3/6 | Cp 65% | 154,9 | 1,7 | 7,4 | 4,8 | 3,2 | 13,9 | 9,0 | 1 Граббс |
Среднее значение | - | - | 2,0 | - | 5,5 | 5,6 | - | 15,7 | - |
Библиография
|
|
|
[1]
| ISO 648 | Laboratory glassware - Single-volume pipettes |
[2]
| ISO 707 | IDF 50:2008 | Milk and milk products - Guidance on sampling |
[3]
| ISO 1042 | Laboratory glassware - One-mark volumetric flasks |
[4]
| ISO 5725-1:1994 | Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions |
[5]
| ISO 5725-2:1994* | Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method |
________________ * Заменен на ISO 5725-2:2019.
| ||
[6]
| ISO 11815 | lDF 157 | Milk - Determination of total milk-clotting activity of bovine rennets |
[7]
| ISO 15163 | lDF 110 | Milk and milk products - Calf rennet and adult bovine rennet - Determination by chromatography of chymosin and bovine pepsin contents |
[8]
| International Collaborative Study on Microbial Coagulants - Determination of total milk-clotting activity. Bull. IDF | |
|
|
УДК 637.1:006.354 | МКС 07.100.30 67.100.10 |
Ключевые слова: молоко и молочные продукты, микробные коагулянты, контрольный образец микробного коагулянта, определение общей молокосвертывающей активности, субстрат, свертывание, жидкий микробный коагулянт, порошкообразный микробный коагулянт | |