ГОСТ 34461-2018 Продукция соковая. Определение содержания гесперидина и нарингина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
ГОСТ 34461-2018
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ
Определение содержания гесперидина и нарингина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Juice products. Determination of hesperidin and naringin content by HPLC method
МКС 67.080.01
Дата введения 2019-11-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии Общества с ограниченной ответственностью "Люмэкс-маркетинг" (ООО "Люмэкс-маркетинг")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2018 г. N 111 -П)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения
| AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь
| BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ
| Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия
| KG | Кыргызстандарт |
Россия
| RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
(Поправка. ИУС N 4-2020).
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2018 г. N 755-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34461-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 ноября 2019 г.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2020 год
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на соковую продукцию (соки, концентрированные соки, нектары, сокосодержащие напитки), произведенную на основе или с добавлением цитрусовых фруктов (апельсина, грейпфрута, мандарина, лимона и лайма), и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения содержания (массовой концентрации и массовой доли) гесперидина и нарингина.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
_______________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.
ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ ISO 3696-2013** Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля
_______________
** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 5712-78 Реактивы. Аммоний щавелевокислый 1-водный. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-1-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
_______________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002.
ГОСТ ИСО 5725-6-2003** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
_______________
** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ 20289-74 Реактивы. Диметилформамид. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод основан на экстракции гесперидина и нарингина из проб соковой продукции смесью N,N-диметилформамида и водного раствора щавелевокислого аммония с последующим измерением массовой концентрации указанных соединений в экстракте методом ВЭЖХ с фотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, посуда и материалы
4.1 Хроматограф жидкостный со спектрофотометрическим детектором, обеспечивающим проведение измерений при 287 нм или диодно-матричным детектором в диапазоне длин волн от 190 до 600 нм, снабженный программным обеспечением для сбора и обработки данных, со следующими метрологическими характеристиками:
- относительное среднеквадратическое отклонение выходного сигнала по высоте и площади пика - не более 3%;
- относительное среднеквадратическое отклонение выходного сигнала по времени удерживания - не более 1,0%.
Рекомендуется использование термостата колонок.
4.2 Колонка хроматографическая***, заполненная обращенно-фазовым сорбентом С18, обеспечивающая число теоретических тарелок по пикам гесперидина и нарингина не менее 3000.
_______________
*** Например, хроматографические колонки Nucleosil 100-5C18 и Agilent ZORBAX SB-C18. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой указанных продуктов. Допускается использование аналогичных хроматографических колонок, в том числе с иными типоразмерами при соблюдении указанных требований.
4.3 Колонка защитная (предколонка), заполненная обращенно-фазовым сорбентом.
4.4 Весы неавтоматического действия специального класса точности с пределом допускаемой абсолютной погрешности измерений ±0,0001 г.
4.5 Весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1, пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения ±0,001 г.
4.6 Пипетки градуированные 2-1-2-1, 2-1-2-2, 2-1-2-5 и 2-1-2-10 по ГОСТ 29227.
Примечание - Допускается использование дозаторов с метрологическими характеристиками, соответствующими ГОСТ 28311.
4.7 Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.
4.10 Шкаф сушильный с диапазоном рабочих температур от 50°С до 200°С.
4.11 Насос лабораторный вакуумный, мембранный или водоструйный по ГОСТ 25336, обеспечивающий разрежение от 2,5 до 10 кПа.
4.12 Баня водяная с регулятором температуры, обеспечивающая поддержание температуры в диапазоне от 40°С до 100°С.
4.14 Колбы плоскодонные П-1-1000-29/32 или конические Кн-1-250-29/32, Кн-1-1000-29/32 по ГОСТ 25336.
4.18 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0,45 мкм.
4.19 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696* 1-й степени чистоты (далее - вода для анализа).
4.20 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии (оптическая плотность при 200 нм относительно дистиллированной воды должна быть не более 0,05 единиц оптической плотности), ос. ч.
4.21 N,N-Диметилформамид по ГОСТ 20289, х. ч.
4.22 Аммоний щавелевокислый 1-водный по ГОСТ 5712, х. ч.
4.23 Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.
4.24 Кислота серная по ГОСТ 4204, х. ч. или ч. д. а.
4.25 Гесперидин* с массовой долей основного вещества не менее 95%.
_______________
* CAS 520-26-3 (CAS - код соединения в американской реферативной системе по химии (Chemical Abstracts).
4.26 Нарингин** с массовой долей основного вещества не менее 95%.
_______________
** CAS 10236-47-2.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования, посуды, материалов с техническими характеристиками не ниже вышеуказанных и химических реактивов аналогичной квалификации.
5 Отбор проб
Отбор проб соковой продукции - по ГОСТ 26313.
6 Условия проведения измерений
При подготовке к проведению измерений и проведении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:
|
|
- температура окружающего воздуха | (20±5)°С; |
|
|
- атмосферное давление | от 84,0 до 106,7 кПа; |
|
|
- влажность воздуха | не более 80%. |
В лабораторных помещениях не должно быть загрязненности воздуха рабочей зоны пылью и агрессивными веществами, должны отсутствовать вибрация или другие факторы, влияющие на результаты измерений.
7 Подготовка к проведению измерений
7.1 Подготовка стеклянной посуды
Посуду для приготовления и хранения подвижной фазы моют только серной кислотой (см. 4.24) без применения других моющих средств, тщательно промывают водопроводной водой и ополаскивают водой для анализа.
Остальную стеклянную посуду моют горячей водой с моющим средством, тщательно ополаскивают водой для анализа и сушат в сушильном шкафу при температуре 105°С.
7.2 Приготовление вспомогательных растворов
Срок хранения раствора в стеклянном сосуде при температуре (4±2)°С - 3 мес.
7.2.2 Приготовление подвижной фазы
Срок хранения подвижной фазы в стеклянном сосуде при температуре (4±2)°С - 14 сут.
Перед использованием подвижную фазу дегазируют и фильтруют в соответствии с указаниями изготовителя хроматографа и (или) колонки.
Примечания
1 В зависимости от типа сорбента и типоразмера применяемых колонок допускается варьирование состава подвижной фазы с целью разделения пиков гесперидина и нарингина и их отделения от пиков компонентов матрицы пробы.
2 Допускается приготовление иных объемов подвижной фазы в зависимости от потребности.
Срок хранения раствора в стеклянном сосуде при температуре (20±5)°С - 3 мес.
Примечание - Допускается изменять объем приготавливаемого раствора в зависимости от потребности.
7.3 Приготовление градуировочных и контрольных растворов
7.3.1 Общие положения
Растворы гесперидина и нарингина следует хранить в темном месте при температуре от 2°С до 6°С в герметичной посуде, исключающей возможность испарения растворителя и контакт раствора с материалами иными, чем стекло. Растворы каждой концентрации готовят по потребности.
Срок хранения раствора в условиях по 7.3.1 - 4 сут.
Срок хранения раствора в условиях по 7.3.1 - 4 сут.
1000 - коэффициент согласования размерности единиц объема;
100 - коэффициент для перевода массовой доли основного вещества из процентов в безразмерную величину.
7.3.5 Приготовление градуировочных растворов
7.3.5.1 Приготовление градуировочного раствора N 1
Раствор используют в день приготовления.
7.3.5.2 Приготовление градуировочных растворов N 2-5
Таблица 1
|
|
|
|
Номер раствора | Объем аликвоты градуировочного раствора N 1, см | Объем подвижной фазы, приготовленной по 7.2.2, см | Массовая концентрация (номинальное значение) гесперидина (нарингина), мг/дм |
2 | 4 | 6 | 40 |
3 | 2 | 8 | 20 |
4 | 1 | 9 | 10 |
5* | 0,5 | 9,5 | 5 |
* Раствор N 5 используют только при установлении градуировочной характеристики для нарингина.
| |||
Растворы используют в день приготовления.
7.4 Подготовка хроматографа к работе
Включение и подготовку хроматографа к работе, вывод его на рабочий режим, включая кондиционирование колонки, а также промывку гидравлической линии хроматографа и выключение хроматографа по окончании работы осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.
7.5 Условия хроматографического анализа
При проведении хроматографического анализа создают и поддерживают следующие условия:
- температура колонки - 25°С (при наличии термостата колонок);
- длина волны детектирования при использовании спектрофотометрического детектора - 287 нм;
- режим элюирования - изократический, подвижная фаза - по 7.2.2;
7.6 Градуировка хроматографа
Для градуировки хроматографа регистрируют по две хроматограммы градуировочных растворов N 1-5 (см. 7.3.5) и, используя программное обеспечение к хроматографу, находят площади пиков компонентов, а затем устанавливают градуировочную характеристику для каждого компонента в виде функциональной зависимости площади пика от массовой концентрации компонента.
Градуировку проводят при освоении метода и далее - при смене оборудования, колонок, условий хроматографического анализа, при значительном изменении параметров хроматографического процесса (времени удерживания, эффективности, разрешения и асимметрии пиков), после ремонта хроматографа или при неудовлетворительных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.7).
Примечание - После длительного перерыва в работе рекомендуется проверить стабильность градуировочной характеристики в нескольких точках (не менее двух) диапазона.
7.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят ежедневно перед началом работы, используя заново приготовленный градуировочный раствор N 2.
Регистрируют не менее двух хроматограмм этого раствора, идентифицируют пики компонентов, внося при необходимости коррекцию времен удерживания и принимая во внимание параметры хроматографического процесса (эффективность колонки, время удерживания пиков, разрешение пиков, асимметрию пиков), и вычисляют массовую концентрацию гесперидина и нарингина с использованием действующей градуировочной характеристики.
Проверяют сходимость времен удерживания
Проверяют сходимость значений массовой концентрации компонентов
Градуировочная характеристика признается стабильной, если выполняется условие
Если условие (6) не выполняется, то процедуру контроля повторяют и при получении неудовлетворительного результата градуировку хроматографа проводят заново.
8 Проведение измерений
8.1 Подготовка проб к измерениям
8.1.1 Измерения проводят два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1.
Примечание - Аликвоты для параллельных определений должны быть отобраны одна за другой без задержки.
Нагревают в течение 10 мин на водяной бане при температуре от 90°С до 100°С и охлаждают до комнатной температуры.
Примечание - Допускается замена центрифугирования фильтрованием через мембранные фильтры с диаметром пор 0,20 или 0,45 мкм. Не допускается использование мембранных фильтров из полисульфона, так как они не устойчивы к ацетонитрилу, а также на основе политетрафторэтилена (PTFE) и его аналогов, поскольку эти материалы адсорбируют нарингин и гесперидин.
8.2 Проведение хроматографического анализа
8.2.1 Подготовленную по 8.1 пробу дозируют в хроматограф и регистрируют две хроматограммы в тех же условиях, в которых были зарегистрированы хроматограммы градуировочных растворов (см. 7.5). На полученных хроматограммах идентифицируют пики определяемых компонентов, установив ширину окна идентификации 5%, используя значения площадей пиков. Вычисляют значения массовой концентрации идентифицированных компонентов при помощи градуировочных характеристик, установленных по 7.6.
8.2.2 Проверяют выполнение условия (5). Если это условие выполняется, то в качестве значения массовой концентрации компонента в подготовленной по 8.1 пробе принимают среднеарифметическое полученных значений. Если условие не выполняется, находят и устраняют причины нестабильности, после чего ввод подготовленной пробы повторяют.
8.2.4 Примеры хроматограмм приведены в приложении А.
9 Обработка и оформление результатов измерений
Результат измерений округляют до целого числа.
|
|
|
|
|
Наименование показателя | Диапазон измерений | Границы относительной погрешности  , % | Предел повторяемости (допускаемое относительное расхождение результатов двух параллельных измерений) , % | Предел воспроизводимости (допускаемое относительное расхождение результатов двух единичных измерений)  , % |
Гесперидин | ||||
Массовая концентрация, мг/дм | От 100 до 1000 включ. | 13 | 8 | 18 |
Массовая доля, млн | От 500 до 5000 включ. |
|
|
|
Нарингин | ||||
Массовая концентрация, мг/дм | От 30 до 1000 включ. | 10 | 7 | 13 |
Массовая доля, млн | От 150 до 5000 включ. |
|
|
|
Результат измерения округляют до целого числа.
При невыполнении условий (9) или (11) получают еще два результата измерений в соответствии с разделом 8 и затем устанавливают результат измерений в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).
9.3 Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний согласно ГОСТ ИСО/МЭК 17025 с указанием настоящего стандарта. В протоколе испытаний результат измерений представляют в следующем виде (с указанием компонента)
9.5 Результаты измерений, полученные в двух лабораториях, признают совместимыми при выполнении условий
или
Значение критической разности вычисляют по формуле
Если условия (16) и (17) не выполняются, то лабораториям рекомендуется провести процедуры, предусмотренные ГОСТ 5725-6 (пункты 5.3.3 и 5.3.4).
10 Контроль качества результатов измерений
Контроль качества результатов измерений осуществляют, используя методы контроля стабильности среднеквадратического отклонения повторяемости и контроля стабильности среднеквадратического отклонения промежуточной прецизионности с применением контрольных карт Шухарта по ГОСТ ИСО 5725-6 (пункты 6.2.2, 6.2.3).
Периодичность контроля и процедуры контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории в соответствии с ГОСТ ИСО/МЭК 17025 (пункт 4.2).
11 Требования безопасности
При выполнении измерений следует соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности - по ГОСТ 12.1.004.
Требования электробезопасности при работе с приборами - по ГОСТ 12.1.019 и в соответствии с руководством по эксплуатации используемого оборудования.
12 Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное образование, опыт работы в химической лаборатории, изучившие руководство по эксплуатации жидкостного хроматографа и освоившие метод. Первое применение метода в лаборатории должно проводиться под руководством специалиста, владеющего теорией ВЭЖХ и имеющего практические навыки в этой области.
Приложение А
(справочное)
Примеры хроматограмм
А.1 Примеры хроматограмм, полученных на колонке Alltima C18 (внутренний диаметр 2,1 мм, длина 120 мм, размер частиц 5 мкм), приведены на рисунках А.1, А.2.
|
 |
1 - пик нарингина; 2 - пик гесперидина
Рисунок А.1 - Хроматограмма градуировочного раствора N 2 (см. 7.3.5)
|
 |
1 - пик нарингина; 2 - пик гесперидина
Рисунок А.2 - Хроматограмма пробы соковой продукции - нектара из соков цитрусовых фруктов (апельсина, лимона, лайма), подготовленной по 8.1.2
А.2 Пример хроматограммы, подготовленной по 8.1.2 пробы соковой продукции, полученной на колонке Agilent ZORBAX SB-C18 (внутренний диаметр 4,6 мм, длина 250 мм, размер частиц 5 мкм), приведен на рисунке А.3.
|
 |
1 - пик нарингина, 2 - пик гесперидина
Рисунок А.3 - Хроматограмма подготовленной пробы сокосодержащего напитка из апельсинов и грейпфрутов
|
|
|
|
УДК 543.544.52:664.863:006.35
|
| МКС 67.080.01 |
|
Ключевые слова: продукция соковая, гесперидин, нарингин, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, массовая концентрация, массовая доля | |||