ГОСТ 9.085-78 Единая система защиты от коррозии и старения (ЕСЗКС). Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость.

     ГОСТ 9.085-78

Группа Т99

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

Единая система защиты от коррозии и старения

ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ

Методы испытаний на биостойкость

Single corrosion and ageing protection system.

Cooling lubricant. Bioresistance test methods

МКС 19.040

         75.100     

ОКСТУ 0009

Дата введения 1979-07-01

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79

Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)

ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)

Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

 1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

1.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.

1.2. Отбор проб

1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.

1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3. Проб должно быть не менее трех.

1.2.4. Виды бактерий

1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:

Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;

Mycobacterium phlei Lehman and Neum;

Pseudomonas aeruginosa Migyla;

Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;

Staphylococcus aureus Rosenbach.

Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.

1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.

1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:

термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;

электроплитка с закрытой спиралью*;

потенциометр по ГОСТ 9245-79;

горелки газовые*;

цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;

чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;

груша резиновая*;

доска для сушки посуды;

аппарат для встряхивания колб и пробирок;

стандарты мутности;

рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;

ножницы, пинцеты, скальпели*;

штативы лабораторные*;

бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;

агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;

спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;

кислота соляная по ГОСТ 3118-77;

кислота серная по ГОСТ 4204-77;

калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;

натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;

(Измененная редакция, Изм. N 1).

__________________

* По документации, утвержденной в установленном порядке.

1.4. Подготовка к испытаниям

1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.

1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.

1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.

Таблица 1

Наименование реактивов	Среда
	1	2	3	4	5	6
	МПА	Агар индикаторный	Сорокина	Сусло-агар	Чапека-Докса с агаром	Чапека-Докса с агаром без сахарозы
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г	-	-	0,5	-	0,7	0,7
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г	-	-	1,0	-	0,3	0,3
Магний сернокислый, г	-	-	0,2	-	0,5	0,5
Натрий азотнокислый, г	-	-	-	-	2,0	2,0
Натрий сернокислый, г	-	0,5	-	-	-	-
Калий хлористый, г	-	-	-	-	0,5	0,5
Железо сернокислое, г	-	-	0,01	-	0,01	0,01
Железо лимоннокислое, г	-	0,5	-	-	-	-
Аммоний хлористый, г	-	-	0,1	-	-	-
Спирт этиловый ректификованный, г	-	-	5,0	-	-	-
Сахароза, г	-	-	-	-	30,0	-
Пептон бактериологический, г	-	10,0	-	-	-	-
Агар микробиологический, г	20,0	12,0	-	20,0	20,0	Выщело- ченный 20,0
Мясо-пептонный бульон, см	До 1000	-	-	-	-	-
Сусло пивное, см	-	-	-	До 1000	-	-
Вода дистиллированная, см	-	1000	До 1000	-	До 1000	До 1000

1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.

1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см

водопроводной воды.

1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см

.

1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 см

) в стерильную пробирку.

1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.

1.5. Проведение испытаний

1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см

, содержащую 200-300 см

среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.

Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см

на 100 см

среды.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см

в чашки Петри.

1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см

испытуемой СОЖ.

1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.

1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.

1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.

1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.

1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.2.

Таблица 2

1.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.

Количество микроорганизмов не должно превышать 5000-7000 кл/м

воздуха.

 2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ

2.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.

Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.

2.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.

2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.

Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas, Achromobacter и др.

2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п.1.3 со следующим дополнением:

аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;

натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171-76;

железо лимоннокислое, кристаллическое, ч.д.а.*;

пептон бактериологический*.

__________________

* По документации, утвержденной в установленном порядке.

2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.1-1.4.4.

2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.

Для выращивания культуры используют среду 3.

2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1-0,2 см

переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см

водопроводной воды.

2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.

Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см

.

2.4.4. Срок хранения суспензии-не более 1 ч.

2.5. Проведение испытаний

2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8-9 см

в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5-1 см

суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.

2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.

2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 см

зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см

предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С - 45  °С средой 2.

2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см

бактериальной суспензии и 10 см

среды 2.

2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2)  °С.

2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.

2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.

2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.

2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.3.

Таблица 3

2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2.7. Требования безопасности - по п.1.7.

 3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

3.1. Сущность метода

Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.

3.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.

3.2.1. Виды грибов

Aspergillus niger van Thieghem;

Chaetomium globosum Kunze;

Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;

Cladosporium resinae Albida;

Penicillium chrysogenum Thom;

Penicillium ochro-cloron Biorge;

Trichoderma koningii Oudemans;

Trichoderma viride Pers. ex. Fr;

Torula convoluta Harz;

Cephalosporium acremonium Corda.

3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.

3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.

3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.

3.4. Подготовка к испытаниям

3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.

3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.

3.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.

3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.3.2.1.

3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.

3.5. Проведение испытаний

3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 см

, содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.

3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки - 2 см

на 100 см

среды.

3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полых металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см

испытательной СОЖ.

3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. N 1).

3.5.6. Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.

3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.

3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.

3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.4.

Таблица 4

3.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.048-89.

Текст документа сверен по:

официальное издание

Смазочные материалы, индустриальные

масла и родственные продукты.

Методы анализа: Сб. стандартов. -

М.: Стандартинформ, 2006