ГОСТ 28566-90 Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества энтерококков (СТ СЭВ 6646-89).
ГОСТ 28566-90
(СТ СЭВ 6646-89)
Группа Н09
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Метод выявления и определения количества энтерококков
Food products. Method for detection and determination of count Enterococci
ОКСТУ 9109
Срок действия с 01.07.91
до 01.07.96*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу N 5-94 Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии и сертификации
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности
РАЗРАБОТЧИКИ
В.И.Рогачев, д-р техн. наук; Б.И.Голод, канд. биол. наук; Р.А.Волкова
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 29.05.90 N 1332
3. Срок первой проверки - 1996 г.
Периодичность проверки - 5 лет
4. Стандарт соответствует стандарту СЭВ 6646-89
5. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
6. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта |
2 | |
2; 3.1.11; 3.1.12; 3.2.1; 3.2.8; 3.2.9 | |
ГОСТ 10444.3-85 | 4.9.1; 4.9.2 |
2 | |
2 | |
1 | |
1; 4.1 | |
ГОСТ 26670-85 | 3.1.4; 3.1.5; 4.2; 5.4 |
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления и количественного определения энтерококков (Streptococcus faecalis, Streptococcus faecium, Streptococcus avium, Streptococcus gallinarum).
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор проб - по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию - по ГОСТ 26669.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов)*;
весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта)*;
микроскоп световой биологический с увеличением в 900-1000 раз;
стерилизатор горячим воздухом;
термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;
холодильник бытовой;
водорода перекись по ГОСТ 10929;
желчь крупного рогатого скота или сухая желчь;
железо (III) - аммония гидроцитрат;
ферментативный гидролизат казеина;
полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;
эскулин;
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Раствор с объемной долей перекиси водорода 10%:
3.1.11. Молоко обезжиренное готовят по ГОСТ 10444.1.
3.1.12. Растворы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Азидно-глюкозный бульон
3.2.3. Солевой бульон
Основа среды - глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1) по п.3.2.2.
Питательную среду можно готовить за одну операцию, тогда в процессе приготовления основы среды добавляют 65,0 г натрия хлорида. Среду хранят при (4±2) °С не более месяца.
3.2.4. 40%-ный желчный бульон
Среду хранят при (4±2) °С не более 3 мес.
3.2.5. Селективный агар по Сланецу и Бертли:
3.2.6. Канамицин азидно-эскулиновый агар (КАЭ-агар):
.
3.2.8. Щелочная полимиксиновая среда:
и.
3.2.9. Молочно-ингибиторная среда (МИС):
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
При выявлении энтерококков из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений так, чтобы можно было определить минимальное количество продукта, содержащее энтерококки, или высевают навеску продукта, которая указана в нормативно-технической документации на этот продукт.
4.3. Если необходимо выявить энтерококки в навеске продукта определенной массы или объема, то навеску продукта или его разведение высевают непосредственно в жидкую питательную среду по п.3.2.1 или 3.2.8.
4.4. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч, через 24 ч проводят предварительный учет результатов, через 48 ч - окончательный.
4.5. После инкубирования посевов, проведенных по п.4.3, учитывают пробирки с признаками роста микроорганизмов: помутнением среды и изменением ее окраски в желтый цвет. Из пробирок с признаками роста, предположительно энтерококков, делают пересевы на поверхность агаризованной среды п.3.2.5 или 3.2.6, или 3.2.9 таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний, посевы на этих средах инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч.
4.6. После инкубирования посевов, проведенных по п.4.2, учитывают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 характерных для энтерококков колоний:
на питательной среде по п.3.2.5 колонии энтерококков красно-розовые или карминовые с коричневым оттенком диаметром до 2 мм;
на питательной среде по п.3.2.6 колонии энтерококков оливково-зеленые до темно-коричнево-черных с равномерной окраской поля;
на питательной среде по п.3.2.9:
1) с 2- 3-, 5-ТТХ-колонии вишнево-красные с зоной протеолиза или бесцветные с розовым центром;
2) с теллуритом калия - колонии окрашены в черный цвет.
4.7. Посевы по п.4.5 через 24-48 ч инкубирования просматривают и отмечают рост колоний, характерных для энтерококков по п.4.6.
4.8. Для дальнейшего подтверждения принадлежности характерных колоний к энтерококкам отбирают не менее пяти колоний из посевов по пп.4.6 и 4.7 и пересевают их на чашки Петри с агаризованной средой по п.3.2.7 таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч.
4.9. Подтверждение принадлежности характерных колоний к энтерококкам
4.9.1. Из колоний, выросших по п.4.8, готовят препараты, окрашивают по Граму по ГОСТ 10444.3.
Энтерококкии - грамположительные кокки, расположенные парами, короткими или длинными цепочками.
4.9.2. У колоний определяют наличие каталазы по ГОСТ 10444.3. Энтерококки каталазу не образуют.
4.10. При более углубленном анализе и в целях эпидемиологического обследования проводят дальнейшее подтверждение характерных колоний.
4.10.1. Для определения возможности роста при температуре (45±1) °С культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1) по п.3.2.2. Посевы инкубируют при (45±1) °С 48-72 ч. Энтерококки вызывают помутнение среды.
4.10.3. Для определения возможности роста в питательной среде с рН 9,6 культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом и рН 9,6 по п.3.2.2 и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.
4.10.4. Для постановки теста на терморезистентность культуры высевают в глюкозо-триптонный бульон с дрожжевым экстрактом с рН (7,2±0,1), пробирки выдерживают при (60±1) °С в течение 30 мин и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.
4.10.5. Для определения возможности роста в среде с 40%-тами желчи культуры высевают в 40%-ный желчный бульон по п.3.2.4 и инкубируют в течение 24-48 ч при (37±1) °С. Энтерококки вызывают помутнение среды.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
5.2. Если при изучении культуральных и морфологических свойств микроорганизмов обнаружены грамположительные, не образующие каталазу кокки, то дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относят к энтерококкам.
5.3. Если при подтверждении характерных колоний в 80% случаев, т.е. не менее чем в 4 из 5 колоний, подтвержден рост энтерококков, то считают, что все колонии, выросшие на чашке по п.4.6, принадлежат к энтерококкам.
В остальных случаях количество энтерококков определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний, к общему количеству колоний, взятых для подтверждения.
При посеве навески продукта или разведения продукта на жидкие среды, пробирки считают положительными, если при последующем пересеве на агаризованные среды и подтверждении характерных колоний хотя бы в одной характерной колонии обнаружены энтерококки.
5.4. Результаты записывают следующим образом
5.4.2. Результаты выявления энтерококков в определенной навеске записывают: энтерококки обнаружены или не обнаружены (при этом указывается навеска продукта).
Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1990