Методические указания по методам контроля МУК 4.1.1228-03 Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде методом газожидкостной хроматографии.
МУК 4.1.1228-03
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств спироксамина в воде, почве, зерне,
зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде
методом газожидкостной хроматографии
Дата введения 2003-07-01
УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
1. Вводная часть
Название действующего вещества: спироксамин (ИСО).
Торговое название: Фалькон.
Фирма-производитель: Байер, Германия.
8-третбутил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-ил-метил(этил)(пропил)-амин (IUРАС).
Структурная формула:
Молекулярная масса: 297,5.
Существует в виде смеси диастереоизомеров 1:2=49-56% : 51-44%. Ниже приведены (если не указано особо) свойства для смеси диастереоизомеров.
Вязкая жидкость бледно желтого цвета без запаха. Температура кипения 120 °С при 6,7 Pа. Давление паров 9,7 mРа (20 °С) и 17 mРа (25 °С) для изомеров 1 и 2, соответственно.
Хорошо растворим в органических растворителях. Растворимость при 20 °С в ацетоне, ацетонитриле, дихлорметане, гексане, пропаноле, толуоле более 200 г/л. Растворимость в воде при 20 °С (г/л): при рН 3 - >200; при рН 7 - 0,470 (изомер 1) и 0,340 (изомер 2); при рН 9 - 0,014 (изомер 1) и 0,010 (изомер 2).
Спироксамин не разлагается в течение 30 дней при 25 °С в водных растворах с диапазоном рН от 5 до 9. Период полураспада изомера 1 и изомера 2 в водных растворах с рН 2,1 при 37 °С 6,1 и 15,4 ч, соответственно. Изомер 1 разрушается при повышенных температурах. Изомер 2 термостабилен.
Значения рК составляют 6,9 как для изомера 1, так и для изомера 2.
Гигиенические нормативы для спироксамина:
ПДК в почве (мг/кг) - 0,4
МДУ в зерне хлебных злаков (мг/кг) - 0,2
ВМДУ в винограде - 0,1
Область применения: Фалькон, КЭ - комбинированный фунгицид широкого спектра действия на посевах зерновых культур и виноградниках, содержит спироксамина 250 мг/л + тебуконазола 167 г/л + триадименола 43 г/л.
2. Методика определения остаточных количеств спироксамина в воде,
почве, зерне, зеленой массе и соломе злаковых культур, винограде
методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении спироксамина из проб растворителем с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с окисью алюминия или флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.
2.1.2. Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб, сочетанием селективного детектора и условий хроматографирования. В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1-2.
Таблица 1
Метрологические параметры метода
Анализируемый объект | Предел обнару- жения, мг/кг | Диапазон опреде- ляемых концент- раций, мг/кг | Среднее значение опреде- ления, % (  24) | Относи- тельное стандартное отклонение, %, ± | Доверительный интервал среднего при 5 и  0,95, %, ± |
Вода | 0,002 | 0,002-0,02 | 86 | 6,2 | 5,4 |
Почва | 0,2 | 0,2-2 | 85 | 9,1 | 7,9 |
Зерно | 0,1 | 0,1-1 | 80 | 9,8 | 8,6 |
Солома и зеленая масса растений | 0,1 | 0,1-0,2 | 75 | 11,5 | 10,0 |
Виноград | 0,05 | 0,05-0,5 | 85 - ягоды | 5,2 | 4,7 |
|
|
| 88 - сок | 4,8 | 4,4 |
Таблица 2
Среднее значение определения и доверительный интервал среднего для различных
Анализируемый объект | Внесено спироксамина, мг/кг (л) | Определено спироксамина, мг/кг (л) | Доверительный интервал, ± | Средняя полнота определения, % |
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Вода | 0,002 | 0,00174 | 0,00011 | 87 |
| 0,004 | 0,0034 | 0,00018 | 85 |
| 0,008 | 0,00695 | 0,00040 | 87 |
| 0,02 | 0,0172 | 0,00068 | 86 |
Почва | 0,2 | 0,165 | 0,0145 | 83 |
| 0,4 | 0,325 | 0,0275 | 82 |
| 1 | 0,92 | 0,0465 | 92 |
| 2 | 1,71 | 0,132 | 85 |
Зерно | 0,1 | 0,071 | 0,013 | 71 |
| 0,25 | 0,193 | 0,0185 | 77 |
| 0,5 | 0,42 | 0,027 | 84 |
| 0,1 | 0,89 | 0,049 | 89 |
Зеленая масса растений и солома | 0,1 | 0,072 | 0,0135 | 72 |
| 0,25 | 0,178 | 0,019 | 71 |
| 0,5 | 0,38 | 0,035 | 76 |
| 1,0 | 0,81 | 0,075 | 81 |
Виноград - ягоды | 0,05 | 0,0438 | 0,002 | 87,5 |
| 0,1 | 0,0915 | 0,003 | 91,5 |
| 0,2 | 0,0162 | 0,008 | 80,8 |
| 0,5 | 0,4085 | 0,010 | 81,7 |
Виноград - сок | 0,05 | 0,0423 | 0,003 | 85,5 |
| 0,1 | 0,0870 | 0,002 | 87,0 |
| 0,2 | 0,1738 | 0,008 | 86,9 |
| 0,5 | 0,4595 | 0,009 | 91,9 |
Минимально детектируемое количество спироксамина для хроматографа "Цвет" серии 500 с термоионным детектором - 2,5 нг, для импортных хроматографов (HP 5840, PYE UNICAM 204) - 0,5 нг.
Граница суммарной погрешности измерения - 12%.
Линейный диапазон детектирования ("Цвет-550") - 2,5-25 нг, для импортных хроматографов - 1-20 нг.
2.2. Реактивы и материалы
Спироксамин (KWG 4168) аналитический стандарт, 99,0% (Байер АГ, Германия) |
|
Алюминия оксид II степени активности по Брокману | ТУ 6-09-3916-75 |
Флорисил для хроматографии (0,150-0,250 мм), фирмы Merck, имп. |
|
Азот газообразный высокой чистоты | ТУ 6-16-40-14-88 |
Гелий очищенный марки Б в баллонах с редуктором | МРТУ 6-09-374-86 |
Ацетон, хч | ТУ 6-09-3513-82 |
н-Гексан, ч, свежеперегнанный | ТУ 6-09-3375-78 |
Натрий серно-кислый безводный, чда, свежепрокаленный | |
Гидроксид натрия, хч, 0,25 М и 1 М водные растворы | |
Хлористый метилен, хч | ТУ 6-09-2662-77 |
Вода дистиллированная | |
Насадки для колонок: 5% SP-2100 на хромосорбе W (0,20-0,25 мм), имп. |
|
5% SE-30 на хроматоне N-Super (0,16-0,20 мм), имп. |
|
Неподвижная жидкая фаза OV-17, Супелко Инк, США |
|
Неподвижная жидкая фаза PS-400, Alltech Associates, Inc., США |
|
Неподвижная жидкая фаза SE-30, Супелко Инк, США |
|
Хромосорб 750 зернением 100-120 меш, Serva, Германия |
|
Хроматон N-AW DMCS зернением 0,2-0,25 мм, Хемапол, Чехия |
|
Концентрирующие патроны Диапак С16 (0,6 г) |
|
Калий фосфорно-кислый, однозамещенный и 0,1 М водный раствор | |
Раствор ацетон - 0,1 М KH РО  в соотношении 1:1 по объему |
|
Спирт этиловый | |
| |
Хлороформ, чда | ГОСТ 20015-74 |
Этилацетат, хч | |
Бумага фильтровальная | ТУ 6.091678-86 |
Универсальная индикаторная бумага или рН-метр | ГОСТ 13681-93 |
Стекловата |
|
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Газовый хроматограф Цвет 550 или аналогичный с термоионным детектором и стеклянной насадочной колонкой, длиной 1,8-2 м, внутренним диаметром 2-3 мм |
|
Аппарат для встряхивания | ТУ 6-921-1084-73 |
Баня водяная | ТУ 64-1-2850-76 |
Ванна ультразвуковая "Серьга" | ТУ 3.836.008 |
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные | ГОСТ 34104-80 |
Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные | ГОСТ 24104-80 |
Воронки лабораторные В-75-110 | |
Воронки делительные на 250 и 500 мл | ГОСТ 8613-75 |
Испаритель вакуумный ротационный ИР-1М или аналогичный | ТУ 25-11917-74 |
Колбы круглодонные, вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл | |
Колбы плоскодонные, вместимостью 250 и 500 мл | |
Колбы мерные, вместимостью 25, 50, 100 мл | |
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ | ТУ 1-01-0593-79 |
Микропипетки | |
Микрошприц МШ-10, МШ-10М | ТУ 2-833-106 |
Насос стеклянный вакуумный водоструйный | ГОСТ 10696-75 |
Палочки стеклянные | |
рН-метр | ГОСТ 13681-93 |
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл | ГОСТ 22292-74 |
Стаканы химические | |
Хроматографические стеклянные колонки, длиной 300 и 350 мм, диаметром 12 мм |
|
Цилиндры мерные, вместимостью 10, 100 и 1000 мл | ГОСТ 1774-74 |
Пробирки с притертыми пробками на 10, 20 мл | |
Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами |
|
2.4. Подготовка к определению
2.4.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии
Готовую насадку (5% PS-400 или 3% OV-17 на хромосорбе 750, или 5% SE-30 на хроматоне N, или 5% SP-2100 на хромосорбе W) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 250 °С в токе газа-носителя в течение 10-12 ч.
2.4.2. Подготовка растворителей и приготовление растворов
Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя помещают в круглодонную колбу, испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 1 мл ацетона и хроматографируют по п.2.6.1. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
1 М раствор NaOH. Навеску 40 г гидроокиси натрия помещают в мерную колбу на 1 л. Добавляют в колбу 200-300 мл дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного растворения гидроокиси натрия. После охлаждения раствора до комнатной температуры доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.
0,25 М раствор NaOH. Навеску 5 г гидроксида натрия помещают в мерную колбу на 0,5 л, добавляют 200 мл дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. После охлаждения раствора доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.
2.4.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Взвешивают 100 мг аналитического стандарта спироксамина, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор с концентрацией спироксамина 1 мг/мл).
Градуировочные растворы с концентрациями 1, 2, 2,5, 5, 10, 25 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему.
Стандартный раствор устойчив при хранении в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 3 месяцев, градуировочные растворы - 1 месяц.
Для построения градуировочного графика - зависимости высоты (мм) или площади (мв·с) пика на хроматограмме от концентрации раствора (мкг/мл), в хроматограф вводят по 1-2 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных определений для каждого раствора).
Градуировочные растворы используют также для внесения в контрольные образцы с целью определения полноты извлечения спироксамина.
2.4.4. Подготовка окиси алюминия и хроматографических колонок для очистки экстрактов
Сорбент прокаливают в муфельной печи при температуре 350 °С в течение не менее 16 ч, остужают в эксикаторе до комнатной температуры и помещают в плоскодонную колбу. Добавляют 3% дистиллированной воды (по весу), закрывают колбу пробкой и энергично встряхивают сначала в течение 5 мин вручную, а затем два часа на механическом встряхивателе. Колбу оставляют на 48 ч, периодически, через каждые 2 ч, в течение рабочего дня энергично встряхивая ее содержимое 5-10 мин.
Для каждой приготовленной партии сорбента проверяют объем удерживания спироксамина на хроматографической колонке. Для этого уровень растворителя в хроматографической колонке понижают почти до верхнего слоя сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки вносят 1 мл стандартного раствора спироксамина с концентрацией 10 мкг/мл. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял ~0,5 см. Элюируют спироксамин из колонки этилацетатом со скоростью 2 мл/мин, отбирая фракции объемом 10 мл в цилиндры на 10 мл. Всего отбирают 6-7 фракций. Из цилиндров растворы переливают в круглодонные колбы на 50 мл (каждую фракцию помещают в отдельную колбу). Каждый цилиндр ополаскивают 1-2 мл этилацетата, который также вносят в соответствующую колбу. Выпаривают растворитель досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, тщательно обмывая стенки колб, и хроматографируют. Суммарный объем первых фракций, в которых не обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходимо отбросить при элюировании спироксамина из колонки при очистке проб. Суммарный объем фракций, в которых обнаружен спироксамин, представляет собой объем растворителя, который необходим для элюирования спироксамина из колонки при очистке проб.
Для очистки проб винограда (ягоды, сок) используют хроматографические колонки длиной 300 мм и диаметром 12 мм. В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, заполняют колонку флорисилом (4 г) и дополнительно в верхнюю часть колонки вносят слой безводного сульфата натрия высотой 10 мм. После этого колонку промывают 10 мл чистого н-гексана.
2.4.5. Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 (0,6 г) для очистки виноградного сока
Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, подсоединенного к водоструйному насосу. Сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Льюер объемом не менее 10 мл (используется как емкость для элюентов). Для активации и кондиционирования патрона через него последовательно пропускают 5 мл хлористого метилена, 10 мл ацетона, 10 мл 0,1 н NaOH. Элюат отбрасывают. Скорость потока через патрон не должна превышать 1-2 мл/мин. После кондиционирования патрона нельзя допускать высыхания поверхности картриджа и попадания в него пузырьков воздуха. После кондиционирования патрон сразу же используется для работы или герметично закрывается прилагаемыми к нему заглушками с обоих концов для последующего использования.
2.4.6. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.5. Отбор и подготовка проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.
Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или бумажной таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы и винограда хранят в морозильной камере при температуре не выше -18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция
Вода. Пробу анализируемой воды (250 мл) помещают в делительную воронку на 250 мл, подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5-8,5, добавляют 30 мл хлороформа. Воронку встряхивают 2 мин, дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Воду отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2-3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют по п.2.7.1.
В случае наличия на хроматограммах проб, мешающих определению коэкстрактивных соединений, проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п.2.6.3.
Зерно, зеленая масса и солома. Навеску растительного материала (20 г) помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, добавляют 150 мл ацетона. Колбу с пробой встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в стакан методом декантации через фильтр "белая лента" в круглодонную колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют при тех же условиях. Колбу с пробой и осадок на фильтре промывают 50 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают до объема 3-4 мл на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Далее проводят очистку экстракта по п.2.6.2.
Виноград. Ягоды винограда. Навеску ягод винограда 50 г измельчают, помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мл раствора ацетон-хлористый метилен в соотношении 1:1 и экстрагируют спироксамин в ультразвуковой ванне 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр (белая лента). К оставшемуся остатку добавляют 50 мл смеси ацетон-хлористый метилен и повторяют экстракцию в ультразвуковой ванне еще 10 мин. Экстракт отфильтровывают. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку на 500 мл и производят очистку по п.2.6.2.
Виноградный сок. 50 мл сока помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, добавляют 70 мл смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) и затем 10 мл 1 М раствора NaOH (до рН 8-9). Колбу помещают в ультразвуковую ванну и экстрагируют спироксамин в течение 10 мин. Затем содержимое колбы переносят в делительную воронку на 500 мл, дают жидкости полностью расслоиться и нижнюю органическую фазу сливают в круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). С верхним водно-щелочным слоем (рН 8-9) повторяют экстракцию 50 мл той же смеси ацетон-хлористый метилен (1:1) в течение 10 мин в ультразвуковой ванне. После расслоения жидкостей в делительной воронке нижний органический слой сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия, который затем промывают 10 мл той же смеси. Водно-щелочной слой отбрасывают. Объединенный органический экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона. Дополнительная очистка на колонке с флорисилом осуществляется так же, как для ягод винограда или используют патроны Диапак С16 (п.2.6.4).
2.6.2. Очистка экстрактов
Почва. Экстракт подщелачивают 1 н NaOH до рН 7,5-8,5 и помещают в делительную воронку на 500 мл. Колбу ополаскивают 30 мл хлороформа, который также переливают в делительную воронку. Воронку встряхивают 2 мин, дают разделиться слоям. После полного разделения слоев хлороформ (нижний слой) сливают в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, каждый раз используя по 30 мл хлороформа. Фильтр с сульфатом натрия промывают 20 мл хлороформа. Водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2-3 мл этилового спирта и выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Операцию с этанолом повторяют еще дважды. Далее проводят очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п.2.6.3.
При наличии на хроматограммах проб, мешающих определению коэкстрактивных соединений, проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с окисью алюминия по п.2.6.3.
Виноград. В делительную воронку с объединенным фильтратом добавляют 40-50 мл 0,25 М раствора NaOH (до рН 8-9). Воронку встряхивают в течение 3 мин. Нижнюю органическую фазу сливают через слой безводного серно-кислого натрия (30 г) в круглодонную колбу. Верхний водный слой (рН 8-9) экстрагируют 50 мл хлористого метилена, встряхивая воронку в течение 3 мин. После полного расслоения жидкостей органическую фазу сливают в ту же круглодонную колбу через слой безводного сернокислого натрия (30 г). Водный слой отбрасывают, а объединенный органический экстракт выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п.2.6.3.
2.6.3. Очистка экстрактов на колонке с окисью алюминия и флорисилом
Вода, почва, зеленая масса, солома, зерно. Растворяют сухой остаток в 1 мл ацетона. Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в колонку и дают ей впитаться. Обмывают стенки колбы 1 мл ацетона, который также вносят в колонку. Дают пробе впитаться, приоткрывая кран колонки и внимательно следя за тем, чтобы уровень жидкости в колонке не опускался ниже верхнего слоя сорбента. Элюируют спироксамин из колонки, используя 40 мл этилацетата со скоростью 2 мл/мин. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 30 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Экстракт растворяют в 1-2 мл ацетона и хроматографируют по п.2.6.1.
Виноград (ягоды, сок). Ацетоновый раствор количественно переносят в колонку с флорисилом. Стенки колбы обмывают 1 мл ацетона и также вносят в хроматографическую колонку. После впитывания раствора флорисилом элюируют спироксамин из колонки, используя 50 мл смеси ацетон-гексан в соотношении 7:3. Первые 10 мл элюата отбрасывают, а последующие 40 мл собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют, дозируя в хроматограф 1-2 мкл раствора.
2.6.4. Альтернативный вариант очистки виноградного сока с помощью патрона Диапак С16
К 50 мл виноградного сока добавляют по каплям 1 н раствор NaOH до рН 9 (контроль по индикаторной бумаге). Затем виноградный сок фильтруют в колбу на 100 мл через стеклянную воронку с ватным тампоном, предварительно промытым ацетоном. Остаток с ваты смывают 5 мл ацетона. Объединенный фильтрат пропускают через предварительно откондиционированный патрон Диапак С16 со скоростью 1-2 мл/мин. По окончании пропускания образца остаток раствора выдувается с картриджа током азота в течение 30 мин. Элюируют спироксамин с патрона 6 мл хлористого метилена, добавляя его порциями по 1 мл. Необходимо, чтобы первая порция элюента задержалась в патроне 1-2 мин для установления равновесия в системе и более полного извлечения спироксамина. Элюат упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
2.7. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф, оснащенный термоионным детектором (Цвет 500, НР-5840, PYE UNICAM 204 или аналогичные). Газ-носитель - гелий или азот высокой чистоты.
Условия хроматографирования для импортируемых хроматографов HP 5840 и PYE UNICAM 204 приведены в таблице:
Характеристика | Варианты | |||
| I | II | III | IV |
Носитель | хромосорб 750 | хроматон N-AW-DMCS | инертон супер | хромосорб 750 |
Размер частиц, мм | 0,12-0,150 | 0,2-0,25 | 0,16-0,2 | 0,12-0,150 |
Неподвижная фаза | 3% OV-17 | 5% SE-30 | 5% SE-30 | 5% PS-400 |
Длина колонки, м | 1,8 | 1,8 | 1,5 | 2 |
Внутренний диаметр колонки, мм | 2 | 2 | 2 | 2 |
Скорость потока, мл/мин: |
|
|
|
|
гелия или азота | 12,3 | 16 | 25 | 30 |
водорода | 3,4 | 3,4 | 35 | 35 |
воздуха | 60 | 60 | 350 | 350 |
Температура, °С: |
|
|
|
|
Колонки | 190 | 200 | 210 | 190 |
Инжектора | 250 | 250 | 250 | 250 |
Детектора | 300 | 300 | 300 | 300 |
Время удерживания, мин: |
|
|
|
|
Изомера I | 10,7±0,5 | 8,3±0,3 | 7,5±0,3 | 4,7±0,3 |
Изомера II | 12,9±0,5 | 10,2±0,3 | 8,8±0,3 | 5,7±0,3 |
2.8. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание спироксамина в пробах рассчитывают по формуле:
Содержание остаточных количеств спироксамина в анализируемой пробе вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории"*, общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, сжатыми газами, а также инструкций по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
- Определение спироксамина в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе злаковых культур: Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г., Андреева М.В., Маслаков С.Е. Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт лесного хозяйства.
- Определение спироксамина в винограде: Остроухова О.К., Блинова Т.Ф., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (ВИЗР).