ГОСТ Р 53773-2010 Продукция соковая. Методы определения антоцианинов.

ГОСТ Р 53773-2010

Группа Н59

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

 Методы определения антоцианинов

 Juice products. Methods for determination of Anthocyanins

ОКС 67.080,

         67.050

ОКСТУ 9109

Дата введения 2011-01-01

 Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (НО "РСПС") при участии НИИ питания Российской Академии медицинских наук (НИИ питания РАМН)

2 ВНЕСЕН Подкомитетом "Соки фруктовые и овощные, нектары, сокосодержащие напитки и морсы" Технического комитета по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки фруктов, овощей и грибов"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 февраля 2010 г. N 21-ст

4 В настоящем стандарте учтены основные положения международного стандарта CODEX-STAN 247-2005* "Общий стандарт на фруктовые соки и нектары" (CODEX-STAN 247-2005 "Codex general standard for fruit juices and nectars") в части методов анализа и отбора проб соковой продукции;

в части качественного определения антоцианинов учтены основные нормативные положения документа IFU Метод 71:1998 "Определение антоцианинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (Международная федерация производителей фруктовых соков) [IFU-Analyses No. 71 "Anthocyanins by HPLС" (International Federation of Fruit Juice Produces)]

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые соки и нектары, фруктовые концентрированные соки, фруктовые пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки, соковую продукцию обогащенную и для детского питания (далее - соковая продукция) и устанавливает следующие методы определения антоцианинов:

- метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для качественного определения антоцианинов в соковой продукции;

- метод рН-дифференциальной спектрофотометрии для определения массовой концентрации (массовой доли) суммы антоцианинов в соковой продукции. Нижний предел измерений массовой концентрации (массовой доли) суммы антоцианинов составляет 5 мг/дм

(млн

). Верхний предел измерений массовой концентрации (массовой доли) 5000 мг/дм

(млн

).

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования*

________________

* С 1 января 2010 г. действует ГОСТ Р 53228-2008 в части вновь разрабатываемых и модернизируемых весов; с 1 января 2013 г. - в части весов, разработанных до 1 января 2010 г.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При использовании настоящего стандарта целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 антоцианины: Водорастворимые растительные пигменты, обусловливающие красную, синюю и фиолетовую окраску фруктов, относящиеся к классу флавоноидов и представляющие собой гликозиды антоцианидинов.

Примечание - Структура основных антоцианидинов, входящих в состав природных антоцианинов, приведена в приложении А (см. рисунок А.1).

      4 Отбор и подготовка проб

4.1 Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671.

      5 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

5.1 Сущность метода ВЭЖХ

Метод обращенно-фазовой ВЭЖХ с фотометрическим детектированием при 518 нм обеспечивает разделение и качественное определение антоцианинов в соковой продукции, имеющей красную, синюю и фиолетовую окраску, с целью установления таких нарушений, как добавление экстрактов и соков из других окрашенных фруктов и овощей и (или) избыточное разбавление соковой продукции.

Полученные хроматограммы сравнивают с хроматограммами аутентичных фруктовых соков и данными таблицы Б.2 приложения Б.

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы

5.2.1 Хроматограф жидкостный высокоэффективный со спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) и программно-аппаратным комплексом сбора и обработки результатов типа "Millenium 2000".

5.2.2 Колонка аналитическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм.

5.2.3 Шприц для ВЭЖХ вместимостью 10 и 20 мкл.

5.2.4 Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг.

5.2.5 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,2 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.

5.2.6 рН-метр с диапазоном измерений рН от 2 до 18; погрешность измерений ±0,01 ед. рН.

5.2.7 Пипетки градуированные 1-2-1, 1-2-2, 1-2-5, 1-2-1 и 1-2-25 2-го класса точности по ГОСТ 29227.

5.2.8 Колбы мерные вместимостью 25, 100 см

с одной отметкой по ГОСТ 1770.

5.2.9 Емкости для жидких проб (виалы) вместимостью 2-6 см

.

5.2.10 Центрифуга лабораторная с фактором разделения (g-фактор) 800-1000.

5.2.11 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

воронки лабораторные,

стаканы вместимостью 50, 100 и 1000 см

.

5.2.12 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

5.2.13 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652.

5.2.14 Ацетонитрил для ВЭЖХ по [1].

5.2.15 Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5.3 Подготовка к проведению определения

5.3.1 Подготовка проб для хроматографического определения

Для качественного определения антоцианинов в концентрированных соках и пюре взвешивают 1 г пробы с записью результата до третьего знака после запятой и пробу разбавляют в 5 см

дистиллированной воды (пюре и соковую продукцию с высоким содержанием растворимых сухих веществ разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:2 до 1:5). Подготовленную пробу для удаления мутной взвеси центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.

Для качественного определения антоцианинов в другой соковой продукции, а также в соках прямого отжима 1 г пробы без предварительного разбавления центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При суммарном содержании антоцианинов в соке менее 0,1% пробу фильтруют через мембранный фильтр, не разбавляя.

5.3.2 Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии

Готовят раствор ортофосфорной кислоты с рН=2,1. Для этого в дистиллированную воду по каплям добавляют концентрированную ортофосфорную кислоту (см. 5.2.15), рН контролируют с помощью рН-метра. Полученный раствор ортофосфорной кислоты смешивают с ацетонитрилом в соотношении 88:12 в процентах по объему. Подвижную фазу фильтруют под вакуумом через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения подвижной фазы - одна неделя при хранении в плотно укупоренной посуде.

5.3.3 Выполнение измерений

Условия хроматографического анализа:

колонка аналитическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем размером частиц 5 мкм;

температура колонки: 35 °С;

детектирование: фотометрический детектор с длиной волны 518 нм;

скорость подачи элюента: 1,0 см

/мин;

объем вводимой пробы: 10-20 мкл.

Градиентное элюирование:

ортофосфорная кислота с рН=2,1 (см. 5.3.2) в соотношении с ацетонитрилом (см. 5.2.14) в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 - Состав подвижной фазы

Хроматографическая система (обращенно-фазовая колонка в качестве неподвижной фазы и градиент водного раствора ортофосфорной кислоты и ацетонитрила) должна обеспечивать разделение основных пиков антоцианинов, приведенных в таблице Б.1 приложения Б.

Примечание - Пример разделения пиков антоцианинов сока черной смородины приведен на рисунке Б.1 приложения Б. Хроматографическая система должна обеспечивать разделение на четыре основных пика для сока черной смородины, причем пики 2 и 3 должны разделяться полностью (до нулевой линии).