ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка.
ГОСТ 25011-81
Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
Методы определения белка
Meat and meat products. Methods of protein determination
МКС 67.120.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 1983-01-01
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 27 ноября 1981 г. N 5145 дата введения установлена 01.01.83
Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
ИЗДАНИЕ (январь 2010 г.), утвержденным в декабре 1987 г. (ИУС 4-88).
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты, а также консервы на мясной основе для детского питания и устанавливает фотометрический метод определения белка и метод определения содержания белков по Кьельдалю.
Настоящий стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2787-80.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД
1.1. Сущность метода
Метод основан на минерализации пробы по Кьельдалю и фотометрическом измерении интенсивности окраски индофенолового синего, которая пропорциональна количеству аммиака в минерализате.
1.2. Методы отбора и подготовки проб
1.2.1. Отбор проб мяса - по ГОСТ 7269-79, отбор проб мясных продуктов - по ГОСТ 9792-73*. Отобранные пробы мяса и мясных продуктов дважды измельчают на бытовой или электрической мясорубке с отверстиями решетки диаметром 3 мм и тщательно перемешивают.
________________
* На территории российской Федерации дополнительно действует ГОСТ Р 51447-99.
Отбор и подготовка проб консервов на мясной основе для детского питания - по ГОСТ 8756.0-70.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
Пробу хранят при температуре от 3 до 5 °С до окончания анализа.
1.3. Аппаратура, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88*.
Спектрофотометр марок СФ-4, СФ-26 или фотоэлектроколориметр марки 56 ПМ или других аналогичных марок.
Мясорубка бытовая с отверстиями решетки диаметром не более 4 мм по ГОСТ 4025-95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469-95.
Промывалка стеклянная лабораторная.
Штатив химический.
Пробирки П 4-15-14/23 ХС или П 4-20-14/23 ХС по ГОСТ 25336-82.
Колбы Кьельдаля 1-50-14/23 ТС или 1-100-14/23 ТС, 2-50-14 ТХС или 2-100-14 ТХС по ГОСТ 25336-82.
Колбы Кн-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336-82.
Пипетки 4-1-1 или 4-2-1, 4-1-5 или 4-2-5.
Колбы мерные 2-100-2, 2-250-2 по ГОСТ 1770-74.
Воронки В-56-80 ХС или В-75-110 ХС по ГОСТ 25336-82.
Стаканы В-1-600 ТС по ГОСТ 25336-82.
Стаканчики для взвешивания СВ-14/8 по ГОСТ 25336-82.
Бумага универсальная индикаторная.
Фильтры обеззоленные.
Водорода перекись по ГОСТ 10929-76.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769-78, х.ч.
Известь хлорная по ГОСТ 1692-85.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, ч.д.а.
Фенол по ТУ 6-09-5303-86, ч.
Натрий нитропруссидный, ч.
Натрия гипохлорит.
Калий йодистый по ГОСТ 4232-74, ч.д.а.
Натрий углекислый безводный по ГОСТ 83-79, ч.д.а.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.4. Подготовка к испытанию
1.4.1. Приготовление реактива 1
1.4.2. Приготовление реактива 2
1.4.3. Приготовленные реактивы хранят в темной посуде в холодильнике не более 2 мес.
1.4.4. Приготовление исходного гипохлорита натрия
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.4.5. Определение количества гипохлорита натрия в исходном растворе
Перед приготовлением реактива 2 необходимо определить содержание гипохлорита натрия в исходном растворе, учитывая неустойчивость его при хранении.
По количеству израсходованного на титрование тиосульфата натрия определяют количество раствора гипохлорита натрия, необходимого для приготовления реактива 2.
Пример расчета:
Эквивалентная масса гипохлорита натрия равна половине молекулярной массы гипохлорита натрия и составляет 74,4:2=37,2 г. Следовательно, количество гипохлорита натрия в исходном растворе гипохлорита натрия составляет 1,209х37,2=44,97 г.
Учитывая, что реактив 2 должен содержать 0,42 г гипохлорита натрия, из пропорции определяем:
в 1000 см исходного раствора | - 44,97 г |
- 0,42 г |
1.4.6. Приготовление стандартного раствора сернокислого аммония для построения градуировочной кривой
1.4.7. Проведение цветной реакции
Повторность проведения цветной реакции трехкратная. Для каждого определения готовят новый стандартный раствор.
1.4.8. Построение градуировочного графика
По полученным средним из трех стандартных растворов строят на миллиметровой бумаге размером 20х20 см градуировочный график.
1.5. Проведение испытания
Навеску продукта рассчитывают по разности, для этого часть измельченной объединенной пробы помещают в бюксу, закрывают крышкой и взвешивают с допустимой погрешностью не более 0,0002 г. Затем из бюксы скальпелем отбирают 0,4-0,5 г продукта на листок беззольного фильтра и вместе с ним осторожно опускают в колбу Кьельдаля. Бюксу закрывают, взвешивают и рассчитывают точную массу продукта, взятого для анализа.
Контрольный раствор готовят одновременно, используя для этой цели контрольный минерализат.
Стабильность окраски растворов сохраняется в течение одного часа.
Температура реактивов при проведении цветной реакции должна быть не ниже 20 °С.
По полученному значению оптической плотности с помощью калибровочного графика находят концентрацию азота.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.6. Обработка результатов
За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Расхождение между параллельными определениями не должно превышать 0,1% по содержанию азота для мяса и мясопродуктов.
2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ БЕЛКА ПО КЬЕЛЬДАЛЮ
2.1. Сущность метода
Метод основан на минерализации пробы по Кьельдалю, отгонке аммиака в раствор серной кислоты с последующим титрованием исследуемой пробы.
2.1.1. (Исключен, Изм. N 1).
2.1.2. Для проведения испытаний применяют реактивы квалификации чистый для анализа (ч.д.а.) и дистиллированную воду или воду эквивалентной чистоты.
2.1.3. Испытания следует проводить в помещениях, свободных от паров аммиака.
2.2. Метод отбора и подготовки проб
2.2.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 8756.0-70.
2.2.2 Отобранную пробу двукратно измельчают в мясорубке, перемешивают и помещают, уплотняя, в банку с герметической крышкой.
2.2.3. Измельченную пробу хранят при температуре не выше 4 °С до окончания испытания.
Срок хранения пробы для испытаний не должен превышать 24 ч.
2.3. Аппаратура, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения 1-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-88.
Мясорубка бытовая с отверстиями решетки диаметром не более 4 мм по ГОСТ 4025-95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469-95.
Колбы Кьельдаля 1-50-14/23 ТС или 1-100-14/23 ТС, 2-50-14 ТХС или 2-100-14 ТХС по ГОСТ 25336-82.
Аппарат для перегонки с водяным паром (Парнаса-Вагнера) или обыкновенная установка для перегонки.
Установка электрическая или газовая для сжигания с регулируемой интенсивностью обогревания, позволяющая обогревать колбы Кьельдаля в наклонном положении, таким образом, чтобы зона нагрева находилась ниже уровня жидкости в колбе. Аппарат должен быть оснащен вытяжным устройством, позволяющим удалять испарения кислот во время обогревания.
Титратор автоматический потенциометрический или полуавтоматическая бюретка.
Бюретка 1-2-50-0,1 или 2-2-50-0,1 по ГОСТ 1770-74.
Дозаторы для жидкостей или цилиндры 1-25, 1-50, 1-100, 1-500 по ГОСТ 1770-74.
Мельница шаровая или ступка с пестиком по ГОСТ 9147-80.
Катализатор медный; готовят следующим образом: тщательно смешивают в весовом отношении 30:1 мелкорастертый безводный сульфат калия по ГОСТ 4145-74 с тонко растертым сульфатом меди по ГОСТ 4165-78. Компоненты смеси, взвешенные с погрешностью не более 0,1 г, растирают в шаровой мельнице или в ступке. Смесь хранят в герметически закрытой склянке и предохраняют от увлажнения. Допускается применение других катализаторов.
_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
Бумага пергаментная размерами 60х80 мм по ГОСТ 1341-97.
Средства, предупреждающие перегревание во время минерализации: стеклянные или карборундовые бусы или куски твердого фарфора.
Средства, предупреждающие перегревание жидкостей во время перегонки: карборундовые бусы или свежевыжженные куски пемзы.
Средства, предупреждающие пенообразование во время перегонки: парафиновое чистое масло.
Бумажки лакмусовые кислотные или универсальные индикаторы.
Сульфат аммония по ГОСТ 3769-78.
Колба Кн-1-500-29/32 или Кн-2-500-34 по ГОСТ 25336-82.
Стакан Н-1-500 ТХС по ГОСТ 25336-82.
Фильтры обеззоленные.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2.4. Проведение испытания
2.4.1. На пергаментной бумаге отвешивают около 2 г пробы с погрешностью не более 0,001 г.
Для проб с большой массовой долей жира масса навески не должна превышать 1,5 г.
Во избежание потерь во время минерализации пробы следует избегать проникновения пены в горло колбы, испытание проводить в условиях, не удлиняющих чрезмерно его продолжительность, но гарантирующих полную минерализацию пробы.
2.4.3. Содержимое колбы Кьельдаля подвергают перегонке с водяным паром или простой перегонке, для чего монтируют соответствующую установку.
В стадии перегонки следует соблюдать плотность установки для перегонки, добавлять раствор гидроокиси натрия по стенке колбы Кьельдаля и смешивать оба слоя только после подключения колбы к установке.
та.
2.4.6. При употреблении титратора вместо конических колб как приемника применяют химические стаканы и после окончания перегонки помещают их в титраторе, поступая согласно инструкции по обслуживанию аппарата.
2.4.7. Полученные результаты титрования используют для вычисления массовой доли общего азота и последующего пересчета на белок.
2.4.8. Из каждой пробы проводят, по крайней мере, два параллельных определения.
2.4.9. Контрольную пробу следует проводить так же, как и опытную. Вместо навески мясного продукта берут кусок пергаментной бумаги.
Контрольную пробу (с повторением) следует проводить каждый раз после приготовления свежей порции реагентов или растворов. Рекомендуется также периодическое повторение контрольной пробы при использовании реагентов, которыми уже давно пользуются.
2.4.10. При получении сомнительных результатов (слишком низких или с большими колебаниями между параллельными испытаниями) необходимо провести проверку установки для перегонки или процедуры минерализации.
Для проверки всего процесса с неорганическим веществом используют сульфат аммония и проводят все испытания, как указано в пп.2.4.1-2.4.5. Низкий результат, который не может быть приписан процессу перегонки, может быть вызван потерями во время испытаний (выплескивание жидкости, улетучивание соединений азота и т.д.).
Для проверки всего процесса с учетом разложения органического вещества определяют массовую долю азота в органическом трудноразлагаемом соединении (например, в триптофане), чистом или смешанном с веществами, не содержащими азот.
Низкий результат может быть получен из-за недостаточного разложения органического вещества (например, вследствие неправильного обогрева или применения несоответствующего катализатора).
2.5. Обработка результатов
2.5.2. Если разница между двумя параллельными определениями не превышает 0,1% по азоту, то за результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений с точностью до 0,01%. Если разница больше, определение повторяют.
2.5.3. При применении соляной или серной кислоты другой концентрации, в формулу (1) следует ввести соответствующий корректирующий коэффициент.