ГОСТ Р 51469-99 Казеины и казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы.

ГОСТ Р 51469-99

Группа Н19

 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 КАЗЕИНЫ И КАЗЕИНАТЫ

 Фотометрический метод определения массовой доли лактозы

 Caseins and caseinates.

Photometric method for determination of lactose content

ОКС 67.100.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 2001-01-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 года N 624-ст

3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5548-80* "Казеины и казеинаты. Определение содержания лактозы. Фотометрический метод"

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты массовой долей углеводов не более 2%. Стандарт устанавливает фотометрический метод определения массовой доли лактозы и других растворимых углеводов.

Метод основан на растворении навески продукта в горячей воде или растворе, осаждении осадка фильтрации, окраске безбелкового осадка углеводов, фотометрического измерения и определения массовой доли лактозы в соответствии с калибровочным графиком.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 6859-72 Приборы для отмеривания и отбора жидкостей. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия

ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

__________________

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1

ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

ИСО 707-97* Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб

_______________

* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО. С 11 августа 2008 г. действует ИСО 707:2008.

      3 Определение

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая доля лактозы в казеинах и казеинатах: Отношение массы растворимых углеводов к массе навески продукта, умноженное на 100.

      4 Аппаратура, материалы и реактивы

Дозаторы серной кислоты по ГОСТ 6859 вместимостью 10 см

.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104, 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,001 г.

Устройство измельчающее, без нагрева пробы при измельчении и без потери или поглощения влаги.

Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 и 500 см

.

Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.

Пробирки с притертыми пробками по ГОСТ 1770 вместимостью 40 см

.

Пипетки по ГОСТ 29227 исполнения 2, 1-го и 2-го класса точности, вместимостью 1, 2 и 10 см

.

Микропипетки вместимостью 0,2 см

и ценой деления 0,001 см

.

Баня водяная с возможностью установки температур (20±1) °С и от 60 °С до 70 °С.

Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25 см

.

Фотоэлектроколориметр диапазоном измерения при длине волны 490 нм, с кюветами размером оптического пути от 1 до 2 см.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Натрий углекислый кислый (NaHCO

) по ГОСТ 4201, ч.д.а.

Натрия трифосфат (Na

Р

О

) по технической документации, ч.д.а.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации 0,1 моль/дм

, х.ч.

Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см

, раствор концентрации 1 моль/дм

, х.ч.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 100 г уксусной кислоты в 1 дм

дистиллированной воды, х.ч.

Натрий уксуснокислый (CH

COONa) по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм

, ч.д.а.

Фенол по ГОСТ 23519, раствор с массовой долей фенола 80%.

Лактоза безводная, ч.д.а.

Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по ГОСТ 19814.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.

      5 Отбор проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.

      6 Подготовка к определению

6.1 Подготовка пробы

6.1.1 В колбу вместимостью 250 см

помещают (50±1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают пробу десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.

6.1.2 Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.

6.1.3 Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, проба пригодна для дальнейшей работы.

6.1.4 Если проба полностью или частично не проходит, измельчают (50±5) г образца. Пробу просеивают и переносят в колбу вместимостью 250 см

, закрывают пробкой и тщательно перемешивают не менее чем десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в продукт и дальнейшее определение проводить как можно скорее.

6.2 Приготовление растворов для построения калибровочного графика

6.2.1 Раствор лактозы

В мерную колбу вместимостью 100 см

помещают (2,000±0,001) г безводной лактозы, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают до полного растворения. Раствор хранят при температуре 0 °С.

6.2.2 Приготовление градуированных растворов

6.2.2.1 Раствор А

В мерную колбу вместимостью 100 см

пипеткой отмеряют 10 см

раствора лактозы (по 6.2.1) и доливают дистиллированной водой до метки.

В 1 см

раствора А содержится 2 мг безводной лактозы.

6.2.2.2 Раствор N 1

В мерную колбу вместимостью 100 см

пипеткой отмеряют 1 см

раствора А и доливают дистиллированной водой до метки.

В 1 см

раствора содержится 20 мкг безводной лактозы.

6.2.2.3 Раствор N 2

В мерную колбу вместимостью 100 см

пипеткой отмеряют 2 см

раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.

В 1 см

раствора содержится 40 мкг безводной лактозы.

6.2.2.4 Раствор N 3

В мерную колбу вместимостью 100 см

пипеткой отмеряют 3 см

раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.

В 1 см

раствора содержится 60 мкг безводной лактозы.

6.2.2.5 Раствор сравнения

В колбу вместимостью 100 см

вносят (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия для кислотного казеина или (0,100±0,001) г трифосфата натрия - для сычужного казеина и доливают 25 см

дистиллированной воды. Перемешивают встряхиванием и ставят на водяную баню при температуре (65±5) °С до полного растворения. Далее обработка раствора по 6.3.4.

6.3 Подготовка фильтрата в соответствии с требованиями, изложенными в приложении А

6.3.1 Навеску массой (1,00±0,01) г казеина или казеината по 6.1 помещают в коническую колбу вместимостью 100 см

и добавляют (кроме казеината):

- для кислотного казеина - (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия (NaHCO

);

- для сычужного казеина - (0,100±0,001) г трифосфата натрия (Na

H

O

).

6.3.2 В колбу доливают 25 см

дистиллированной воды, ставят на водяную баню температурой от 60 до 70 °С. Колбу периодически перемешивают встряхиванием.

6.3.3 Нагревание проводят в течение 10-15 мин до полного растворения навески.

6.3.4 Колбу охлаждают до комнатной температуры и постепенно добавляют:

- 15 см

дистиллированной воды и перемешивают встряхиванием;

- 8 см

раствора соляной кислоты или раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм

и перемешивают встряхиванием;

- 1 см

раствора уксусной кислоты и перемешивают встряхиванием.

Колбу оставляют на 5 мин.

Затем добавляют 1 см

раствора ацетата натрия и перемешивают встряхиванием.

Колбу оставляют до полного осаждения казеинового преципитата.

Раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.

      7 Проведение определения

7.1 В пробирку вместимостью 40 см

отмеряют пипеткой 2 см

фильтрата, добавляют микропипеткой 0,2 см

раствора фенола массовой долей 80% и перемешивают встряхиванием.

Доливают концентрированную серную кислоту при помощи дозатора со скоростью 5 см

/с. Струю кислоты направляют на поверхность раствора, а не по стенке пробирки, при этом хорошо перемешивают.

Содержимое пробирки вновь тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое на 15 мин.

Охлаждают в течение 5 мин на водяной бане при температуре (20±2) °С и приступают к измерению.

Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 490 нм с использованием раствора сравнения, приготовленного по 6.2.2.5.

Если значение оптической плотности выше верхнего предела, указанного калибровочной кривой, повторяют измерение с использованием 2 см

разбавленного раствора фильтрата вместо самого фильтрата.

Примечание - Если делается такое разбавление, то в формуле расчета по 8.1 проводят соответствующую корректировку.

7.2 Построение калибровочного графика

В четыре пробирки для анализа помещают 2 см

каждого из трех градуировочных растворов по 6.2 и приливают к ним 2 см

дистиллированной воды.

Измеряют оптическую плотность трех градуировочных растворов с использованием раствора сравнения, подготовленного по 6.2.2.5.

Строят калибровочный график нанесением значений массовой концентрации безводной лактозы и результатов измерения оптической плотности.

      8 Обработка результатов

8.1 Массовую долю лактозы в навеске

, %, вычисляют по формуле

,

где

- массовая концентрация безводной лактозы, определенная по градуировочному графику, мкг/см

;

- масса навески продукта, г;

- объем раствора казеина или казеината, см

.

      9 Метрологические характеристики

9.1 Сходимость

Разность двух результатов определений, полученных при анализе одной и той же пробы одним и тем же лаборантом за короткий промежуток времени, не должна превышать 0,03% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности

=0,95.

9.2 Воспроизводимость

Разность двух единичных и независимых результатов определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробой, не должна превышать 0,04% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности

=0,95.   

9.3 Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,03%, то повторно проводят два новых определения.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(обязательное)

Подготовка фильтрата

Вид продукта	Масса навес- ки, г	Бикар- бонат натрия NaHCO	Пента- натрий- трифосфат Na H O	Объем воды, см	Время выдерж- ки при нагре- вании, мин	Объем воды, см	Объем HCl H SO	Уксус- ная кис- лота, см	Время выдерж- ки, мин	Ацетат натрия CH COONa (см )
Казеинаты	1±0,01			25	10-15	15	8	1	5	1
Кислотные казеины	1±0,01	0,1±0,001		25	10-15	15	8	1	5	1
Сычужные казеины	1±0,01		0,1±0,001	25	10-15	15	8	1	5	1
Раствор сравнения для кислотного казеина		0,1±0,001		25	-	-	-	-	-	-
Раствор сравнения для сычужного казеина			0,1±0,001	25	-	-	-	-	-	-