ГОСТ 30627.3-98 Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина Е (токоферола).

ГОСТ 30627.3-98

Группа Н19

 МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

 ПРОДУКТЫ МОЛОЧНЫЕ ДЛЯ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ

 Метод измерения массовой доли витамина Е (токоферола)

 Infant milk products. Method for determination of mass part of vitamin E (Tocopheroli)

МКС 67.100.10

ОКСТУ 9209

Дата введения 2000-05-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН МТК 186 и Научно-исследовательским институтом детского питания

ВНЕСЕН Госстандартом России

2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 1998 г. N 14)

За принятие проголосовали:

3 Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 28 апреля 1999 г. N 144 межгосударственный стандарт ГОСТ 30627.3-98 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 мая 2000 г.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

      1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молочные продукты для детского питания, обогащенные витамином Е (токоферолом), и устанавливает колориметрический метод измерения массовой доли витамина Е.

Метод основан на реакции восстановления токоферолами трехвалентного железа в двухвалентное с образованием окрашенного комплекса двухвалентного железа с ортофенантролином (батофенантролином или

,

-дипиридилом).

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 334-73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 4147-74 Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4212-76 Реактивы. Приготовление растворов для колориметрического и нефелометрического анализа

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТ 4919.2-77 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления буферных растворов

ГОСТ 5962-67* Спирт этиловый ректификованный. Технические условия

__________________

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

ГОСТ 6552-80 Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 8981-78 Эфиры этиловый и нормальный бутиловый уксусной кислоты технические. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

      3 Методы отбора проб

Отбор проб и подготовка их к измерению по ГОСТ 26809.

      4 Аппаратура, материалы и реактивы

Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 0 до 100 °С с погрешностью ±2 °С.

Бумага масштабно-координатная (миллиметровая) по ГОСТ 334.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Весы лабораторные общего назначения 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104.

Воронки делительные номинальной вместимостью 250 см

по ГОСТ 25336.

Воронки стеклянные типа В диаметром 56 мм по ГОСТ 25336.

Испаритель ротационный ИР-1М [1].

Колбы мерные исполнения 1 2-го класса точности номинальной вместимостью 50, 100 см

по ГОСТ 1770.

Колбы типа К исполнения 1 номинальной вместимостью 100 см

по ГОСТ 25336.

Пипетки исполнений 4, 6, 7 2-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2, 5, 10, 25 см

по ГОСТ 29227.

Пробирки стеклянные типа П4 номинальной вместимостью 10 и 20 см

по ГОСТ 25336.

Секундомер 2-го класса [2].

Стакан исполнения 3 номинальной вместимостью 1000 см

по ГОСТ 9147.

Термометр жидкостный (не ртутный) диапазоном измерения 0-100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Фотометр фотоэлектрический диапазоном измерения 220-1100 нм [3] или колориметр фотоэлектрический диапазоном измерения 200-2000 нм, диапазоном измерения коэффициента пропускания 100-1% [4].

Холодильник обратимый со шлифом и водяным охлаждением по ГОСТ 25336.

Цилиндры исполнения 1 вместимостью 25, 50 см

по ГОСТ 1770.

Часы 2-го класса по ГОСТ 3145.

Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима от 50 до 200 °С с погрешностью ±2 °С.

Эксикатор исполнения 2 по ГОСТ 25336.

Аскорбиновая кислота (витамин С) [5].

Батофенантролин

,

-дипиридил (4, 4-дипиридил) [6].

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Железо треххлористое 6-водное ч. по ГОСТ 4147.

Калия гидроокись х.ч. по ГОСТ 24363.

Натрий сернокислый безводный х.ч. по ГОСТ 4166.

Ортофенантролин [7].

Ортофосфорная кислота ч. по ГОСТ 6552.

Спирт абсолютный [8].

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Токоферола ацетат (витамин Е ацетат) [9] или масляный раствор массовой концентрации

-токоферола ацетата 300 г/дм

(с массовой долей

-токоферола ацетата в масле 30%) [10].

Фенолфталеин ч.д.а. [11].

Эфир петролейный [12], перегнанный при температуре (50±10) °С, не содержащий перекисей.

Эфир этиловый по ГОСТ 8981.

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Хранение растворов по ГОСТ 4212.

Хранение реактивов и особо чистых веществ по ГОСТ 4919.1 и ГОСТ 4919.2.

      5 Условия выполнения измерения

Измерение должно проводиться при красном или затемненном свете, в связи с разрушением витамина Е под воздействием ультрафиолетовых лучей.

Работу с эфиром необходимо проводить в вытяжном шкафу и в хорошо вентилируемом помещении.

      6 Подготовка к выполнению измерения

6.1 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см

(0,200

±0,001)

г треххлористого железа, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см

абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

Раствор хранят в склянке из темного стекла при (6±2) °С.

6.2 Приготовление спиртового раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см

1,25 см

раствора треххлористого железа массовой концентрации 2 мг/см

смешивают с 8,75 см

абсолютного спирта и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед применением.

6.3 Приготовление раствора молярной концентрации

(H

PO

)=0,03 моль/дм

в абсолютном спирте

(0,327

±0,001)

г ортофосфорной кислоты, взвешенной на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см

абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

6.4 Приготовление спиртового раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см

(0,100

±0,001)

г ортофенантролина, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см

абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

6.5 Приготовление спиртового раствора

,

-дипиридила (4, 4-дипиридила) массовой концентрации 5 мг/см

(0,500

±0,001)

г

,

-дипиридила, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 25-50 см

абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

, доводят до метки тем же спиртом и перемешивают.

Спиртовые растворы ортофенантролина, батофенантролина и

,

-дипиридила хранят в склянке из темного стекла при (6

±2)

°С.

6.6 Приготовление спиртового раствора фенолфталеина массовой концентрации 10 мг/см

(1,00

±0,04)

г фенолфталеина, взвешенного на весах 4-го класса точности, растворяют в 70 см

этилового спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

, добавляют 30 см

дистиллированной воды и перемешивают.

6.7 Приготовление водного раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см

(125,0

±0,1)

г гидроокиси калия, взвешенной на весах 4-го класса точности, растворяют в 100-150 см

дистиллированной воды в фарфоровом стакане, охлаждают до (20

±5) °

С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см

, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

6.8 Обезвоживание сернокислого натрия

Сернокислый натрий высушивают в сушильном шкафу при (150±10) °С 8-12 ч. Хранят в эксикаторе.

6.9 Приготовление стандартного раствора

-токоферола

(0,040

±0,001)

г 100%-ного препарата витамина Е, взвешенного на весах 2-го класса точности, растворяют в 50 см

абсолютного спирта в мерной колбе вместимостью 100 см

и доводят объем до метки этим же спиртом.

6.9.1 Гидролиз

В круглодонную колбу вместимостью 100 см

вносят 5 см

полученного по 6.9 стандартного раствора витамина, добавляют 15 см

этилового спирта, (0,10

±0,03)

г аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, 1 см

гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см

и перемешивают. Колбу соединяют с обратным водяным холодильником и выдерживают в кипящей водяной бане (18

±2)

мин.

6.9.2 Экстракция

По окончании гидролиза содержимое колбы охлаждают до (20

±5) °

С и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают 50 см

дистиллированной воды, воду сливают в ту же воронку.

Признаком полного омыления служит то, что при добавлении воды к смеси муть не образуется. При образовании мути гидролиз повторяют, увеличивая при этом объем щелочи до 2 см

или время гидролиза до (30

±2)

мин.

Неомыляемые вещества экстрагируют диэтиловым или петролейным эфиром три раза по 25 см

. После чего нижний (водный) слой отбрасывают.

6.9.3 Промывка

Объединенный эфирный экстракт (верхний слой) переносят в делительную воронку и отмывают от щелочи до нейтральной реакции по фенолфталеину, расходуя при этом 50-60 см

дистиллированной воды.

Промытую эфирную вытяжку фильтруют в сухую круглодонную колбу со шлифом через слой безводного сернокислого натрия (20-30 г), не допуская заполнения воронки выше уровня этого слоя. По окончании фильтрования фильтр промывают эфиром объемом не менее 15 см

.

6.9.4 Отгонка растворителя

Колбу с фильтратом подсоединяют к роторному испарителю и отгоняют эфир под вакуумом при температуре водяной бани не более 30 °С для диэтилового эфира и не более 50 °С - для петролейного эфира.

Неомыляемый остаток растворяют в абсолютном спирте и доводят объем до 100 см

этим же спиртом.

Если используют препарат витамина Е другой концентрации, то навеску рассчитывают так, чтобы конечная концентрация стандартного раствора (после гидролиза) составляла не менее 20 мкг/см

.

6.9.5 Проверка концентрации стандартного раствора

-токоферола

В полученном растворе определяют массовую концентрацию

-токоферола, измеряя оптическую плотность спиртового раствора при длине волны 292 нм.

Массовую концентрацию

-токоферола

, мкг/см

вычисляют по формуле

,                                                       (1)

где

- оптическая плотность испытуемого раствора при длине волны 292 нм против абсолютного спирта;

10000 - масса

-токоферола в 1 см

1%-ного раствора, мкг;

- удельный показатель поглощения при длине волны 292 нм для 1%-ного раствора

-токоферола в абсолютном спирте, равен 74,7.

6.9.6 Построение калибровочного графика

В пять пробирок вносят по 0,25; 0,5; 0,75; 1,0 см

полученного стандартного раствора и доводят объем в каждой пробирке абсолютным спиртом до 5 см

. В шестую пробирку вносят 5,0 см

абсолютного спирта (холостая проба). Затем во все пробирки приливают по 0,5 см

раствора ортофенантролина или батофенантролина массовой концентрации 1 мг/см

, или

,

-дипиридила массовой концентрации 5 мг/см

, добавляют 0,5 см

раствора треххлористого железа массовой концентрации 0,25 мг/см

, перемешивают и не более чем через 20 с добавляют 0,5 см

раствора ортофосфорной кислоты молярной концентрации

(H

PO

)=0,03 моль/дм

и снова перемешивают. Реакцию проводят с каждой пробиркой отдельно.

Определяют оптическую плотность на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.

Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают массу

-токоферола от 5 до 20 мкг, а по оси ординат - разность показаний прибора между испытуемым раствором и холостой пробой.

Построение калибровочного графика повторяют при смене прибора или одного из реактивов, необходимых для проведени

я реакции.

6.10 Щелочной гидролиз продукта

Для жидких и пастообразных продуктов отобранную для анализа пробу прогревают при 37 °С 20-30 мин и перемешивают для равномерного распределения жира в продукте.

Навеску сухого продукта на гидролиз берут с учетом массовой доли витамина Е в продукте.

Массовая доля витамина Е, млн	Навеска сухого продукта, г
8,5-15	10,0±0,4
15-45	5,0±0,4
45-120	2,0±0,4

Навеска жидкого и пастообразного продукта - (15±0,01) г.

Навеску помещают в круглодонную колбу роторного испарителя вместимостью 100 см

. К навеске для сухого продукта добавляют (9

±1)

см

дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. В круглодонную колбу ротационного испарителя к навеске продукта добавляют 100-150 мг аскорбиновой кислоты, взвешенной на весах 4-го класса точности, приливают 40 см

этилового спирта и, перемешивая, вносят 5-7 см

раствора гидроокиси калия массовой концентрации 0,5 г/см

.

Колбу соединяют с обратным холодильником и выдерживают при температуре кипения смеси на водяной бане в течение (30±1) мин.

6.11 Экстракция

Экстракцию и последующие операции проводят в соответствии с 6.9.2-6.9.4.

Эфирный экстракт помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 см

. Эфир выпаривают на ротационном испарителе согласно 6.9.4, а сухой остаток немедленно растворяют в 15 см

абсолютного спирта.

      7 Проведение измерения

Оптическую плотность измеряют на колориметре или фотометре при длине волны 490 нм, устанавливая в параллельный световой поток кювету, наполненную абсолютным спиртом.

1,0-5,0 см

полученного раствора (в зависимости от массовой доли витамина Е в продукте) помещают в пробирку, доводят объем раствора до 5 см

абсолютным спиртом и перемешивают. Затем проводят реакцию согласно 6.9.6. Проводят параллельные измерения в двух пробирках и берут средний результат. В третьей пробирке готовят холостую пробу согласно 6.9.6.

      8 Обработка результатов

Массовую долю витамина Е (токоферола)

, млн

, вычисляют по формуле

,                                                                         (2)

где

- масса витамина Е в анализируемом растворе продукта, установленная по калибровочному графику (по разнице показаний оптической плотности между анализируемым раствором и холостой пробой), мкг;

- общий объем анализируемого раствора в абсолютном спирте после экстракции, см

;

- объем спиртового раствора, взятый на проведение цветной реакции, см

;

- масса продукта, взятая на гидролиз, г.

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до второго десятичного знака и округляют до первого десятичного знака.

Относительная погрешность измерения массовой доли витамина Е -

±20%

при доверительной вероятности

=0,95.

Расхождение между результатами двух параллельных измерений не должно превышать 15% среднего арифметического значения результатов измерений.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% среднего арифметического значения результатов измерений.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

Библиография

[1]	ТУ 25-11-917-76 Испаритель ротационный ИР-1М
[2]	ТУ 25-1819.0021-90 Секундомеры механические "Слава"
[3]	ТУ 3-3.2164-89 Фотометр фотоэлектрический КФК-3
[4]	ТУ 3-КРАЮ.414216.001-90 Колориметр фотоэлектрический концентрационный КФК-2Ц.
[5]	ГФ СССР-X ст.6 Кислота аскорбиновая
[6]	ТУ 6-09-15-139-86 Батофенантролин
[7]	ТУ 8П-399-70 Ортофенантролин
[8]	ТУ 18-3-2-76 Спирт абсолютный
[9]	ГФ СССР-X ст.695 Токоферола ацетат (витамина Е ацетат)
[10]	ВФС 42-1642 Раствор -токоферола ацетата 5, 10 или 30% в масле
[11]	ТУ 6-09-5360-87 Фенолфталеин
[12]	ТУ 6-02-1244-83 Эфир петролейный