ГОСТ 32277-2013 Средства воспроизводства. Сперма. Методы испытаний физических свойств и биологического, биохимического, морфологического анализов.
ГОСТ 32277-2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Средства воспроизводства
СПЕРМА
Методы испытаний физических свойств и биологического, биохимического, морфологического анализов
Product for reproduction. Semen. Physical, biological, biochemical, morphological analysis technique
МКС 11.220
Дата введения 2015-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии), Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ") и Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Научно-исследовательский институт племенного дела" (ФГБНУ "ВНИИплем")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации (ТК 148)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 59-П от 27 сентября 2013 г.)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 октября 2013 г. N 1261-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 года
5 Взамен ГОСТ 20909.3-75, ГОСТ 20909.4-75, ГОСТ 20909.5-75 и ГОСТ 20909.6-75
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на свежеполученную неразбавленную, свежеполученную разбавленную и замороженную сперму производителей сельскохозяйственных животных (далее - сперма) и устанавливает методы испытаний физических свойств, биологического, биохимического и морфологического анализов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.00-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 302-79 Термометр медицинский максимальный стеклянный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 2290-76 Бальзам пихтовый. Технические условия
ГОСТ 2874-82 Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством
ГОСТ 4014-75 Красители органические. Нигрозин водорастворимый. Технические условия
ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4478-78 Реактивы. Кислота сульфосалициловая 2-водная. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-1-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и анализа**
ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 5962-67 Спирт этиловый ректификованный. Технические условия
ГОСТ 6507-90 Микрометры. Технические условия
ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия.
ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 9307-78 Красители органические. Нигрозин спирторастворимый. Технические условия
ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Общие технические условия
ГОСТ 9949-76 Ксилол каменноугольный. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия
ГОСТ 21239-93 (ИСО 7741-86) Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний
ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 25706-83 Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования
ГОСТ 27775-88 Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. Термины и анализа*
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 32222-2013 Средства воспроизводства. Сперма. Методы отбора проб
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 27775.
4 Отбор проб спермы
Отбор проб - по ГОСТ 32222.
Для анализов используют свежеполученную неразбавленную и разбавленную сперму, хранившуюся при температуре 30°С - 35°С не более 30 мин с момента ее получения, и замороженную сперму, хранившуюся не более 30 мин после оттаивания.
5 Методы испытаний физических свойств
5.1 Определение цвета
Цвет спермы определяют визуально при хорошем естественном или искусственном освещении.
5.2 Определение объема и массы эякулята
5.2.2 Массу эякулята в граммах (г) определяют взвешиванием на лабораторных весах типа ВЛТ-500 (ВТК-500) с погрешностью не более ±0,08 г по ГОСТ 24104.
5.3 Определение рН
5.3.1 Сущность метода
рН спермы определяют потенциометрическим методом. Сущность метода заключается в измерении электродного потенциала, возникающего при погружении электрода в сперму.
5.3.2 Средства измерений, материалы и реактивы
Для проведения анализа применяют:
- рН-метр-милливольтметр с диапазоном измерения от 0 до 14 ед. рН, погрешностью ±0,04 ед. рН;
- бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026;
- калий хлористый по ГОСТ 4234;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
Допускается использование других средств измерений с аналогичными метрологическими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
5.3.3 Проведение анализа
рН спермы определяют с помощью рН-метра-милливольтметра в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора.
5.3.4 Обработка результатов
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух измерений, выполненных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1. Допускаемые расхождения между результатами двух измерений не должны превышать ±0,1 ед. рН.
5.4 Определение осмотического давления
5.4.1 Сущность метода
Сущность метода определения осмотического давления свежеполученной неразбавленной спермы заключается в установлении разности температур в точке таяния льда и в точке истинной кристаллизации.
5.4.2 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Для проведения анализа применяют:
- термометр лабораторный типа ТЛ-50 с конусным шлифом N 4 с диапазоном измеряемых температур от минус 30°С до 40°С, ценой деления 0,20°С;
- мешалку проволочную с петлей, входящей в пробирку с размером диаметра 1,4-1,7 см;
- штатив лабораторный;
- кольца резиновые толщиной 2-3 мм;
- лед или снег;
- углекислоту твердую (сухой лед) или азот жидкий по ГОСТ 9293 или натрий хлористый по ГОСТ 4233;
- спирт этиловый технический по ГОСТ 17299;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.
5.4.3 Подготовка к проведению анализа
5.4.3.1 Готовят термос с одной из следующих охлаждающих смесей:
- лед с поваренной солью в соотношении 3:1;
- смесь этилового спирта с сухим льдом;
- этиловый спирт, охлажденный пропусканием через змеевик паров жидкого азота.
Температуру в термосе постоянно поддерживают на уровне минус 38°С - минус 40°С.
5.4.3.2 Перед началом анализа проводят настройку термометра, устанавливая на нем нулевую точку. Для этого термометр вначале помещают в мелкораздробленный тающий лед или снег и наблюдают уровень ртути в капилляре.
Затем устанавливают нулевую точку на термометре по замерзанию дистиллированной воды, определяя ее следующим образом. Закрепляют на штативе пробирку с размером диаметра 2,2-2,5 см. Во вторую пробирку меньшего диаметра наливают дистиллированную воду в таком объеме, чтобы после введения в пробирку термометра с надетой на него проволочной мешалкой его ртутный резервуар был полностью погружен в воду. На пробирку с термометром и дистиллированной водой надевают два резиновых кольца. Подготовленную таким образом пробирку с термометром вставляют в пробирку, закрепленную в штативе. Пробирки с термометром опускают в термос (ванну) с охлаждающей смесью. В процессе охлаждения воду беспрерывно помешивают вертикальными движениями мешалки, постоянно наблюдая за понижением уровня ртути в капилляре. При переохлаждении воды начинает выделяться теплота кристаллизации и столбик ртути быстро поднимается до истинной температуры замерзания воды, оставаясь некоторое время на этом уровне. Температуру замерзания воды регистрируют с точностью до 0,2°С.
5.4.4 Проведение анализа
В промытую и тщательно подсушенную фильтровальной бумагой пробирку наливают сперму в таком количестве, чтобы ртутный резервуар термометра был полностью погружен в нее. Пробирку с термометром помещают во вторую пробирку, закрепленную в штативе. Температуру замерзания спермы устанавливают по 5.4.3.2. При определении осмотического давления разных эякулятов пробирку и термометр после каждого испытания тщательно ополаскивают дистиллированной водой и просушивают.
5.4.5 Обработка результатов
Результат округляют до третьего десятичного знака.
Пример
Нулевая точка на термометре установлена на уровне 4,46°С. После трехкратного измерения истинная температура замерзания спермы составляла 3,80°С, 3,81°С и 3,80°С. Таким образом, среднеарифметическое значение температуры замерзания спермы составит 3,80°С.
Следовательно, осмотическое давление при температуре 0°С вычисляют по формуле
Результат округляют до второго десятичного знака.
Пример
5.5 Определение концентрации сперматозоидов
Концентрацию сперматозоидов определяют в счетных камерах, с помощью измерения светорассеяния и специальных компьютерных программ.
5.5.1 Определение концентрации сперматозоидов в счетной камере
5.5.1.1 Сущность метода заключается в подсчете сперматозоидов в счетной камере для форменных элементов крови.
5.5.1.2 Оборудование, материалы и реактивы
Для проведения анализа применяют:
- камеру счетную Горяева для анализа количества форменных элементов крови;
- баллон резиновый или груша резиновая;
- эритроцитарный смеситель (меланжер);
- салфетки марлевые по ГОСТ 9412;
- натрий хлористый по ГОСТ 4233, 3%-ный раствор;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;
- эфир петролейный марки 40-70.
Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками, а также материалов и реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
5.5.1.3 Проведение анализа
Сперму тщательно перемешивают и набирают до метки "1" в меланжер, предварительно обработанный смесью спирта и эфира в соотношении 1:1 и высушенный. Для разбавления спермы и обездвиживания сперматозоидов в меланжер вводят до метки "101" 3%-ный раствор хлористого натрия (разбавление спермы в 100 раз). Зажав большим и указательным пальцами оба конца наполненного меланжера, тщательно перемешивают содержимое, переворачивая меланжер вверх и вниз не менее 60 раз.
Удалив из меланжера первые три-четыре капли, кончик меланжера обтирают марлевой салфеткой и осторожно наносят одну каплю смеси на край притертого к счетной камере шлифовального покровного стекла. Капля, затекая под стекло, заполняет камеру Горяева. Подсчет сперматозоидов проводят при таком увеличении микроскопа, чтобы в поле зрения помещалось 16 малых (один большой) квадратов. Сперматозоиды подсчитывают в 80 малых (пяти больших) квадратах, расположенных по диагонали. Для подсчета сперматозоидов, расположенных в глубине камеры, постоянно вращают микровинт. Положение сперматозоидов внутри или вне квадрата определяют по месту нахождения головки. Головки, расположенные на левой и верхней линиях, относят к тому квадрату, в котором проводят подсчет. Головки можно также учитывать на правой и нижней линиях.
5.5.1.4 Обработка результатов
Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.