ГОСТ 29032-91
Группа Н59
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ
Методы определения оксиметилфурфурола
Fruit and vegetable products. Methods for determination of hydroxymethylfurfural
МКС 67.080.01
ОКСТУ 9109
Дата введения 1992-07-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности, Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторско-технологическим институтом по переработке фруктов и винограда и ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
РАЗРАБОТЧИКИ
В.И.Рогачев, д-р техн. наук; С.Ю.Гельфанд, канд. техн. наук; Т.Н.Медведева, канд. техн. наук; А.И.Погосян, канд. техн. наук; Э.В.Дьяконова, канд. техн. наук; А.Э.Мельник; С.Р.Цимбалаев; Е.В.Йорга; канд. техн. наук; И.М.Соболева
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 17.06.91 N 882
3. Раздел I настоящего стандарта "Фотометрический метод" подготовлен с учетом требований международного стандарта ИСО 7466-86* "Продукты переработки плодов и овощей. Определение содержания 5-оксиметилфурфурола" с изменениями, отражающими потребности народного хозяйства
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.
Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения оксиметилфурфурола, образующегося при тепловой обработке плодов и овощей.
Требования стандарта являются обязательными.
1. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД
1.1. Сущность метода
Метод основан на измерении интенсивности окраски производного оксиметилфурфурола с
-толуидином и барбитуровой кислотой в водной вытяжке из пробы продукта. Нижний предел определения оксиметилфурфурола - 2 мг/кг.
Метод не распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.
1.2. Отбор и подготовка проб
Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка их к испытаниям - ГОСТ 26671.
1.3. Аппаратура, материалы, реактивы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 20 г не ниже 3-го класса точности**.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 500 г 4-го класса точности.
________________
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. С 1 января 2010 г. на территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
Колориметр фотоэлектрический лабораторный по НТД с пределами измерений оптической плотности от 0 до 2 и пределом допускаемой основной абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания не более ±1%, со светофильтром с длиной волны (540±10) нм и кюветами рабочей длины 30 мм.
Стаканы по ГОСТ 25336 исполнения 1 типа В вместимостью 50 и 150 см 
.
Колба плоскодонная по ГОСТ 25336 исполнения 2 вместимостью 250 см .
Воронка лабораторная по ГОСТ 25336 типа В диаметром 56 мм и высотой 80 мм.
Пипетка по НТД исполнения 6 или 7 вместимостью 10 см
.
Пипетка по НТД исполнения 4 или 5 вместимостью 2 см
.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 50, 100 или 250 см .
Цилиндр мерный по ГОСТ 1770 вместимостью 25 или 50 см .
Баня водяная.
Электроплитка по ГОСТ 14919.
Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с пределом допускаемой погрешности ±1 °С в диапазоне измерений 0-100 °С.
Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.
Оксиметилфурфурол кристаллический, перекристаллизованный при температуре (115±3) °С и давлении 1,3 Па.
Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х.ч., раствор концентрацией 150 г/дм (раствор Карреза I).
Цинк уксуснокислый 2-водный по ГОСТ 5823, ч.д.а., раствор концентрацией 300 г/дм (раствор Карреза II).
-Толуидин, ч.
Кислота барбитуровая, ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч.
Спирт изопропиловый (2-пропанол) по ГОСТ 9805, ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
1.4. Подготовка к испытанию
1.4.1. Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола
0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. 1 см
полученного раствора переносят пипеткой в другую колбу вместимостью 100 см
, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 мкг/см
. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в сосуде с притертой пробкой, завернутой в алюминиевую фольгу, не более 2 мес.
1.4.2. Приготовление реактивов для проведения цветной реакции
Реактив 1. 10,00 г
-толуидина растворяют в 60-70 см
изопропилового спирта при нагревании на водяной бане при температуре 45-50 уксусной кислоты, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
, охлаждают до 20 °С и доводят до метки изопропиловым спиртом.
Реактив 2. 0,50 г барбитуровой кислоты растворяют в 60-70 см
дистиллированной воды при нагревании на водяной бане при температуре 45-50 °С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
, охлаждают до 20 °С и доводят до метки дистиллированной водой.
Реактивы 1 и 2 хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в плотно закрытых сосудах, завернутых в алюминиевую фольгу. Срок годности реактивов 1 и 2 при этих условиях - 1 мес.
1.4.3. Построение градуировочного графика
1.4.3.1. Приготовление контрольного раствора
В стакан вместимостью 50 см
вносят пипеткой 4,5 см
дистиллированной воды и 7,5 см
реактива 1, перемешивают.
1.4.3.2. Приготовление рабочих растворов
В 6 стаканов вместимостью 50 см
вносят пипеткой 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 и 3,0 см
основного раствора оксиметилфурфурола. Дистиллированной водой с помощью пипетки доводят объем содержимого до 3,0 см
. Масса оксиметилфурфурола в каждом растворе равна соответственно 5, 10, 15, 20, 25 и 30 мкг.
1.4.3.3. Проведение цветной реакции и фотометрирование
В стаканы с рабочими растворами добавляют по 7,5 см
реактива 1, перемешивают. С содержимым каждого стакана поочередно проводят следующие операции. В стакан пипеткой вносят 1,5 см
реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3-4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (540±10) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.
1.4.3.4. По полученным данным строят график зависимости оптической плотности от количества оксиметилфурфурола в микрограммах.
1.5. Проведение испытания
1.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца
Навеску продукта массой 40,0-60,0 г (в зависимости от предполагаемого содержания оксиметилфурфурола) помещают в стакан вместимостью 150 см
, смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см
. Цилиндром добавляют 15 см
раствора Карреза I и 15 см
раствора Карреза II. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный складчатый фильтр.
1.5.2. Проведение цветной реакции и фотометрирование
В два стакана вместимостью 50 см
вносят пипеткой 3 см
водной вытяжки из образца и 7,5 см
реактива 1, перемешивают. В один из стаканов добавляют 1,5 см
дистиллированной воды, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра (контрольный раствор). В другой стакан добавляют 1,5 см
реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3-4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (540±10) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.
1.6. Обработка результатов
Массовую долю оксиметилфурфурола (
), млн
(мг/кг), вычисляют по формуле
,
где
- масса оксиметилфурфурола в испытуемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг;
- объем водной вытяжки из пробы продукта, см
;
- объем вытяжки, используемой для проведения цветной реакции, см
;
- масса навески продукта, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми не должно превышать 5% (
=0,95).
2. МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Сущность метода
Метод основан на экстракции оксиметилфурфурола из продукта органическим растворителем и определении оксиметилфурфурола с помощью метода тонкослойной хроматографии. Нижний предел определения оксиметилфурфурола - 8 мг/кг.
Метод распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.
2.2. Отбор и подготовка проб
Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по п.1.2.
2.3. Аппаратура, материалы, реактивы
При проведении испытания используют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п.1.3, за исключением фотоэлектроколориметра,
-толуидина, барбитуровой и уксусной кислот со следующими дополнениями:
- микрошприц МШ-10 вместимостью 0,01 см
;
- камеру для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой;
- колбу круглодонную по ГОСТ 25336 исполнения 2 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 50 см ;
- распылитель стеклянный с грушей;
- вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;
- пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" 15х15 см фирмы Кавалиер, ЧССР;
- эфир этиловый технический по НТД, не содержащий перекисей;
- эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, ч.д.а. (этилацетат);
- кислоту муравьиную по ГОСТ 5848;
- бензидин, раствор в муравьиной кислоте концентрацией 5 г/дм
;
- натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч., прокаленный.
2.4. Подготовка к испытанию
2.4.1. Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола
0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см
, доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. 1 см
полученного раствора переносят пипеткой в другую мерную колбу вместимостью 100 см
, доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 мкг/см
. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в сосуде с притертой пробкой, плотно завернутой в алюминиевую фольгу, не более 6 мес.
2.5. Проведение испытания
2.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца
Водную вытяжку из образца готовят по п.1.5.1.
2.5.2. Экстрагирование оксиметилфурфурола из водной вытяжки
В стакан вместимостью 50 см
пипетками вносят 1,0 см
водной вытяжки из образца и 10,0 см
этилового эфира. Содержимое перемешивают в течение 1 мин, затем в стакан добавляют около 5 г сернокислого натрия. Содержимое стакана перемешивают стеклянной палочкой, разрушая крупные комки соли. Смеси дают отстояться, после чего эфир декантируют через ватный тампон в круглодонную колбу. Остаток в стакане промывают еще два раза свежими порциями эфира, каждый раз тщательно перемешивая содержимое стакана. Эфирный экстракт упаривают досуха на водяной бане при температуре 35-40 °С. Остаток в круглодонной колбе перерастворяют в 0,5 см
этилацетата.
2.5.3. Хроматографическое разделение
На пластинку "Силуфол" снизу и сверху наносят две тонкие карандашные линии на расстоянии 2 см от краев. На нижней линии отмечают 12 точек на расстоянии 8-10 мм друг от друга, при этом расстояние от крайних точек до краев пластины должно быть не менее 1 см. В шесть точек микрошприцем наносят различные объемы основного раствора оксиметилфурфурола, чередуя пятна со свободными точками. Количество оксиметилфурфурола в пятнах должно быть от 0,025 до 0,150 мкг. В оставшиеся точки микрошприцем наносят этилацетатные экстракты из исследуемых образцов (от одного до шести), объемом 0,001-0,020 см
в зависимости от ожидаемого содержания оксиметилфурфурола. Пластинку стартовой линией вниз помещают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную этилацетатом на высоту около 1 см. Развитие хроматограммы проводят до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и сушат в вытяжном шкафу до исчезновения запаха растворителя.
2.5.4. Обнаружение оксиметилфурфурола
Пластинку опрыскивают из распылителя раствором бензидина, затем сушат в вытяжном шкафу в течение 5-10 мин. Оксиметилфурфурол обнаруживают в виде желтых пятен. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету и хроматографической подвижности пятнам основного раствора оксиметилфурфурола, свидетельствует о наличии оксиметилфурфурола в продукте. Количество оксиметилфурфурола определяют, сравнивая размер и интенсивность окраски пятен основного раствора оксиметилфурфурола и пятна оксиметилфурфурола в анализируемой пробе.
2.6. Обработка результатов
Массовую долю оксиметилфурфурола (
), млн
(мг/кг), вычисляют по формуле
,
где
- количество оксиметилфурфурола, обнаруженное в пятне, мкг;
- объем водной вытяжки из пробы продукта, см
;
- общий объем этилацетатного экстракта, см
;
- масса навески продукта, г;
- объем водной вытяжки, используемый для экстрагирования оксиметилфурфурола, см
;
- объем этилацетатного экстракта, наносимого на пластинку, см
.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми не должно превышать 20% (
=0,95).
