ГОСТ 32014-2012 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания метаболитов нитрофуранов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.
ГОСТ 32014-2012
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточного содержания метаболитов нитрофуранов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором
Food products, food raw materials. Method of determination of the nitrofuran mytobolites by high performance liquid chromatography - mass spectrometry (HPLC-MS)
МКС 67.050
67.100
67.120
Дата введения 2014-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ"), Федеральным государственным учреждением "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" (ФГУ "ЦНМВЛ")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 3 декабря 2012 г. N 54-П)
За принятие проголосовали:
|
|
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM
| Минэкономики Республики Армения |
Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия | KG | Кыргызстандарт |
Россия | RU | Росстандарт |
Таджикистан | TJ | Таджикстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
(Поправка. ИУС N 3-2020).
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 июня 2013 г. N 239-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 года
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53992-2010
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
ВНЕСЕНО Изменение N 1 (с поправкой, опубликованной в ИУС N 6, 2017 год), утвержденное и введенное в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 октября 2016 года N 1523-ст c 01.03.2017
ВНЕСЕНЫ: поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2017 год; поправка, опубликованная в ИУС N 10, 2018 год; поправка, опубликованная в ИУС N 2, 2020 год; поправка, опубликованная в ИУС N 3, 2020 год
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на молоко, молочные продукты, яйца, яичный порошок, мясо и мясные продукты, включая мясо и продукты из мяса птицы, мед, рыбу, нерыбные объекты и продукцию из них и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения остаточного содержания метаболитов нитрофуранов в диапазоне измерений от 1,0 до 1000,0 мкг/кг.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ ИСО 5725-6-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике"
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79** Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
________________
** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты"
ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия
ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначения чистоты
ГОСТ 14261-77 Кислота соляная особой чистоты. Технические условия
ГОСТ 19792-2001*** Мед натуральный. Технические условия
________________
*** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644-2011 "Мед натуральный. Технические условия"
ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия
ГОСТ 24104-2001**** Весы лабораторные. Общие технические требования
________________
**** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания"
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
ГОСТ 26809.2-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 29245-91 Консервы молочные. Методы определения физических и органолептических показателей
ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 31654-2012 Яйца куриные пищевые. Технические условия
ГОСТ 31720-2012 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
(Измененная редакция, Изм. N 1), (Поправка. ИУС N 10-2018).
3 Сущность метода
3.1 Определение остаточных количеств метаболитов нитрофуранов (приложение А), образующих в организме стабильные связи с белками, проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС).
3.2 Количественное определение остаточного содержания метаболитов нитрофуранов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений при помощи градуировочной кривой.
3.3 Детектирование анализируемых проб проводят в режиме регистрации выбранных реакций.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы
4.1 При определении содержания метаболитов нитрофуранов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:
- масс-спектрометр с диапазоном измерения от 100 до 500 атомных единиц массы (а.е.м.), массовым разрешением не менее 500, точностью измерения массы не ниже 0,2 а.е.м., с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим МС/МС);
- систему высокоэффективную жидкостную хроматографическую, состоящую из бинарного насоса со смесителем, термостата хроматографической колонки, обеспечивающего температуру нагрева до 50 °С;
- компьютер с установленным программным обеспечением для управления масс-спектрометром и обработки результатов масс-спектрометрических измерений;
- весы лабораторные I или II класса точности с наибольшим пределом взвешивания 220 и 500 г, с ценой деления шкалы 0,1 и 1,0 мг соответственно по ГОСТ 24104;
- рН-метр с набором электродов, с диапазоном измерений от 0 до 14 ед. рН и с пределами абсолютной погрешности измерений ±0,01 рН;
- модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 40 °С;
- измельчитель-гомогенизатор лабораторный;
- встряхиватель вибрационный для пробирок орбитального типа движения с амплитудой встряхивания 3 мм и диапазоном скоростей от 150 до 2500 об/мин;
- ротационный испаритель со скоростью вращения от 20 до 280 об/мин и температурным диапазоном нагревательной бани от 30 °С до 100 °С;
- колонку хроматографическую обращенно-фазную длиной не менее 150 мм с диаметром частиц сорбента не более 3,5 мкм;
- устройство вакуумное для твердофазной экстракции;
- фильтры мембранные с размером пор не более 0,45 мкм;
- пробирки мерные стеклянные П-1-5-0,1ХС, П-2-10-14/23 по ГОСТ 1770;
- колбы круглодонные К-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336;
- пипетки стеклянные градуированные по ГОСТ 29227;
- колбы мерные стеклянные 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770;
- цилиндры мерные стеклянные 1-25 (100, 500)-1 по ГОСТ 1770;
- бумагу универсальную индикаторную для определения рН;
- камеру лабораторную морозильную с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном температур от минус 18 °С до минус 24 °С.
Допускается использование других средств измерений, оборудования и материалов с метрологическими и техническими характеристиками не ниже указанных.
(Измененная редакция, Изм. N 1), (Поправка. ИУС N 2-2020).
4.2 При определении содержания метаболитов нитрофуранов применяют следующие реактивы:
- кислоту соляную по ГОСТ 14261, ос.ч.;
- метанол по ГОСТ 6995, х.ч.;
- н-гексан, х.ч.;
- этилацетат по ГОСТ 22300, х.ч.;
- ацетон по ГОСТ 2603;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;
- эфир диэтиловый (серный);
- метил-трет-бутиловый эфир для хроматографии;
- формиат аммония с содержанием основного вещества не менее 99,0%;
- муравьиную кислоту по ГОСТ 5848, ч.д.а;
- 2-нитробензальдегид (НБА) с содержанием основного вещества 98%;
- натрий фосфорнокислый додекагидрат;
- натрий гидроокись по ГОСТ 4328, ч.д.а.;
- ацетонитрил, ч.д.а.;
- воду деионизованную;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2 (х.ч.) или 3 (ч.д.а.) по ГОСТ 13867.
4.3 Для определения содержания метаболитов нитрофуранов применяют следующие стандартные образцы:
4.3.1 Стандартные образцы метаболитов нитрофуранов:
- 3-амино-2-оксазолидинон (АОЗ) с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Vetranal, 33347)*;
- 3-амино-5-метилморфолино-2-оксазолидинон (АМОЗ), с содержанием основного вещества не менее 99,0% (Witega, NF003)*;
- 1-амино-гидантоин (АГД) гидрохлорид с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Witega, NF001 )*;
- семикарбазид (СЕМ) гидрохлорид с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Vetranal, 33656)*;
- 3-[(2-нитрофенил) метилен]-амино-2-оксазолидинон (НФ-АОЗ) с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Witega, NF013)*;
- 5-метилморфолино-3-[(2-нитрофенил)метилен]-3-амино-2-оксазолидинон (НФ-АМОЗ) с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Witega, NF011)*;
- 1-[(2-нитрофенил)метилен]-амино-гидантоин (НФ-АГД) с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Witega, NF009)*;
- (2-нитрофенил)метилен-семикарбазид (НФ-СЕМ) с содержанием основного вещества не менее 99,0%, (Witega, NF015)*.
_______________
* Стандартный образец является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
4.3.2 Внутренние стандарты метаболитов нитрофуранов:
_______________
* Стандартный образец является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
5 Требования безопасности
5.1 Используемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го классов опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005.
5.2 Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией.
5.3 Операции по приготовлению градуировочных растворов следует проводить под тягой в вытяжном шкафу.
5.4 При проведении испытаний следует соблюдать требования ГОСТ 12.2.085 и правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением, действующие на территории государства, принявшего стандарт.
5.5 При выполнении измерений на хромато-масс-спектрометре следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5.6 К выполнению измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием допускаются лица, владеющие техникой ВЭЖХ-МС/МС и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.
6 Порядок подготовки к проведению измерений
6.1 Отбор проб
6.1.1 Отбор проб проводят в соответствии с порядком по отбору проб пищевой продукции с целью лабораторного контроля качества и безопасности, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
6.1.2 Отбор проб мяса и мясных продуктов, включая мясо и продукты из мяса птицы, проводят в соответствии с [1].
6.1.3 Отбор проб молока и молочных продуктов проводят в соответствии с ГОСТ 26809.1 и ГОСТ 26809.2.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.1.4 Отбор проб меда проводят в соответствии с ГОСТ 19792.
6.1.5 Отбор проб яиц и яичного порошка производят в соответствии с ГОСТ 31654 и ГОСТ 31720.
6.1.6 Отбор проб рыбы, нерыбных объектов и продукции из них проводят по ГОСТ 31339. Срок хранения отобранных проб при температуре от 2°С до 8°С - двое суток. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток образцы должны быть заморожены при температуре минус 20°С на срок хранения не более 2 мес.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.2 Подготовка хромато-масс-спектрометрической системы к выполнению измерений
Подготовку хромато-масс-спектрометра к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора.
При этом должны быть соблюдены следующие условия:
|
|
- температура окружающего воздуха
| от 15°С до 30°С; |
- атмосферное давление
| от 84 до 106 кПа; |
- относительная влажность воздуха | от 20% до 80%. |
(Поправка. ИУС N 7-2017).
6.3 Приготовление растворов
Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.
Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.
Срок хранения при комнатной температуре в сосуде из полимерных материалов - не более 1 мес.
Срок хранения при комнатной температуре - не более одной недели.
Срок хранения при комнатной температуре - не более 6 мес.
6.3.6 Приготовление раствора муравьиной кислоты в смеси метил-трет-бутиловый эфир/метанол (90/10)
Раствор используют свежеприготовленным.
6.3.7 Приготовление растворов элюентов мобильной фазы А и Б
Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.
Срок хранения при комнатной температуре - не более 1 мес.
6.3.8 Приготовление растворителя для проведения ВЭЖХ-МС/МС
6.4 Приготовление градуировочных растворов
_______________
6.4.3 Приготовление смеси нитрофенильных производных АОЗ, АМОЗ, СЕМ, АГД (НФ-смесь)
6.4.4 Приготовление смеси АОЗ, АМОЗ, СЕМ, АГД (смеси метаболитов)
6.4.5 Приготовление раствора внутреннего стандарта
Полученный раствор разбавляют в 10 раз метанолом и используют в качестве внутреннего стандарта.
6.4.6 Приготовление смеси нитрофенильных производных АОЗ, АМОЗ, АГД и СЕМ (НФ-смесь 1)
6.4.8 Приготовленные растворы хранят в морозильнике при температуре не выше минус 20 °С в течение 1,5 лет. Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин.
6.5 Построение градуировочной характеристики
6.5.2 Для получения градуировочных данных используют не менее трех уровней концентраций матричных градуировочных растворов. Определяемые в анализируемом образце массовые концентрации метаболитов нитрофуранов должны находиться в диапазоне концентраций градуировочной характеристики.
6.5.3 При градуировке хроматографа анализируют матричные градуировочные растворы различных уровней концентраций в условиях, приведенныхв 6.2, 6.6. Затем, используя программное обеспечение для сбора и обработки хроматографических данных, для метаболитов нитрофуранов устанавливают градуировочные характеристики в виде зависимостей отношения площадей хроматографических пиков соответствующего соединения к площади пика внутреннего стандарта от массовой концентрации соединения в образце.
Построение графиков допускается проводить при помощи программы обработки данных ВЭЖХ-МС/МС или при помощи программы Excel (Microsoft Office).
6.5.4 Вычисление площади пика проводят для каждого дочернего иона анализируемых соединений. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, дочернему иону. Для подтверждения наличия метаболитов нитрофуранов рассчитывают отношения площади пика двух дочерних ионов для каждого соединения, которые должны соответствовать значениям, указанным в таблице 1.
Таблица 1 - Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электроспрея с регистрацией положительных ионов
|
|
|
Метаболиты нитрофуранов | Ион предшественник, m/z | Дочерние ионы, m/z |
2-НФ-АОЗ | 236,2 | 134,0/104,1 |
2-HФ- АОЗ | 240,3 | 134,0/149,1 |
2-НФ-АМОЗ | 335,2 | 291,1/262,1 |
2-HФ- AMO3 | 340,3 | 296,2/265,2 |
2-НФ-АГД | 249,2 | 134,0/104,1 |
2-НФ- -АГД | 251,9 | 133,9/179,1 |
2-НФ-СЕМ | 209,2 | 191,9/166,0 |
2-НФ-1,2- , -СЕМ | 212,2 | 168,0/195,2 |
6.5.5 Расчетные концентрации для обоих фрагментных ионов каждого метаболита нитрофуранов должны совпадать в пределах 20%.
Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата коэффициента корреляции для градуировочной кривой каждого фрагментного иона каждого метаболита нитрофуранов не менее 0,98.
6.6 Хроматографические условия измерений
6.6.1 Хромато-масс-спектрометр включают и настраивают в соответствии с техническим руководством по его эксплуатации и устанавливают следующие хроматографические параметры:
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элюентов согласно 6.3.7): в начальный момент - соотношение фазы А/Б по объему (80/20), с 0,0 по 8,0 мин - градиентное элюирование к 95% фазы Б, с 8,0 по 10,0 мин - элюирование в 95% фазы Б, с 10,0 по 10,5 мин - переход к элюированию в фазе А/Б по объему (80/20), с 10,5 по 15,0 мин - уравновешивание колонки в фазе А/Б по объему (80/20).
6.6.2 Для настройки масс-спектрометрического детектора применяют следующие параметры:
- температура источника - 120 °С;
- температура газа десольвации - 450 °С;
6.7 Подготовка лабораторной посуды и реактивов
6.7.1 Мойку и сушку посуды следует проводить в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией. Не допускается проведение подготовки посуды в данном помещении для других видов анализов. Для сушки лабораторной посуды и подготовки реактивов необходимо использовать отдельные сушильные шкафы.
6.7.2 Стеклянную посуду подвергают стандартной процедуре очистки лабораторной посуды с последующей последовательной промывкой органическими растворителями: этилацетатом (однократно), ацетоном (дважды).
6.7.3 Процедуру промывки органическими растворителями следует проводить в вытяжном шкафу. Рекомендуется на стадиях промывки использовать ультразвуковую баню. Окончательную сушку посуды проводят в сушильном шкафу, установленном в вытяжном шкафу, при температуре от 105 °С до 110 °С.
7 Порядок выполнения измерений
7.1 Обработка проб органов, тканей животных, рыбы, нерыбных объектов и продукции из них*
________________
* Измененная редакция, Изм. N 1.
7.1.2 Удаление несвязанных метаболитов*
_______________
* При определении связанных (образующих комплексы с белками) метаболитов, до процедуры гидролиза и дериватизации, необходима предварительная отмывка образцов от несвязанных (находящихся в свободном состоянии) метаболитов. При определении общих метаболитов предварительную процедуру отмывки не используют.
_______________
7.2 Обработка проб меда
7.2.3 Процедуру нейтрализации образца осуществляют в соответствии с 7.1.4.
7.2.5 Перерастворение и подготовку к хроматографированию проводят в соответствии с 7.1.6.
7.3 Обработка проб яиц, молока и молочных продуктов
7.3.1 Подготовка проб к анализу
7.3.1.1 Яйца
Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе.
7.3.1.2 Молоко, сливки, сметана, кисломолочные напитки и продукты, сухие молочные продукты
Отобранные пробы перед исследованием тщательно перемешивают. Сухие молочные продукты восстанавливают по ГОСТ 29245 (пункт 3.4).
(Поправка. ИУС N 10-2018).
7.3.1.3 Сыр, творог, творожные изделия
10 г сыра, творога или творожных изделий взвешивают на часовом стекле, чашке Петри, переносят в ступку и тщательно растирают.
7.3.1.4 Масло
Перед исследованием пробу расплавляют на водяной бане при температуре 40 °С - 45 °С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
7.3.5 Перерастворение и подготовку к хроматографическому анализу проводят согласно 7.1.6.
7.4 ВЭЖХ-МС/МС анализ
7.4.1 Для определения остаточного содержания метаболитов нитрофуранов проводят анализ в условиях, указанных в 6.6.
7.4.2 Время удерживания метаболитов нитрофуранов определяют при анализе градуировочных растворов.
7.4.3 При анализе каждой партии проб проводят обработку "чистого образца" в соответствии с 7.1-7.3 в зависимости от типа исследуемой матрицы. Наличие пиков, значения времени, удерживания которых совпадают со значениями времени удерживания пиков определяемых компонентов, указывает на наличие контаминации анализируемых образцов при подготовке проб.
7.5 Обработка результатов хроматографического анализа
7.5.1 Расчеты содержания метаболитов нитрофуранов выполняют с помощью градуировочной характеристики следующим образом. Вычисляют отношение площади пика фрагментного иона к площади внутреннего стандарта с помощью программы обработки спектров, поставляемой вместе с хромато-масс-спектрометром. Затем, используя установленную градуировочную характеристику (см. 6.5), рассчитывают значение массовой концентрации соответствующего метаболита в подготовленной пробе. Расчеты проводят автоматически с помощью программы обработки данных для используемого в лаборатории масс-спектрометра.
7.5.2 За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (1а)
8 Метрологические характеристики
|
|
|
|
|
|
Метаболит | Относительная расширенная неопределенность , %, при 0,95 и диапазоне измерений содержания метаболитов нитрофуранов, мкг/кг | ||||
| св. 1,0 до 2,0 включ. | св. 2,0 до 5,0 включ. | св. 5,0 до 10,0 включ. | св. 10,0 до 100,0 включ. | св. 100,0 до 1000,0 включ. |
АОЗ | 36 | 34 | 21 | 18 | 14 |
АМОЗ | 43 | 36 | 26 | 19 | 14 |
АГД | 44 | 30 | 25 | 22 | 13 |
СЕМ | 56 | 40 | 22 | 22 | 11 |
9 Оформление результатов измерений
9.1 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде
10 Контроль качества результатов измерений
10.1 Контроль полноты извлечения внутреннего стандарта нитрофуранов и их метаболитов
10.1.1 Контроль извлечения внутренних стандартов нитрофуранов и их метаболитов выполняют в ходе каждого измерения (получения результата количественного химического анализа при соблюдении требований настоящего стандарта).
10.1.2 Рассчитанные программным обеспечением значения извлечения внутренних стандартов должны находиться в диапазоне от 40% до 130%. Если рассчитанное значение извлечения ниже или выше указанного диапазона, то результаты измерения содержания метаболита не принимают за окончательный результат. Проводят повторные исследования анализируемых проб.
10.2 Контроль неопределенности результатов измерений
При проведении испытаний рекомендуется в ходе анализа каждой партии образцов с использованием стандартной процедуры пробоподготовки (см. 7.1, 7.3) проводить анализ градуировочных растворов, приготовленных в соответствии с 6.4. Результаты измерений признают удовлетворительными при выполнении следующего неравенства:
Приложение А
(справочное)
Молекулярные структуры нитрофуранов и их метаболитов
А.1 Молекулярные структуры нитрофуранов и их метаболитов приведены на рисунке А.1.
|
|
 Фуразолидон |  АОЗ |
 Фуралтадон |  АМОЗ |
 Фурадонин |  АГД |
 Фурацилин |  СЕМ |
а - нитрофураны | б - метаболиты |
Рисунок А1
Приложение Б
(обязательное)
Контроль стабильности результатов измерений
Периодичность контроля стабильности результатов измерений регламентируют в руководстве по качеству лаборатории*.
Контроль стабильности результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения промежуточной прецизионности рутинного анализа с изменяющимися факторами "время" и "оператор".
- среднюю линию по формуле
- верхний предел действия по формуле
- верхний предел предупреждения по формуле
Библиография
|
|
|
[1] | ISO 17604:2003* | Microbiology of food and animal feeding stuffs - Carcass sampling for microbiological analysis (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор проб с туши для микробиологического анализа) |