Методические указания по методам контроля МУК 4.1.1247-03 Определение остаточных количеств бентазона в семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
МУК 4.1.1247-03
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств бентазона в семенах и масле сои методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
Дата введения 2003-07-01
УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
1. Вводная часть
Фирма-производитель: Август.
Торговое наименование: Корсар.
Действующее вещество: бентазон.
Структурная формула:
3-изопропил-1Н-2,1,3-бензотиадиазин-4(3Н)-он 2,2-диоксид (IUPAC)
3-(1-метилэтил)-1Н-2,1,3-бензотиадиазин-4(3Н)-он 2,2-диоксид (С.А.)
Молекулярная масса: 240,3.
Бесцветное кристаллическое вещество.
Температура плавления: 139,4-141 °С.
Давление паров при 20 °С: 0,17 мПа.
Вещество очень устойчиво к гидролизу, как в кислой, так и в щелочной средах, рКа 3,3 (24 °С). Разлагается на свету.
Гигиенические нормативы. ВМДУ бентазона в сое (семена и масло) - 0,1 мг/кг.
Область применения препарата: Корсар - селективный контактный гербицид. Адсорбируется главным образом листвой. Используется для защиты зимних и весенних зерновых, бобовых и других культур.
2. Методика определения бентазона в семенах и масле сои методом ВЭЖХ
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении бентазона методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов этилацетатом или водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1.
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода
Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг (л) | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (л) | Среднее значение определения, % (для каждого объекта 24) | Относительное стандартное отклонение ,% | Доверительный интервал среднего, 24, 0,95 |
Семена сои | 0,01 | 0,01-0,1 | 86,2 | 7,60 | 6,08 |
Масло сои | 0,02 | 0,02-0,2 | 87,6 | 7,20 | 5,76 |
2.1.3. Избирательность метода
Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
2.2. Реактивы и материалы
Ацетон, чда |
| |
Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или хч |
| ТУ 6-09-3534-87 |
Бумажные фильтры "красная лента" |
| ТУ 6.091678-86 |
Вода бидистиллированная, деионизированная |
| |
Бентазон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% |
|
|
Дихлорметан, хч |
| ТУ 2631-019-44493179-98 |
Калий углекислый, хч |
| |
Калий фосфорно-кислый 2-замещенный 3-водный, чда |
| |
Калия перманганат |
| |
Кальция хлорид, хч |
| ГОСТ 4161-77 |
Кислота ортофосфорная, чда 85%-ный раствор, хч |
| |
Кислота серная, хч |
| |
Натрий серно-кислый безводный, ч, свежепрокаленный |
| |
Натрия гидроксид, хч |
| |
Натрий двууглекислый |
| |
н-Гексан, хч свежеперегнанный |
| ТУ 2631-003-05807999-98 |
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - 0,02 М ортофосфорная кислота (40:60, по объему)
Силикагель 60 (40-63 ) (имп., производства Германии или Чехии) |
|
|
Стекловата |
|
|
Фосфора пентоксид, ч |
| МРТУ 6-09-5759-69 |
Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (50:50, по объему) |
|
|
Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (20:80, по объему) |
|
|
Этиловый эфир уксусной кислоты, чда |
|
2.3. Приборы и посуда
Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или аналогичный |
|
|
Колонка Symmetry - С18 (250 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная |
|
|
Предколонка Waters Symmetry - C18 (20 3,9) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) |
|
|
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные |
| ГОСТ 34104-80Е |
Установка ультразвуковая "Серьга" |
| ТУ 3.836.008 |
Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ |
| ТУ 1-01-0593-79 |
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М или аналогичный |
| ТУ 25-11-917-74 |
Бидистиллятор |
|
|
рН-метр универсальный ЭВ-74 |
| ГОСТ 22261-76 |
Насос водоструйный |
| МРТУ 42 861-64 |
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС |
| ГОСТ 10384-72 |
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29/32 ТС |
| ГОСТ 10384-72 |
Воронки лабораторные В-75-110 |
| |
Воронки делительные на 100 и 250 см ВД-3-100 (250) |
| ГОСТ 8613-75 |
Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 см |
| ГОСТ 1774-74 |
Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 см |
| |
Пипетки на 1, 2, 5, 10 см |
| ГОСТ 22292-74 |
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы семян хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С, перед проведением анализа их измельчают на лабораторной зерновой мельнице.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
2.5.2. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1-2 ч.
2.5.3. Приготовление растворов
2.5.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов
Берут точную навеску бентазона (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-0,02 М ортофосфорная кислота [40:60, по объему]). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
Внимание! Бентазон в растворах достаточно быстро разлагается под воздействием света, поэтому следует избегать длительного нахождения проб и стандартных растворов на свету.
При определении полноты извлечения для внесения в образец используют растворы бентазона, приготовленные из стандартного раствора последовательным разбавлением ацетонитрилом.
2.5.5. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация бентазона в растворе) в хроматограф вводят по 50 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации бентазона в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-этилацетат (20:80, по объему) и 30 мл смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.7. Проверка хроматографического поведения бентазона на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора бентазона с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1, затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.3) и анализируют на содержание бентазона по п.2.6.4.
Фракции, содержащие бентазон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п.2.6.4. Рассчитывают содержание бентазона в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
Примечание: параметры удерживания бентазона и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Определение бентазона в семенах сои
___________________
** В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п.2.6.3) дает удовлетворительные результаты дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.
2.6.2. Определение бентазона в масле сои
________________
* В случае образования сравнительно стойких эмульсий на стадии экстракции бентазона водным ацетоном для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку небольшое количество (до 5 мл) этилового спирта.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п.2.6.1 и 2.6.2 экстрактов семян или масла сои, количественно переносят двумя 5-мл порциями смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 50 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Бентазон элюируют 60 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
2.6.4. Условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.
Температура колонки 30±1 °С.
Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.
Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,02М ортофосфорная кислота в соотношении 40:60 (по объему).
Скорость потока элюента: 1 мл/мин
Рабочая длина волны 214 нм
Объем вводимой пробы 50 мкл
Время удерживания бентазона 12,2±0,2 мин
Линейный диапазон детектирования 0,1-2,00 мкг/мл
2.6.5. Обработка результатов анализа
Содержание остаточных количеств бентазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор бентазона 2 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории"*, общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская И.А., Юзихин О.С., Короткова Н.В.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.