ГОСТ 29112-91 Среды питательные плотные (для ветеринарных целей). Общие технические условия.
ГОСТ 29112-91
Группа Р35
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СРЕДЫ ПИТАТЕЛЬНЫЕ ПЛОТНЫЕ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Общие технические условия
Solid culture media (for veterinary aims). Specifications
МКС 11.220
ОКП 93 8880
Дата введения 1992-10-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным комитетом СССР по продовольствию и закупкам
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 30.09.01 N 1574
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта |
3.8.1 | |
3.9.1 | |
3.9.1 | |
1.2.2 | |
3.5.1 | |
3.9.1 | |
3.9.1 | |
3.7.1 | |
3.6.1 | |
3.5.1; 3.7.1 | |
3.9.1; 3.11.1 | |
3.5.1; 3.6.1; 3.7.1 | |
3.3.1; 3.5.1; 3.6.1; 3.7.1; 3.8.1; 3.9.1 | |
1.2.3 | |
3.7.1 | |
1.1.1 | |
1.2.1 | |
1.2.3 | |
1.3.2 | |
3.11.1 | |
3.8.1; 3.9.1 | |
3.3.1; 3.4.1; 3.5.1; 3.7.1; 3.11.1 | |
3.4.2 | |
3.7.1 | |
3.10 | |
3.5.1; 3.6.1; 3.7.1; 3.9.1; 3.11.1 | |
3.5.1; 3.7.1; 3.9.1 | |
ТУ 10-09-202 | 1.2.1 |
ТУ 38-106-293 | 1.2.2 |
ОСТ 64-009 | 1.2.2 |
ТУ 10-09-30 | 1.2.3 |
5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2004 г.
Настоящий стандарт распространяется на плотные питательные среды: агар мясопептонный (МПА), агар Хоттингера, агар печеночный, агар Сабуро, сусло-агар, предназначенные для выращивания микроорганизмов.
Требования и нормы, установленные в стандарте, являются обязательными.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Характеристики
1.1.1. Плотные питательные среды должны изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по ГОСТ 10444.1 или технологическим инструкциям (регламентам), утвержденным в установленном порядке.
1.1.2. Плотные питательные среды по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должны соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
|
|
|
|
|
|
Наименование показателя | Характеристика и норма | ||||
| МПА | Агар Хоттингера | Агар печеночный | Агар Сабуро | Сусло-агар |
Внешний вид | При 20°C - гель без посторонних включений | ||||
Цвет, %, не менее | 60 | 40 | 10 | 40 | 40 |
Прозрачность, %, не менее | 50 | 50 | 40 | 50 | 40 |
Прочность геля, г, не менее | 200 | 200 | 110 | 110 | 200 |
Массовая доля аминного азота, %, не менее | 0,06 | 0,12 | 0,06 | - | - |
Массовая доля полипептидов, %, не менее | 1,4 | 1,2 | 1,2 | 1,0 | - |
Массовая доля углеводов, %, не менее | - | - | - | - | 6,0 |
Концентрация водородных ионов (рН) | 7,2-7,6 | 7,2-7,6 | 7,2-7,4 | 6,4-7,0 | 6,4-7,0 |
Массовая доля хлоридов в пересчете на хлор-ион, % | 0,8±0,1 | - | - | ||
pNa | 0,82-0,98 | - | - | ||
Стерильность | Должны быть стерильными | ||||
Способность обеспечивать рост тест-штаммов микроорганизмов (оптическая плотность), не менее: |
|
|
|
|
|
Staphylococcus aureus "Лоссманов" | 0,5 | 0,8 | 0,3 | - | - |
Escherichia coli 675 | 0,4 | 0,6 | 0,5 | - | - |
Corynebacterium diphtheroides, 1911 | 0,4 | 0,7 | 0,3 | - | - |
Shigella flexneri, 1а 8516 | 0,2 | 0,4 | 0,2 | - | - |
Примечание. При проверке содержания хлорида натрия в плотных питательных средах определяют только один показатель: массовую долю хлоридов или pNa. | |||||
1.2. Упаковка
1.2.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками, сверху завязывают пергаментной бумагой по ГОСТ 1341. Флаконы закрывают резиновыми пробками по ТУ 38-106-293 и закрывают алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-009.
1.2.3. Стеклянные бутыли со средой упаковывают в ящики из пенополистирола по ТУ 10-09-30, флаконы обертывают алигнином по ГОСТ 12923, в холодное время года ватой или другими теплоизоляционными материалами и упаковывают в дощатые ящики по ГОСТ 10131, обеспечивающие неподвижность и целостность флаконов, массой брутто не более 20 кг.
1.2.4. Внутрь каждого ящика вкладывают этикетку с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, его количества в ящике, номера серии, номера контроля, даты упаковки, срока годности, номера или фамилии упаковщика.
1.3. Маркировка
1.3.1. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:
наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;
наименования препарата;
количества препарата в бутыли (флаконе);
"стерильно";
номера серии;
номера контроля;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
1.3.2. На каждое грузовое место (ящик) наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков "Хрупкое. Осторожно", "Беречь от солнечных лучей" и предупредительные надписи "Биопрепараты", "Беречь от мороза".
Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующие данные:
наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;
наименование препарата, его количество в ящике;
номер серии;
дату изготовления;
срок годности;
условия хранения;
массу брутто.
Совмещение транспортной маркировки и маркировки, характеризующей данные об упакованной продукции, на одной стороне транспортной тары не допускается.
2. ПРИЕМКА
2.1. Плотные питательные среды принимают сериями. Под серией понимают определенное количество плотной питательной среды, изготовленное за один технологический цикл, одновременно расфасованное, оформленное документом о качестве с указанием номера контроля.
2.2. Каждая серия плотных питательных сред на предприятии-изготовителе должна быть проверена ОБК (ОТК) предприятия-изготовителя.
2.4. Контроль качества среды по требованию потребителя проводит профильная лаборатория ВГНКИ ветпрепаратов.
2.6. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве среды. Результаты повторных испытаний распространяют на всю серию.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ
3.1. Отбор проб
Из каждой единицы выборки (бутылей) стеклянной трубкой в стерильных условиях отбирают разовые пробы (сверху, из середины, снизу). Предварительно среду расплавляют в водяной бане.
Из каждой единицы выборки флаконов отбирают 6-10 флаконов со средой. Одну часть флаконов (3-5 шт.) используют для контроля, вторую оставляют на предприятии в течение срока годности.
3.2. Определение внешнего вида
Внешний вид определяют визуально в проходящем свете.
3.3. Определение цвета и прозрачности среды
3.3.1. Аппаратура и материалы
Баня водяная.
Колбы конические по ГОСТ 25336.
Холодильник стеклянный лабораторный по ГОСТ 25336.
Пробки ватно-марлевые с бумажными колпачками.
Элемент нагревательный (горелка, плитка).
Фотоэлектроколориметр.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.3.2. Проведение испытания
Плотную питательную среду расплавляют в водяной бане в колбе с обратным холодильником или во флаконе с ватно-марлевой пробкой и пергаментным колпачком.
Расплавленную плотную питательную среду наливают в кювету фотоэлектроколориметра с рабочей длиной 5 мм и оставляют на 10-15 мин до застудневания.
Цвет определяют на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре (длина волны 400-440 нм), прозрачность - при желто-оранжевом (580-600 нм) против воды, используемой в качестве оптического контроля.
3.4. Определение прочности геля
3.4.1. Аппаратура и материалы
Весы технические.
Прибор Валента.
Сосуд с плоским дном (кристаллизатор).
Термометр стеклянный лабораторный.
Стаканы и колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336.
Песок кварцевый.
3.4.2. Проведение испытаний
Далее определение проводят по ГОСТ 26185.
3.5. Определение аминного азота
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
рН-метр; иномер ЭВ-74 или другой прибор того же назначения.
Весы ВЛР-500 или другие весы того же класса точности.
Стаканы и колбы лабораторные по ГОСТ 25336.
Пипетки, бюретки по ГОСТ 29227, ГОСТ 29251.
Формалин технический по ГОСТ 1625.
Фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.5.2. Подготовка к испытанию
3.5.3. Обработка результатов
5 - коэффициент разведения;
3.6. Определение содержания полипептидов
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.
Пробирки центрифужные.
Пипетки по ГОСТ 29227.
Центрифуга настольная типа ОПн-8-14.
Натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328, 10%-ный раствор.
Медь сернокислая по ГОСТ 4165, 2%-ный раствор.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию полипептидов в процентах; по оси ординат - оптическую плотность раствора согласно данным, приведенным в табл.2.
Таблица 2
|
|
Концентрация полипептидов, % | Оптическая плотность |
0,1 | 0,14 |
0,2 | 0,26 |
0,3 | 0,37 |
0,4 | 0,49 |
3.6.3. Проведение испытания
Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм против контрольной пробы.
3.6.4. Обработка результатов
Концентрацию полипептидов в плотной питательной среде определяют по калибровочному графику. Полученное значение умножают на 5 (разведение исходной среды).
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 5%.
3.7. Определение массовой доли углеводов
3.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Весы ВЛР-500 или другие весы того же класса точности.
Колбы конические с притертыми пробками по ГОСТ 25336.
Пипетки, бюретки по ГОСТ 29227, ГОСТ 29251.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163, раствор с массовой долей 1%.
Натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей 10%.
Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с массовой долей 10%.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деминерализованная.
3.7.2. Проведение испытания
3.7.3. Обработка результатов
10 - коэффициент разведения;
3.8. Определение концентрации водородных ионов (рН)
3.8.1. Аппаратура, материалы и реактивы
рН-метр, иономер ЭВ-74 или другой прибор того же класса точности.
Растворы стандартные буферные рН 4,0 и 9,18 по ГОСТ 8.135.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деминерализованная.
3.8.2. Подготовка к испытанию
Настраивают рН-метр по буферным растворам рН 4,0 и 9,18 в соответствии с инструкцией к прибору при температурах (20±5) и (40±5)°С.
3.8.3. Проведение испытания
Плотную питательную среду помещают в стаканчик для рН-метрии, погружают в нее электроды и снимают показания при температуре (20±5)°С.
В стаканчик для рН-метрии наливают расплавленную плотную питательную среду (см. п.3.3.2), доводят температуру до (40±5)°С, опускают в нее электроды и снимают показания с поправкой на температуру.
3.9. Определение хлоридов в плотной питательной среде
3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы
рН-метр, иономер ЭВ-74 или другой прибор того же назначения.
pNa-вый электрод (ЭСЛ-51Г или другой прибор того же назначения).
Бюретки по ГОСТ 29251.
Кислота азотная концентрированная по ГОСТ 701.
Квасцы железоаммонийные, насыщенный раствор.
Элемент нагрева (горелка, плитка).
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деминерализованная.
3.9.2. Проведение испытания
3.9.2.1. Определение pNa
3.9.2.2. Определение массовой доли хлоридов
В стеклянный стаканчик помещают плотную питательную среду при температуре (20±5)°С, погружают в нее электроды и снимают показания прибора (pNa).
3.9.3. Обработка результатов
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 0,01%.
3.10. Определение стерильности - по ГОСТ 28085.
3.11. Определение способности поддерживать рост микробов
3.11.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Термостат с температурой нагрева (37±1)°С.
Фотоэлектроколориметр.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336 с ватно-марлевыми пробками, стерильные.
Чашки Петри по ГОСТ 25336, стерильные.
Шпатель стеклянный, стерильный.
Среда МПБ (1:1) по ГОСТ 20730 в пробирках с ватно-марлевыми пробками, стерильная.
Пипетки пастеровские, стерильные.
Культуры тест-штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus "Лоссманов", Escherichia coli, 675, Shigella flexneri, 1a 8516, Corynebacterium diphteroides, 1911.
Хлорид натрия по ГОСТ 4233, 0,85%-ный раствор.
3.11.2. Подготовка к испытанию
3.11.2.1. Хранение и освежение культур
3.11.2.2. Для определения способности плотных питательных сред поддерживать рост микроорганизмов используют 18-20-часовую культуру тест-штаммов, если интенсивность роста бульонных культур соответствует нормам, приведенным в табл.3.
Таблица 3
|
|
Тест-штаммы | Минимальные нормы интенсивности роста, ед. оптической плотности |
1. Staphylococcus aureus | 0,4 |
2. Escherichia coli | 0,5 |
3. Shigella flexneri | 0,15 |
4. Corynebacterium diphteroides | 0,12 |
Интенсивность роста определяют по значению оптической плотности, измеряемому на фото- электроколориметре при длине волны 630-670 нм в кювете с рабочей длиной 5 мм.
3.11.2.3. Плотную питательную среду во флаконах кипятят в водяной бане до полного расплавления, остужают до 50-60 °С и стерильно разливают в 2-3 чашки Петри толщиной слоя не менее 0,4 см. Чашки оставляют до застудневания плотной питательной среды, затем помещают в термостат вверх дном на 16-24 ч.
3.11.3. Проведение испытания
В разведениях определяют значение оптической плотности микробной суспензии на фото- электроколориметре с красным светофильтром (длина волны 630-670 нм) в кюветах с рабочей длиной 5 мм. В качестве оптического контроля используют физраствор.
4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
4.1. Плотные питательные среды транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.
4.2. Плотные питательные среды хранят в закрытом сухом помещении. Температура хранения от 2 до 10°С.
5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Гарантийный срок хранения плотных питательных сред - 2 мес со дня изготовления.