ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.
ГОСТ 28001-88
Группа С19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЗЕРНО ФУРАЖНОЕ, ПРОДУКТЫ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ, КОМБИКОРМА
Методы определения микотоксинов:
Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А
Fodder grain, products of its processing, mixed feeds.
Methods for determination of micotoxins:
T-2 toxin, zearalenon (F-2) and ochratoxin A
ОКСТУ 9209
Дата введения 1990-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 23.12.88 N 4567
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
|
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
4.1 | |
2.1 | |
4.1 | |
3.1 | |
3.1 | |
2.1 | |
3.1 | |
2.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1 | |
4.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1 | |
2.1 | |
2.1 | |
1 | |
1 | |
1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 | |
2.1; 3.1; 4.1 |
5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол 4-94)
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ
Настоящий стандарт распространяется на фуражное зерно, продукты его переработки и все виды комбикормов и устанавливает методы определения токсинов Т-2, зеараленона (Ф-2) и охратоксина А.
Стандарт применяют в ветеринарных лабораториях Госагропрома СССР.
1. ОТБОР ПРОБ
Отбор проб - по ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13496.0, ГОСТ 20239, ГОСТ 12430.
2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-2 ТОКСИНА В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ
Сущность метода заключается в извлечении токсина ацетоном, очистке экстракта от липидов и растительных пигментов с последующей доочисткой на хроматографической колонке и двукратном хроматографировании его на пластинке "Силуфол" со стандартным раствором токсина. Чувствительность метода - 600 мкг/кг кормового средства.
2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Шуттель-аппарат.
Баня водяная, электрическая (2-4-гнездная).
Весы аналитические марки АДВ-200.
Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
___________________
* С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001 (здесь и далее).
Мельница лабораторная электрическая.
Источник ультрафиолетовых лучей с длиной волны 365 нм марки ОИ-18, ВИО-1 или других аналогичных марок.
Шкаф сушильный.
Набор сит.
Испаритель роторный.
Распылитель стеклянный (пульверизатор).
Холодильник.
Электрофен бытовой по ГОСТ 22314.
Мельница шаровая.
Эксикатор диаметром 29 см.
Штатив Бунзена.
Штатив для пробирок.
Воронки стеклянные диаметром 4, 6, 8 см по ГОСТ 25336.
Чашки фарфоровые диаметром 15 см по ГОСТ 9147.
Колонка хроматографическая диаметром 1,8 см, высотой 18-20 см.
Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см.
Камера хроматографическая.
Бумага лабораторная фильтровальная по ГОСТ 7584.
Алюминия окись для хроматографии, 2-й степени активности по Брокману, ч.
Ацетон по ГОСТ 2603, ч. д. а.
Гексан, х. ч.
Кальция окись по ГОСТ 8677, х. ч.
Кальций хлористый плавленый, ч.
Кислота азотная по ГОСТ 4461, х. ч.
Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, х. ч.
Кислота уксусная, ледяная по ГОСТ 61, х. ч.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х. ч.
Серебро азотно-кислое по ГОСТ 1277, ч. д. а.
Силикагель марки КСК.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*.
_________________
* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000 (здесь и далее).
Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.
Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.
Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.
Стандарт микотоксина Т-2.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные метрологические характеристики.
2.2. Подготовка к испытанию
2.2.1. Подготовка проб к испытанию
Из средней пробы фуражного зерна методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 100 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в сухом темном месте.
2.2.2. Подготовка хроматографической колонки
Хроматографическую колонку заполняют в следующей последовательности: вначале помещают тампон гигроскопической ваты, затем 1 г силикагеля, 2 г окиси алюминия и 2 г окиси кальция. Силикагель и окись алюминия вносят небольшими порциями, слегка постукивая по колонке. Для удаления пузырьков воздуха промывают колонку небольшим количеством хлороформа (15-20 см) при отсасывании водоструйным насосом. Окись кальция вносят в колонку в виде хлороформной суспензии при отсасывании водоструйным насосом.
2.2.3. Приготовление растворов и реактивов
2.2.3.1. Приготовление 20%-ного спиртового раствора серной кислоты
2.2.3.2. Приготовление системы растворителей
Растворитель 1. Гексан смешивают с этилацетатом в соотношении 1:1. Высота слоя налитой в хроматографическую камеру жидкости не должна превышать 0,5 см;
Растворитель 2. Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1 или хлороформ смешивают с этилацетатом и уксусной ледяной кислотой в соотношении 17:3:1.
2.2.3.3. Приготовление водного раствора азотно-кислого серебра с массовой долей 2%
2.2.3.4. Приготовление силикагеля
2.2.3.5. Подготовка окиси кальция, силикагеля и пластинки "Силуфол"
Окись кальция, силикагель и пластинки "Силуфол" перед использованием активируют нагреванием в сушильном шкафу при температуре 100 °С в течение 1 ч. Окись кальция предварительно растирают в фарфоровой ступке.
2.2.3.6. Приготовление стандартного раствора микотоксина Т-2
2.3. Проведение испытания
.
2.4. Обработка результатов
Результат считается положительным на наличие токсина Т-2 при обнаружении голубой флюоресценции на пластинке "Силуфол" в исследуемой пробе, соответствующей по положению флюоресценции пятну стандартного раствора Т-2 токсина хотя бы в одной из двух параллельных проб.
3. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЗЕАРАЛЕНОНА (Ф-2)
В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ, ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ И КОМБИКОРМАХ
Сущность метода заключается в экстракции зеараленона (Ф-2) из кормов смесью ацетонитрила и раствора хлористого калия, его очистке и хроматографировании на пластинках "Силуфол" с последующим измерением интенсивности флюоресценции или интенсивности его окрашивания красным прочным ЖЖ в сравнении со стандартным раствором зеараленона. Чувствительность метода 50 мкг/кг кормового средства.
3.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Мельница лабораторная электрическая.
Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
Весы аналитические марки АДВ-200.
Насос водоструйный.
Испаритель роторный.
Баня водяная электрическая (2-4-гнездная).
Источник ультрафиолетовых лучей длиной волны 253 нм марки ВИО-1, или других аналогичных марок или хроматоскоп.
Шуттель-аппарат.
Набор сит.
Распылитель стеклянный (пульверизатор).
Шкаф сушильный.
Электрофен бытовой ГОСТ 22314.
Холодильник.
Штатив Бунзена.
Штатив для пробирок.
Бумага лабораторная фильтровальная по ГОСТ 7584.
Силикагель АСК.
Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см и 20х20 см.
Камера хроматографическая.
Чашки выпарительные фарфоровые на 8 и 15 см.
Воронки стеклянные диаметром 6 см по ГОСТ 25336.
Гексан, х. ч.
Ацетонитрил, ч.
Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.
Бензол по ГОСТ 5955, х. ч.
Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.
Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.
Калий хлористый по ГОСТ 4234, х. ч.
Свинец уксуснокислый по ГОСТ 4166, ч. д. а.
Силикагель АСК по ГОСТ 3956.
Муравьиная кислота по ГОСТ 5848, ч. д. а.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962, с массовой долей 50%.
Диатомовая земля (целит 545).
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.
Красный прочный ЖЖ (п-нитрофенилдиазония тетрафторборат, стабилизированная соль).
Стандарт зеараленона (Ф-2).
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные метрологические характеристики.
3.2. Подготовка к испытанию
3.2.1. Подготовка проб к испытанию
Из средней пробы фуражного зерна или продуктов его переработки и комбикормов методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 150 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в темном месте.
3.2.2. Приготовление растворов и реактивов
3.2.2.1. Приготовление раствора хлористого калия с массовой долей 4%
3.2.2.2. Приготовление раствора уксуснокислого свинца
3.2.2.3. Приготовление раствора красного прочного ЖЖ с массовой долей 0,05%
3.2.2.4. Приготовление системы подвижных растворителей
Растворитель 1. Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1.
Растворитель 2. Бензол смешивают с ацетонитрилом в соотношении 98:2.
3.2.2.5. Приготовление стандартного раствора зеараленона
3.3. Проведение испытания
ой.
3.3.3. Для определения содержания зеараленона проводят одномерную или двухмерную тонкослойную хроматографию на пластинках "Силуфол".
3.3.3.2. Двухмерную тонкослойную хроматографию проводят в случае невозможности достаточной очистки экстрактов или сомнения в результатах исследований при проведении одномерной хроматографии. Для этого используют пластинку "Силуфол" размером 20х20 см. Растворы наносят по схеме, указанной на чертеже:
I - система бензол - ацетон;
II - система толуол - этилацетат - муравьиная кислота
Хроматограмму проявляют в системе бензол - ацетон (98:2) в направлении I до уровня, на 1,5-2 см не достигающего точки С. Затем ее просушивают и просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 253 нм и возможные пятна зеараленона отмечают карандашом. Затем хроматограмму проявляют в направлении II в системе толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1) до уровня, не достигающего 1,5-2 см точки В. Пластинку просушивают, просматривают под ультрафиолетовыми лучами и на уровне стандартного раствора относительно точек С, D, Е и точки В определяют наличие зеараленона в исследуемой пробе.
3.4. Обработка результатов
12,5 - масса пробы корма, соответствующая объему экстракта подвергнутого очистке, г.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результат вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.
4. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ОХРАТОКСИНА А В ФУРАЖНОМ ЗЕРНЕ,
ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ И КОМБИКОРМАХ
Сущность метода заключается в извлечении микотоксина из кормов смесью хлороформа и раствора ортофосфорной кислоты, двойной переэкстракции микотоксина и проведении тонкослойной хроматографии. Чувствительность метода - 10 мкг/кг кормового средства.
4.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Баня водяная, электрическая (2-4-гнездная).
Весы аналитические марки АДВ-200.
Весы лабораторные 2-го класса точности по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
Мельница лабораторная электрическая.
Источник ультрафиолетовых лучей длиной волны 365 нм марки ВИО-1, ОЛД-41, ОИ-18 или других аналогичных марок.
Набор сит.
Распылитель стеклянный (пульверизатор).
Шкаф сушильный.
Холодильник.
Шуттель-аппарат.
Электрофен бытовой по ГОСТ 22314.
рН-метр.
Штатив Бунзена.
Штатив для пробирок.
Камера хроматографическая.
Воронки стеклянные диаметром 3, 8 см по ГОСТ 25336.
Чашки фарфоровые выпарительные диаметром 8 см.
Бумага фильтровальная.
Пластинки хроматографические "Силуфол" с флюоресцентным слоем марки ИУ-254, размером 15х15 см.
Хлороформ для наркоза по ГОСТ 20015.
Бензол по ГОСТ 5955, х. ч.
Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х. ч.
Толуол по ГОСТ 5789, ч. д. а.
Этилацетат по ГОСТ 22300, ч.
Аммиак водный по ГОСТ 3760.
Стандарт охратоксина А.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Примечание. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства измерений, имеющие аналогичные или лучшие метрологические характеристики.
4.2. Подготовка к испытанию
4.2.1. Подготовка проб к испытанию
Из средней пробы фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов методом квартования выделяют часть пробы массой не менее 150 г, которую размалывают на электромельнице до такого состояния, чтобы она проходила без остатка через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Подготовленную для испытания пробу хранят в стеклянной колбе с крышкой в сухом темном месте.
4.2.2. Приготовление растворов и реактивов
4.2.2.1. Приготовление системы подвижных растворителей
Толуол смешивают с этилацетатом и муравьиной кислотой в соотношении 6:3:1.
4.2.2.3. Приготовление подкисленного раствора хлороформа
4.2.2.5. Приготовление стандартного раствора охратоксина А
4.3. Проведение испытания
4.3.3. Наличие охратоксина А в корме определяют качественно и полуколичественно.
4.3.3.1. Качественное определение охратоксина А
Пластинку помещают в вертикальном положении в хроматографическую камеру, заполненную системой растворителей толуол - этилацетат - муравьиная кислота (6:3:1). После того, как фронт растворителей поднимется на высоту 10-12 см старта, пластинку вынимают из камеры, подсушивают в токе теплого воздуха до удаления запаха растворителей и просматривают под источником ультрафиолетовых лучей с длиной волны 365 нм. Сравнивая зелено-голубое свечение стандартного раствора охратоксина А с характером свечения исследуемой пробы, делают предварительный вывод о наличии или отсутствии в исследуемой пробе корма микотоксина. С целью подтверждения наличия охратоксина А в исследуемой пробе хроматограмму помещают на 5 мин в камеру с парами аммиака, под воздействием которых охратоксин А изменяет флюоресценцию от зелено-голубой до темно-голубой. В случае качественного выявления в исследуемой пробе охратоксина А, проводят полуколичественное определение микотоксина.
4.3.3.2. Полуколичественное определение содержания охратоксина А
0,001 - минимальное количество охратоксина А, выявляемое на пластинке "Силуфол" под источником УФЛ, мкг;
2 - коэффициент, учитывающий потери вещества в ходе анализа.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений. Результат вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.
Текст документа сверен по:
официальное издание
Комбикорма. Часть 5. Корма.
Комбикорма. Комбикормовое сырье.
Премиксы. Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2002