ГОСТ 28038-2013. Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения микотоксина патулина.

Главная/

Нормы и стандарты/

ГОСТ 28038-2013 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения микотоксина патулина.

ГОСТ 28038-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ

Методы определения микотоксина патулина

Fruit and vegetable products. Methods for determination of micotoxin patulin

МКС 67.050,

67.080

Дата введения 2014-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией "Российский союз производителей соков" (РСПС) при участии Федерального государственного бюджетного учреждения "Научно-исследовательский институт питания" Российской Академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ питания" РАМН) и закрытого акционерного общества "Мултон"

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 марта 2013 г. N 55-П)

За принятие проголосовали:


Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Азербайджан	AZ	Азстандарт
Армения	AM	Минторгэкономразвития
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Молдова	MD	Молдова-Стандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

(Поправка. ИУС N 7-2016), (Поправка. ИУС N 1-2022).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 310-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 28038-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.

5 В разделе 6 настоящего стандарта учтены основные положения документа Рекомендации N 02* "Определение патулина" [IFU Recommendation No. 2 "Determination of Patulin", Revised in 2005 Международной федерации производителей соков (International Federation of Fruit Juice Producers - IFU)]

6 ВЗАМЕН ГОСТ 28038-89

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ВНЕСЕНЫ: поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2016 год; поправка, опубликованная в ИУС N 1, 2022 год, введенная в действие с 23.08.2021

Введение

При подготовке настоящего стандарта учитывались действующие международные, межгосударственные стандарты, правила, постановления и законы.

В стандарте описаны методы определения массовой концентрации (массовой доли) микотоксина патулина: метод тонкослойной хроматографии и метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).

В терминологических статьях в круглых скобках приведены эквиваленты терминов на английском языке.

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей, в том числе на соковую продукцию: фруктовые соки и нектары, фруктовые концентрированные соки, фруктовые пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки, соковую продукцию обогащенную и для детского питания, и устанавливает следующие методы определения массовой концентрации (массовой доли) микотоксина патулина:

- метод тонкослойной хроматографии;

- метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).

Нижний предел определения массовой концентрации (массовой доли) патулина методом тонкослойной хроматографии - 10 мкг/дм

(10·10

%).

Нижний предел измерений массовой концентрации микотоксина патулина методом ВЭЖХ составляет 10 мкг/дм

, массовой доли - 10·10

%, верхний предел измерений массовой концентрации микотоксина патулина составляет 75 мкг/дм

, массовой доли - 75·10

Предел обнаружения патулина методом ВЭЖХ составляет 1 мкг/дм

или 1·10

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ ИСО 5725-1-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003* Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4207-75 Реактивы. Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия

ГОСТ 5823-78 Реактивы. Цинк уксуснокислый 2-водный. Технические условия

ГОСТ 5848-73 Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 5956-78 Суперфосфат гранулированный из апатитового концентрата без добавок и с добавками микроэлементов. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 20490-75 Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия

ГОСТ 22300-76 Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 микотоксин патулин (mycotoxin patulin): Поликетидный лактон, вещество, продуцируемое некоторыми грибами родов Penicillium, Aspergillus и Byssochlamys; химическое название: 4-гидрокси-4H-фуро[2,3-е]пиран-2(6Н)-ОН.

4 Отбор и подготовка проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671.

5 Метод тонкослойной хроматографии

5.1 Сущность метода

Метод основан на экстракции патулина из продукта органическим растворителем, очистке экстракта от мешающих веществ и определении патулина с помощью тонкослойной хроматографии. Нижний предел определения патулина - 10 мкг/дм

(10·10

%).

5.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы, материалы

Весы лабораторные специального класса точности с наибольшим пределом взвешивания не более 120 г со значением среднеквадратического отклонения (СКО), не превышающим 0,03 мг, и с погрешностью от нелинейности не более ±0,06 мг.

Весы лабораторные среднего класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 г.

Спектрофотометр с диапазоном измерения, позволяющим проводить исследования при длине волны 275 нм, с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более ±1%; кюветы кварцевые с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 230 мм и внутренним диаметром 25 мм.

Испаритель ротационный вакуумный.

Насос водоструйный лабораторный по ГОСТ 25336.

Микрошприц градуированный вместимостью 10 мм

ценой деления 0,1 мм

Камера для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой.

Облучатель ультрафиолетовый лабораторный с ртутно-кварцевой лампой высокого давления, оснащенный оптическим фильтром, отсекающим излучение в видимой части спектра, обеспечивающий освещенность поверхности площадью не менее 250 см

, интенсивностью излучения, позволяющей надежно визуализировать пятно патулина массой 10 нг.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с пределами измерения 0 °С - 100 °С и ценой деления шкалы не более 1 °С.

Посуда мерная лабораторная стеклянная по ГОСТ 1770:

цилиндры 1-50-2, 1-100-2;

колбы мерные 4-100-2, 4-250-2, 4-1000-2 и 4-2000-2;

пробирки 1-10-0,1 ХС и 1-20-0,1 ХС.

Пипетки градуированные 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 и 1-2-2-25 по ГОСТ 29227.

Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

стаканы В-1-50 и В-1-150;

воронки лабораторные В-56-80 ХС;

воронка делительная с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см

;

колба плоскодонная П-2-250;

колба грушевидная Гр-100-14/23;

колба остродонная О-25-14/23.

Эксикатор по ГОСТ 25336 с краном, с диаметром корпуса 250 мм.

Вставка для эксикатора по ГОСТ 9147 диаметром 230 мм исполнения 2.

Воронка капельная по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см

Распылитель стеклянный с грушей.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 марки Ф.

Вата по ГОСТ 5556.

Силикагель для колоночной хроматографии размером частиц 100-160 мкм или 100-250 мкм.

Пластины для тонкослойной хроматографии на алюминиевой подложке размером 15х15 см со слоем силикагеля размером частиц в диапазоне от 5 до 17 мкм.

Патулин (

) массовой долей основного вещества не менее 95%.

Хлороформ очищенный высшего сорта по ГОСТ 20015

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.

Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х.ч., раствор концентрации 150 г/дм

(раствор Карреза I).

Цинк уксуснокислый 2-водный по ГОСТ 5823, ч.д.а., раствор концентрации 300 г/дм

(раствор Карреза II).

Эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, ч.д.а. (этилацетат).

Ацетон по ГОСТ 2603, х.ч.

Толуол по ГОСТ 5789, ч.д.а.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч.д.а.

Бензидин массовой долей основного вещества не менее 95%, раствор в муравьиной кислоте массовой концентрацией 5 г/дм

Азот чистотой не менее 99%, сжатый газ в баллоне, снабженном редуктором с гибким шлангом, на конце которого имеется стеклянный, пластиковый или металлический наконечник диаметром выходного отверстия 0,5-1 мм.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, прокаленный, х.ч.

Калий марганцовокислый по ГОСТ 20490, х.ч., раствор массовой концентрацией 15 г/дм

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Бензол по ГОСТ 5956, ч.д.а.

Ацетонитрил массовой долей основного вещества не менее 99,5%

Патулин (

), стандартный образец состава раствора патулина в смеси бензола с ацетонитрилом аттестованным значением массовой концентрации 10,0 мкг/см

и относительной погрешностью аттестованного значения массовой концентрации не более ±5%.

Допускается использование пластин для тонкослойной хроматографии меньшего размера при условии, что они обеспечивают отделение пятна патулина от пятен других компонентов матрицы пробы в условиях хроматографического анализа по 5.4.4.

Все растворители, используемые при выполнении операций экстракции и очистки экстракта, проверяют на пригодность путем проведения холостого испытания по 5.4.6 и, в случае выявления их непригодности, подвергают дополнительной очистке дистилляцией или другими способами.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5.3 Подготовка к проведению определения

5.3.1 Приготовление градуировочного (основного) раствора патулина

В качестве градуировочного раствора рекомендуется использовать стандартный образец состава раствора патулина в смеси бензола с ацетонитрилом. При отсутствии стандартного образца состава раствора патулина градуировочный раствор готовят следующим образом.

В стакан помещают навеску патулина массой около 5 мг и пипеткой добавляют 10 см

смеси бензола с ацетонитрилом (9:1). Содержимое стакана аккуратно взбалтывают до полного растворения кристаллов патулина и переносят в мерную колбу вместимостью 100 см

. Стакан ополаскивают еще двумя порциями по 10 см

смеси бензола с ацетонитрилом (9:1), каждый раз перенося содержимое в ту же мерную колбу. Объем в колбе доводят до метки смесью бензола с ацетонитрилом (9:1), содержимое тщательно перемешивают. 20 см

полученного раствора пипеткой переносят в другую мерную колбу такой же вместимости. Объем в колбе доводят до метки смесью бензола с ацетонитрилом (9:1), содержимое тщательно перемешивают. Полученный градуировочный раствор хранят в холодильнике в закрытом сосуде. Срок годности раствора патулина - 6 мес.

Точную концентрацию патулина в градуировочном растворе определяют спектрофотометрическим методом. Для этого пипеткой 6,0 см

градуировочного раствора переносят в отгонную колбу. Раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С до объема около 0,5 см

, остаток растворителя удаляют в слабом токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 9,0 см

этилового спирта и определяют оптическую плотность полученного раствора в кювете с рабочей длиной 1 см по отношению к контрольному раствору на спектрофотометре при длине волны 275 нм. В качестве контрольного раствора используют этиловый спирт.

Массовую концентрацию патулина в градуировочном растворе

, мкг/см

, вычисляют по формуле

, (1)

где

- молярная масса патулина,

154 г/моль;

- оптическая плотность раствора;

- коэффициент разведения,

1,5;

- поправочный коэффициент к спектрофотометру, определяемый по приложению А;

- рабочая длина кюветы, см;

- молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 275 нм, (

1,46·10

дм

·моль

·см

5.4. Проведение испытания

5.4.1 Приготовление водной вытяжки из пробы

Пробу для анализа соков и сокосодержащих напитков объемом 50,0 см

, соков с мякотью и пюре массой 50,0 г, повидла, джема, варенья, фруктового порошка массой 25,0 г помещают в стеклянный стакан, смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см

. В мерную колбу вносят 15 см

раствора Карреза I и 15 см

раствора Карреза II. Содержимое колбы доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют в мерный цилиндр через бумажный складчатый фильтр.

5.4.2 Экстракция

Цилиндром отмеряют 50 см

фильтрата и переносят его в делительную воронку. Этим же цилиндром отмеряют 50 см

этилацетата, переносят его в делительную воронку и в течение 1 мин интенсивно перемешивают содержимое. Смеси дают отстояться и после полного разделения водный нижний слой сливают обратно в цилиндр, а этилацетатный экстракт переносят в сухую плоскодонную колбу. Экстрагирование остатков патулина из водной фазы проводят еще раз в аналогичных условиях свежей порцией этилацетата. При этом после одноминутного перемешивания в делительную воронку вносят 10 г хлористого натрия и продолжают перемешивать еще в течение 0,5 мин. После разделения слоев водную фазу отбрасывают, а объединенные этилацетатные экстракты обезвоживают в плоскодонной колбе добавлением 15-20 г сернокислого натрия. После обезвоживания экстракт фильтруют через ватный тампон в отгонную грушевидную колбу. Оставшийся сернокислый натрий ополаскивают двумя порциями этилацетата объемом по 10 см

, которые затем также фильтруют в отгонную колбу. Экстракт выпаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С до объема около 1 см

5.4.3 Очистка экстракта

На дно стеклянной колонки помещают ватный тампон, поверх которого насыпают слой сернокислого натрия толщиной 5 мм. В колонку вносят суспензию 2 г силикагеля с 15 см

бензола. Не давая просохнуть слою силикагеля, поверх него насыпают слой сернокислого натрия толщиной 10 мм. Бензолу дают стечь, после чего на верхний слой сернокислого натрия наносят экстракт, подготовленный по 5.4.2. Экстракту дают полностью впитаться в фильтрующий слой. Отгонную колбу ополаскивают 0,5 см

этилацетата, смыв переносят на колонку и дают ему полностью впитаться в фильтрующий слой.

В колонку вносят 25 см

бензола, дают ему полностью пройти через фильтрующий слой, выходящий элюат отбрасывают. В колонку вносят 100 см

смеси бензола с этилацетатом (3:1). С этого момента начинают отбирать выходящий элюат. После прекращения выхода растворителя из колонки элюат переносят в остродонную колбу и выпаривают на ротационном испарителе при температуре не более 40 °С до объема около 0,5 см

. Остаток растворителя удаляют в слабом токе азота при комнатной температуре. Сухой остаток в отгонной колбе растворяют в 0,2 см

смеси бензола с ацетонитрилом (объемное соотношение 9:1). Полученный раствор используют для хроматографического анализа.

Полная версия документа доступна с 20.00 до 24.00 по московскому времени.

Для получения доступа к полной версии без ограничений вы можете выбрать подходящий тариф или активировать демо-доступ.

Теги документа

гост продукты переработки гост продукты переработки овощей гост продукты переработки плодов